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外周血白細(xì)胞的分離

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-10-12  來(lái)源:上海源葉生物科技有限公司
核心提示:1.自然沉降法 人外周血紅細(xì)胞與白細(xì)胞的比例約為6000~1000:1,兩類(lèi)細(xì)胞的沉降速度不同,據(jù)此加以分離。自然沉降法是利用紅細(xì)胞


1.自然沉降法 
人外周血紅細(xì)胞與白細(xì)胞的比例約為6000~1000:1,兩類(lèi)細(xì)胞的沉降速度不同,據(jù)此加以分離。自然沉降法是利用紅細(xì)胞自然沉降率較快加以分離。該法簡(jiǎn)便易行,對(duì)細(xì)胞損傷少,但純度差。
【試劑及配制】
(1) 無(wú)Ca2+、Mg2+ Hank’s液
(2) 含10%~20% 滅活小牛血清Hank’s液
【操作方法】
(1) 取靜脈血2ml,放入加有抗凝劑的試管中,輕輕混勻;
(2) 將試管直立靜置于室溫或37℃溫箱中30~60min,待紅細(xì)胞自然沉降。此時(shí)可見(jiàn)試管中的懸液分3層,上層為淡黃色血漿,底層為紅細(xì)胞,在緊貼紅細(xì)胞層上有一呈灰白色的白細(xì)胞層;
(3) 用毛細(xì)管吸取位于紅細(xì)胞層上面的富含白細(xì)胞的細(xì)胞懸液,移入另一試管中;
(4) 加入無(wú)Ca2+、Mg2+Hank’s液至離試管口3cm處,混勻,以水平離心機(jī)2000r/min 離心10min,棄上清,同法在洗滌兩次;
(5) 沉淀細(xì)胞用適量10%~20% 滅活小牛血清的Hank’s液重懸,計(jì)數(shù),配成所需的細(xì)胞濃度的懸液,一般常用2×106/min。
2.加速紅細(xì)胞沉降法 
利用高分子量的聚合物促使紅細(xì)胞凝聚成串錢(qián)狀,從而加速紅細(xì)胞沉降,使之與白細(xì)胞分離。常用的高分子聚合物有明膠、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)及甲基纖維素等。
【試劑及配制】
(1) 3%明膠(粘度為25泊以上):選取明膠,用生理鹽水配成3%溶液,置沸水浴加熱溶解,分裝,高壓蒸汽滅菌8磅15~20min。
(2) 6%右旋糖酐(分子量200~400KD):用生理鹽水配制。
【操作方法一】
(1) 取抗凝靜脈血加入等量3%明膠鹽水溶液中,混勻;
(2) 將試管直立靜置室溫或37℃溫箱中30~60min,利用明膠與紅細(xì)胞的粘合作用,促使紅細(xì)胞快速下沉,而白細(xì)胞留在明膠溶液中;
(3) 用毛細(xì)吸管吸取富含白細(xì)胞的上層液,移入另一試管中;
(4) 按上述自然沉降法(4)~(5)操作。
【操作方法二】
(1)取抗凝靜脈血加入等量6%右旋糖酐溶液中,混勻;
(2)按操作方法一的(2)~(4)操作。

編輯:songjiajie2010

 
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