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植物基因組DNA提取試劑盒-MagExtractor®-Plant Genome-

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-05-22
產(chǎn)品索引 5871
中文名稱: 植物基因組DNA提取試劑盒
英文名稱: MagExtractor®-Plant Genome-
產(chǎn)品編號(hào): NPK- 500

產(chǎn)品類別:

分子生物學(xué)
生產(chǎn)廠家: TOYOBO
產(chǎn)品價(jià)格: 800元
產(chǎn)品規(guī)格: 50次
Nucleic Acid Purification Kit
MagExtractor
-Plant Genome-
 
 
使用說明書
 (Code No.:NPK- 500)
  TOYOBO CO., LTD. Biochemical Operations Department
OSAKAJAPAN
—目錄—
目錄                                                                                            頁數(shù)
 1.前言.......................................................................................................................... 1
2.使用前須知.............................................................................................................. 1
3.試劑盒中所包含的物品.......................................................................................... 2
4.操作程序.................................................................................................................. 2
     1]試劑盒以外所需要的其他物品...................................................................... 2
         (1)試劑............................................................................................................. 2
         (2)器具及器材................................................................................................. 3
     2]抽提流程.......................................................................................................... 3
     3]樣品前處理...................................................................................................... 4
     4]使用MFX-2000進(jìn)行Plant DNA抽提......................................................... 4
         (1)操作程序的選擇......................................................................................... 4
         (2)加溫block以及回收block溫度的設(shè)定.................................................. 4
         (3)附帶專用過濾器的tip安裝....................................................................... 5
         (4)專用試管的安裝......................................................................................... 5
         (5)試劑的安裝................................................................................................. 6
         (6)樣品的安裝................................................................................................. 8
         (7)抽提開始..................................................................................................... 8
         (8)樣品的回收................................................................................................. 8
     5]使用手工方法進(jìn)行Plant DNA抽提............................................................. 8
5.一般樣品的分析...................................................................................................... 9
     1]DNA定量測(cè)定................................................................................................ 9
     2]電泳............................................................................................................... 10
     3]PCR............................................................................................................... 10
6.抽提實(shí)例................................................................................................................ 10
7.疑難解答................................................................................................................ 11
 
注意事項(xiàng)
 
本試劑盒中所包含的所有試劑屬研究用試劑。請(qǐng)不要用于診斷或臨床等場(chǎng)合。在使用本試劑盒的時(shí)候,請(qǐng)嚴(yán)格遵守常用的實(shí)驗(yàn)室安全操作程序。
Hoffman-La Roche Ltd.擁有PCR方法的專利權(quán)。

1.前言
MagExtractor-Plant Genome-利用在Chaotrpic(鹽)的情況下,DNA吸附于硅膠表面的特性,進(jìn)行plant DNA的抽提。本試劑盒與自動(dòng)核酸抽提裝置MFX-2000并用,可簡便地從植物葉及植物培養(yǎng)細(xì)胞等植物樣品中抽提出高純度的plant DNA。另外,本試劑盒也可用作手動(dòng)抽提用試劑盒而加以使用。
 
特征
·本試劑盒用于從植物標(biāo)本如培養(yǎng)細(xì)胞和葉子以及其它植物組織中進(jìn)行DNA抽提。
·無需進(jìn)行乙醇沉淀,可以實(shí)現(xiàn)快速抽提。
·不使用苯酚。
·不使用RNase。
·所抽提的DNA被回收到TE緩沖液中,可以被直接用于PCR或者其它分析方法。
 
2.使用前須知
·MagExtractor-Plant Genome-適用于以下樣品:
對(duì)應(yīng)樣品
樣品量
主要用途
植物標(biāo)本,如葉子以及培養(yǎng)細(xì)胞
0.010.1g
PCR
參見第十頁“6. 抽提實(shí)例”。
 
·有關(guān)溶解液的儲(chǔ)存
由于本試劑盒是在低溫下進(jìn)行儲(chǔ)存以及運(yùn)輸,因此溶劑中的表面活性劑成分將有所沉淀。按照以下的步驟,請(qǐng)?jiān)谑覝兀?0~30℃)下進(jìn)行相應(yīng)的溶解以及儲(chǔ)存。從溶劑的表面上看,有些情況下可能沒有任何沉淀出現(xiàn),但是,可能已形成了透明凝塊,故在使用之前,務(wù)必進(jìn)行以下操作。同樣,如果在儲(chǔ)存期間產(chǎn)生沉淀,也進(jìn)行相同的操作并進(jìn)行溶解。其它試劑請(qǐng)?jiān)?℃下進(jìn)行儲(chǔ)存。
(參照第2頁“[3] 試劑盒中包含的物品”。)
 
(1)在50℃的水浴下,加熱10分鐘。
(2)輕輕地上下轉(zhuǎn)動(dòng)瓶子以溶解沉淀的凝塊。(劇烈搖動(dòng)會(huì)形成泡沫。)
(3)在50℃的水浴下中,再次加熱5分鐘。
(4)輕輕地上下轉(zhuǎn)動(dòng)瓶子以進(jìn)行完全溶解。
如果在溶液中仍然有一些未溶解的部分,則在水浴下中再次加熱5分鐘并上下轉(zhuǎn)動(dòng)混合直到未溶解的部分完全被溶解。
(可能會(huì)形成透明凝塊,請(qǐng)進(jìn)行兩次檢查以確保完全溶解。)
 
·建議在室溫(20~30℃)下使用本試劑盒。低溫會(huì)導(dǎo)致溶劑成分的沉淀可能會(huì)影響
本試劑盒的性能。
3.試劑盒中所包含的物品
在本試劑盒中含有可以抽提出100份RNA樣品的試劑。請(qǐng)?jiān)谝韵碌臏囟认聝?chǔ)存這些試劑:
試劑
容量
儲(chǔ)存
溶解液
40ml
溶解后,在室溫(20~30℃)下保存。
吸附液
90ml
4
洗凈液
200ml
4
磁珠
5ml
4
·分別以各自規(guī)定的溫度進(jìn)行保存,并且在使用之前請(qǐng)先將它們回復(fù)到室溫狀態(tài)。另外,也可以在室溫(25℃以下)下進(jìn)行(1個(gè)月內(nèi))短期儲(chǔ)存。
·吸附液以及洗凈液含有高濃度的蛋白質(zhì)變性劑。在處理時(shí)應(yīng)小心謹(jǐn)慎并戴上手套以及其它防護(hù)用具并且實(shí)施適當(dāng)?shù)陌踩A(yù)防措施。萬一試劑沾在手或者皮膚上,請(qǐng)用清水充分清洗。如若碰到眼睛,請(qǐng)立刻用清水清洗,然后去看醫(yī)生。
·如果使用本公司的MFX-2000自動(dòng)核酸抽提裝置,請(qǐng)將所需的量倒入指定的試管中,并將其安裝在規(guī)定的位置上。
(參照第6頁“4 - [4] -5)試劑的安裝”。)
 
4.操作程序
1]試劑盒需要的其他物品
(1)試劑
·液氮
·氯仿/異戊醇
將氯仿:異戊醇*1以比例24:1(體積比)混合
·滅菌水
市場(chǎng)上銷售的純水或者經(jīng)過高溫高壓蒸汽滅菌消毒處理過的milli Q水。
·乙醇
99.5%以上的特級(jí)品。用于手動(dòng)抽提時(shí),請(qǐng)使用70%的乙醇。
·TE緩沖液(pH 8.0)
10mM Tris-HCI(pH 8.0),lmM EDTA(pH 8.0)
 
*1又被稱為3-甲基-1-丁醇。
 
(2)器具及器材
·微量移液器
·微量移液器用tip
·(具有大約3,000到12,000 rpm的)臺(tái)式離心機(jī)
·加溫block(也可以是水浴槽,65℃)
·1.5ml微型試管
 
當(dāng)使用MFX-2000時(shí):
·抽提專用試管(Code No.:MFX-301).......................................... 用于樣品回收
·抽提專用6連試管(Code No.:MFX-302)................................... 用于進(jìn)行抽提
·附帶專用過濾器的tip(Code No.:MFX-402)
·安裝試劑用試管(50ml、15ml、2ml)*1
 
 
2]抽提流程
經(jīng)簡單的前處理之后,MagExtractor -Plant Genome-可以使用MFX-2000進(jìn)行自動(dòng)抽提。以下是關(guān)于抽提流程的說明。

使用液氮的凍結(jié)樣品
使用MFX-2000進(jìn)行抽提
 


←溶解液........................................................................................................ [細(xì)胞分解]
←在65℃下進(jìn)行10分鐘
←氯仿抽提.............................................................................................. [多聚糖的去除]
←吸附液                                                            前處理約15分鐘
 
 
←磁珠:大約2分鐘................................................................................... DNA的吸附]
B/F分離
←洗凈液:大約5秒(2次).......................................................... [非特異吸附物的去除]
B/F分離
70%的乙醇:大約5秒(2次).................................................. [蛋白質(zhì)變性劑的去除]
B/F分離
←抽提液(TE):大約2分鐘...................................................................... DNA的溶出]
B/F分離
上清液的回收(100 μl                    自動(dòng)抽提總共耗時(shí)大約1012分鐘
 
即使用當(dāng)手工方法進(jìn)行抽提,在前處理之后,DNA抽提也只需耗時(shí)約十五分鐘。(參照第八頁上的“[4- 5使用手工方法進(jìn)行Plant DNA抽提”。)

 3]樣品前處理
進(jìn)行DNA抽提時(shí)使用MagExtractor-Plant Genome-試劑盒進(jìn)行DNA抽提時(shí)要求對(duì)所使用的樣品進(jìn)行前處理。(參照第三頁上的“[4] –[2]抽提流程”。)
根據(jù)以下步驟,進(jìn)行前處理。
 
(1)將儲(chǔ)存在液氮中的0.01~0.1g的樣品磨碎。(快速進(jìn)行該項(xiàng),并同時(shí)補(bǔ)充液氮以避免樣品融解。)
(2)將樣品移入1.5ml試管中。(使用液氮或者其它方法對(duì)使用的藥匙及試管進(jìn)行提前冷卻以避免已磨碎的樣品被融解。)
(3)在樣品中添加300μl的溶解液并進(jìn)行充分混合。(確認(rèn)其沒有沉淀后再進(jìn)行添加。如果有沉淀,請(qǐng)參照第一頁“2. 使用前須知”并對(duì)沉淀進(jìn)行溶解。)
(4)使用旋渦混合器,劇烈振動(dòng)10秒鐘。(只有將樣品完全浸沒溶劑之后,才能進(jìn)行振動(dòng)。)
(5)在65℃下培育10分鐘。(使用旋渦混合器,每隔3到4分鐘進(jìn)行共2次的劇烈攪拌,每次5秒鐘。)
(6)添加300μl的氯仿/異戊醇。
(7)劇烈混合3~5秒鐘。(旋渦混合器可能無法使溶液被完全均勻地混合,可用手劇烈搖動(dòng)使其混合。)
(8)用離心機(jī)以12,000 rpm的速度進(jìn)行1分鐘的離心。(根據(jù)樣品的不同情況,可能會(huì)有少量的沉淀。如果發(fā)生了這種情況,請(qǐng)?jiān)儆秒x心機(jī)進(jìn)行2~3分鐘的離心。)
(9)將250μl的上清液回收到一個(gè)未使用過的1.5ml試管中。(如果上清液少于250μl,則必須非常仔細(xì)地進(jìn)行操作,同時(shí)對(duì)溶液界面進(jìn)行抽吸以回收上清液。上清液的量因樣品而有所不同。
例:         0.1g的煙草大約有250μl
                                                    0.1g的水稻植物大約有200μl
(10)添加600μl的吸附液。
(如果上清液少于100μl,則添加750μl吸附液。)
 4]使用MFX-2000進(jìn)行Plant DNA抽提
在使用MFX-2000之前,請(qǐng)務(wù)必通讀完其使用說明書。
(1)操作程序的選擇
現(xiàn)在可供使用的MFX-2000程序可針對(duì)DNA、Total RNA、質(zhì)粒DNA等的抽提。使用MagExtractor-Plant Genome-請(qǐng)用第13號(hào)操作程序。
 
(2)加溫block以及回收block溫度的設(shè)定
將加溫block以及冷卻 block設(shè)定成如下所述的溫度:
  加溫block 冷卻 block
溫度設(shè)定 OFF 10℃
·由于不使用加溫 block,請(qǐng)切斷其電源。
·使用簡易保冷block時(shí),請(qǐng)將block事先置于冷藏庫或是低溫室進(jìn)行予冷。簡易保冷可用于回收液的臨時(shí)保冷。
(3)附帶專用過濾器的tip安裝
將具有專用過濾器的tip安裝在tip架上。相關(guān)數(shù)量,請(qǐng)參見以下表格。
·請(qǐng)務(wù)必使用附帶專用過濾器的tip(Code No.:MFX-402)。
·tip已經(jīng)過γ射線消毒。在進(jìn)行安裝時(shí),一定要使用手套。
·安裝超過規(guī)定數(shù)量的tip不會(huì)引起任何問題。
·將必要量的tip從左下方開始,垂直地排列在tip架上。有關(guān)安裝位置的更多細(xì)節(jié),請(qǐng)參見MFX-2000使用說明書。
 
樣品數(shù)
tip數(shù)
樣品數(shù)
tip數(shù)
1
6
13
39
2
8
14
41
3
10
15
43
4
12
16
45
5
17
17
50
6
19
18
52
7
21
19
54
8
23
20
56
9
28
21
61
10
30
22
63
11
32
23
65
12
34
24
67
                                
 (4)專用試管的安裝
根據(jù)樣品個(gè)數(shù),將專用試管(編號(hào).:MFX-301)或者特制的6連試管(編號(hào):MFX-302)安裝在抽提架的A到F的插槽以及回收block上。
·除了以上提及的專用試管,不得將其它試管安裝在抽提架中,否則容易產(chǎn)生故障。
·專用試管(編號(hào):MFX-301)以及帶螺旋帽的1.5ml試管*1被設(shè)置在回收block中。
·有關(guān)設(shè)置位置的更多細(xì)節(jié),請(qǐng)參照MFX-2100使用說明書。
 
*Assist試管(編號(hào):72.692)等

 
(5)試劑的安裝
將試劑注入到規(guī)定的試管中并將它們安裝在指定的試劑架上。
·確認(rèn)每種試劑是否都已回復(fù)到室溫。
·試劑的必需量依據(jù)樣品的數(shù)量而定。請(qǐng)參照下頁的表格,安裝試劑。
·在進(jìn)行分裝之前,請(qǐng)充分地?cái)噭?dòng)磁珠并進(jìn)行確認(rèn),直到這些磁珠已均勻混合。然后將它們分裝到2ml試管中。另外,在注入磁珠后,請(qǐng)立刻(10分鐘之內(nèi))啟動(dòng)儀器,否則會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)物有很大的差異并有可能導(dǎo)致儀器發(fā)生故障。
·使用微量移液器分裝磁珠。對(duì)于其它試劑,則將試管上的刻度標(biāo)記作為分裝時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)。
·抽提后所剩的試劑可以被再次使用。但是,如果長時(shí)間存放不用,則由于蒸發(fā)或者其它現(xiàn)象液體成分可能會(huì)發(fā)生變化。請(qǐng)務(wù)必注意。
·請(qǐng)注意本試劑盒并不包含滅菌水、乙醇(99.5%以上的特級(jí)品)以及TE緩沖液(pH8.0)。(參照第2頁上的“4 - [1] - (1)試劑”。)
安裝位置
試劑名
試管容量
1
滅菌水
50ml
2
洗凈液
50ml
5
乙醇
50ml
7
磁珠
2ml
9
TE緩沖液(pH8.0
15ml
 
每種試劑的使用劑量
 
試劑
滅菌水
洗凈液
乙醇
磁珠
TE
試管容量
50ml
50ml
50ml
2ml
15ml
安裝位置
1
2
5
7
9
各試管中分裝的試劑量(ml
樣品數(shù)
1
5
(20)
5
(20)
5
(20)
0.5
(1.5)
2
(5)
2
3
10
(20)
10
(20)
4
5
15
(20)
0.8
(1.5)
6
10
(20)
15
(20)
3
(5)
7
8
20
(20)
9
10
20
(20)
11
25
(35)
12
13
1
(1.5)
14
30
(35)
25
(35)
15
16
15
(20)
35
(35)
4
(5)
17
18
30
(35)
1.3
(1.5)
19
40
(45)
20
21
22
45
(45)
35
(45)
23
1.5
(1.5)
24
 
 
·上表中所示根據(jù)樣品總數(shù)而定的每種試劑分裝量的參考標(biāo)準(zhǔn)。這些數(shù)值都含有保留量,因此,請(qǐng)根據(jù)這些數(shù)值將試劑分裝到試管中。
·圓括號(hào)中的數(shù)值代表當(dāng)試劑分裝到試管中時(shí)的最大容許量標(biāo)準(zhǔn)。分裝量超過這些數(shù)值可能會(huì)造成噴嘴污染、引起溢出等其它問題。

 (6)樣品的安裝
按照第4頁上的“4 – [3] 樣品前處理”來制備樣品,并把它們安裝在抽提架上。
·如果使用帶有螺旋帽的1.5ml樣品試管,則剪掉蓋子連結(jié)部后將它們放在樣品的安裝位置上。
·將它們按照順序安裝在編號(hào)1~24的插孔中。
 
(7)抽提開始
按照以下標(biāo)準(zhǔn),開始進(jìn)行抽提。
①確認(rèn)是否按照所規(guī)定的說明安裝了樣品、試管、專用試管(抽提架以及回收block)以及專用tip。
②確認(rèn)每個(gè)架子的安裝位置以及工作臺(tái)是否已完全收納到里面(直至聽到“咔喳”聲)。關(guān)上機(jī)器前門。(如果機(jī)器前門未完全關(guān)上,則抽提不會(huì)開始。)
③接通MFX-2000的電源。
④在液晶顯示屏上將出現(xiàn)“操作程序”以及“樣品數(shù)”。輸入操作程序“13”并且在“樣品數(shù)”中輸入樣品數(shù)量的數(shù)值。
⑤屏幕上會(huì)顯示提示“請(qǐng)按下啟動(dòng)鍵”,后按下“START”。
⑥抽提啟動(dòng)后液晶顯示屏上會(huì)顯示“操作中”。
 
(8)樣品的回收
在完成抽提后,打開機(jī)器前門并取出樣品。
·在完成抽提后,所抽提的DNA將回收到安裝在回收block上的試管中。在液晶顯示屏上也將再次出現(xiàn)“請(qǐng)按下啟動(dòng)鍵”。
·在已經(jīng)證實(shí)了儀器已完全停止運(yùn)轉(zhuǎn)之后,從回收block中取出試管并在冷藏或者在低溫(4~10℃)下儲(chǔ)存直到再次使用這些試管。
·從磁珠中溶出的DNA,由于使用的是大約100μl的溶出液(TE緩沖液),因此回收液也為100μl左右。
 
5]使用手動(dòng)法進(jìn)行Plant DNA抽提
本試劑盒也可以用于手工DNA抽提?砂凑找韵虏襟E進(jìn)行抽提。
·對(duì)于磁珠分離,建議使用市場(chǎng)上銷售的1.5ml微型試管用磁性臺(tái)架。另外,使用臺(tái)式離心機(jī)以3,000 rpm 程度離心15秒鐘也能夠進(jìn)行分離。
·未包含在本試劑盒中的其它必需物品
請(qǐng)參照第2頁“4 – [1] – (1)試劑”。
請(qǐng)事先制備將特級(jí)乙醇與滅菌水按7:3比例混合的70%乙醇溶液。(每個(gè)樣品需要大約2ml。)
 

 
①取出按照第4頁“4 – [3] 樣品前處理”制備的樣品。
②添加40μl磁珠。(在使用之前請(qǐng)將磁珠進(jìn)行充分的混合。)
③使用試管混合器來進(jìn)行1分鐘的劇烈混合。[DNA的吸收]
④將試管安裝在磁性臺(tái)架上并放置30秒左右以使磁珠凝集。(此時(shí),對(duì)這些磁珠進(jìn)行數(shù)次顛倒混合并且盡可能多地回收粘在蓋子上的磁珠。)
⑤去除上清液。
⑥添加900μl洗凈液。
⑦使用旋渦混合器劇烈混合5秒鐘。(此時(shí),確認(rèn)磁珠是否已被充分地分散以及混合。)
⑧將試管安裝在磁性臺(tái)架上并放置30秒左右以使磁珠凝集。(此時(shí),對(duì)這些磁珠進(jìn)行數(shù)次顛倒混合并且盡可能多地回收粘在蓋子上的磁珠。)
⑨去除上層清液。
⑩重復(fù)步驟⑥~⑨。
⑾添加900μl的70%乙醇溶液。
⑿使用旋渦混合器劇烈混合5秒鐘。(此時(shí),確認(rèn)磁珠是否已被充分地分散以及混合。)
⒀將試管安裝在磁性臺(tái)架上并放置30秒左右以使磁珠凝集。(此時(shí),對(duì)這些磁珠進(jìn)行數(shù)次混合并且盡可能多地回收粘在蓋子上的磁珠。)
⒁去除上清液。
⒂重復(fù)步驟⑾~⒁。(盡可能多地去除包括乙醇在內(nèi)的任何殘留在蓋子上的物質(zhì)。)
⒃添加100μl TE緩沖液。
⒄使用試管混合器劇烈混合1分鐘。[DNA的溶出]
⒅將試管安裝在磁性臺(tái)架上并放置30秒左右以使磁珠凝集。
⒆將含有DNA的上清液回收到一個(gè)未用過的1.5ml微型試管中。
 
5.一般樣品的分析
請(qǐng)按照以下注意事項(xiàng)進(jìn)行操作。
1]DNA定量
·當(dāng)用吸收度檢測(cè)法進(jìn)行DNA定量測(cè)定時(shí),請(qǐng)務(wù)必用離心機(jī)分離所回收的溶液(12,000 rpm, 1分鐘)并使用上清液。
·當(dāng)計(jì)算A260nm/A280nm比例以及DNA濃度時(shí),請(qǐng)務(wù)必用A320nm數(shù)值進(jìn)行校正。
DNA濃度
(A260-A320) x 50μg/ml
A260nm/A280nm
(A260-A320) /(A280-A320)
 
 2]電泳
·若將一部分回收液直接用于電泳,請(qǐng)將Loading Dye的量增加為通常的1.5到2倍,否則可能會(huì)發(fā)生樣品無法沉入樣品孔中,使得電泳失效。
 3]PCR
·回收液中混有大約10%的乙醇溶液。如果直接用于PCR,可能會(huì)阻礙反應(yīng)的進(jìn)行。因此,不要超過反應(yīng)總液的五分之一(即:在每50μl的反應(yīng)液中最多可有10μl)。
·可能會(huì)在所回收的溶液中混入了少量的磁珠。但這并不會(huì)阻礙PCR。
6.抽提實(shí)例
以下是使用MFX-2000從0.1g樣品中進(jìn)行抽提的實(shí)例。
樣品
回收量
煙草(葉子)
3~5μg
煙草(培養(yǎng)細(xì)胞)
2~3μg
水稻植物(葉子)
3~5μg
Arabidopsis thaliana(葉子)
1μg
番茄(葉子)
3μg
卷心菜(葉子)
3μg
玉米(葉子)
3~4μg
·回收量根據(jù)不同的樣品類型以及條件而會(huì)有所變動(dòng)。請(qǐng)以本書中所述的數(shù)值作為標(biāo)準(zhǔn)。
 
7.疑難解答
產(chǎn)生錯(cuò)誤時(shí),請(qǐng)參照以下對(duì)策。
1]回收量低,無法得到DNA
 
原因
對(duì)策
樣品過剩
即使使用規(guī)定量以上的樣品,也不會(huì)使回收量上升,反而會(huì)使效率下降。請(qǐng)減少樣品量。另外,有的樣品單位重量下體積可能會(huì)很大。如果無法浸沒在溶解液中,則也請(qǐng)減少樣品量。
破碎不充分
液氮下的凍結(jié)粉碎不充分是一個(gè)原因。進(jìn)行充分的破碎處理直到它成為細(xì)粉末。并請(qǐng)注意破碎時(shí)不要使樣品解凍。
溶解不充分
1)氯仿抽提液為250μl左右的情況
 
2)氯仿抽提液低于150μl或者非常少的情況
可能是溶解液與樣品之間混合不充分,或者樣品本身難以溶解所致。將溶解液與樣品進(jìn)行充分混合,使用旋渦混合器振動(dòng)1分鐘后再進(jìn)行抽提。(通常為10秒鐘)
可能是樣品內(nèi)水份含量較少而吸收了部分溶解液。請(qǐng)?zhí)砑尤芙庖褐?/span>350~400μl并按照以上(1)的對(duì)策繼續(xù)進(jìn)行抽提,即可獲得良好效果。
試劑量不足
MFX抽提)
確認(rèn)試劑量是否不足或者檢查殘留物的數(shù)量。如果幾乎沒有任何殘留物(200μl以下),說明試劑量不足。
吸附,溶出不充分
(手動(dòng)抽提)
使用手動(dòng)法時(shí),通過使用試管混合器攪動(dòng)1分鐘來使磁珠吸收DNA以及從磁珠中分離出DNA。(參照第95 - [5] 手動(dòng)抽提法”(3),(17))。各攪拌10分鐘左右,則DNA回收量將會(huì)增加。
 
 
·回收量可能視樣品的類型以及儲(chǔ)存條件而有所不同。
2]在氯仿抽提過程中無法良好分離
原因
對(duì)策
在添加了氯仿以及異戊醇之后的混合不充分
使用旋渦混合器時(shí)可能會(huì)無法達(dá)到充分的混合?捎檬稚舷聞×业?fù)u動(dòng)樣品使其混合,然后用離心機(jī)進(jìn)行分離。
 3]PCR 不能有效進(jìn)行
原因
對(duì)策
回收液中混入的乙醇溶液產(chǎn)生了阻礙作用
如果使用超過反應(yīng)液容積五分之一的量,則可能會(huì)抑制反應(yīng)的發(fā)生。在這種情況下,減少所使用的溶液量。同樣地,可以通過在75℃下加熱所回收的溶液5分鐘來提高效果。
· 其他關(guān)于PCR的疑難解答,請(qǐng)參考本公司的各種PCR用酶的實(shí)例集或者其他PCR相關(guān)解說書等。
 4]在洗凈時(shí),磁珠未完全散開(磁珠粘在tip上)
原因
對(duì)策
樣品過剩
如果試劑量過多,磁珠可能會(huì)凝結(jié)。如果使用高于規(guī)定值的樣品量,回收量不會(huì)增加,反而會(huì)有所下降。請(qǐng)減少樣品量。
試劑量不足
確認(rèn)試劑量是否不足或者檢查殘留物量。如果幾乎沒有任何殘留物(200μl以下),則說明試劑量不足。洗凈液如果不足會(huì)導(dǎo)致混合不充分并且磁珠不會(huì)完全散開。
 
5]磁珠未能很好地分裝

 
原因
對(duì)策
由于磁珠的沉淀而導(dǎo)致凝固
使用旋渦混合器,使溶液混合直至均勻之后,該溶液可以被再次用于進(jìn)行抽提。在開始抽提之前,使用旋渦混合器進(jìn)行混合直至均勻,或者在開始之前(10分鐘之內(nèi)),將磁珠放入一個(gè)2ml試管中。
由于蒸發(fā)而引起的混合液成分的濃縮以及結(jié)晶化
為了避免發(fā)生這種問題,請(qǐng)不要再使用殘留在2ml試管中的磁珠。即使只是短時(shí)間內(nèi)儲(chǔ)存或者不使用,也要完全蓋上瓶子或者試管的蓋子。
 
·關(guān)于儀器操作的疑難解答,在MFX-2000的使用說明書中另有說明,請(qǐng)加以參考。
 
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