3. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:

含有細(xì)胞分泌蛋白和死細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)液。

將細(xì)胞培養(yǎng)上清液吸入離心管中并以 1000×g 離心 20 分鐘，除去細(xì)胞碎片和雜質(zhì)，收集上清液備用，樣本保存在-20℃或-80℃，避免反復(fù)凍融。

4. 細(xì)胞裂解液:

經(jīng)細(xì)胞裂解液裂解后的細(xì)胞溶液。

（1）吸出培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用胰蛋白酶消化細(xì)胞，然后加入適量的培養(yǎng)基將培養(yǎng)板上的細(xì)胞沖洗干凈。 懸浮細(xì)胞可以省略該步驟。

（2）將細(xì)胞懸浮液收集到離心管中，以 1000×g 離心 10 分鐘，然后吸去培養(yǎng)基，用預(yù)冷PBS 洗滌細(xì)胞 3 次。

（3）加入適量的預(yù)冷 PBS（建議在使用前立即加入蛋白酶抑制劑）重懸細(xì)胞。在 6 孔培養(yǎng)板中，每個(gè)孔 需要 150-250μL 的 PBS 來(lái)重懸細(xì)胞。

（4）使樣本在-20℃或-80℃條件和室溫條件下反復(fù)凍融，重復(fù)凍融過(guò)程數(shù)次，直至細(xì)胞全裂解。也可 以使用超聲波細(xì)胞破碎器超聲處理懸浮液來(lái)裂解細(xì)胞。

（5）4℃下以 10,000×g 離心 10 分鐘，去除細(xì)胞碎片，收集上清液， -20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。