二、包被用抗原
天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原三大類(lèi)。合成多肽抗原是抗原決定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。一般只含有一個(gè)抗原決定簇,純度高,特異性也高,但由于分子量太小,往往難于直接吸附于固相上。借助于偶聯(lián)物與固相載體的吸附,間接地結(jié)合到固相載體表面。
三、包被用抗體
IgG對(duì)聚苯 烯有強(qiáng)吸附力,其聯(lián)結(jié)發(fā)生在Fc段上,ELISA試劑盒抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外。取材于抗血清或含單克隆抗體的培養(yǎng)液.須除去雜抗體后才能用于ELISA,以保證試驗(yàn)的特異性。
腹水中單抗的濃度較高,特異性亦較強(qiáng),因此不需要作吸收層析處理,直接包被。在某些情況下,用多種單抗混合包被,可取得更好的效果。
四、包被的條件
pH9.6碳酸鹽緩沖液
pH7.2的磷酸鹽緩沖液
pH7-8的Tris-HCL緩沖液
加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置,37℃中保溫2小時(shí)。ELISA試劑盒包被濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化,每批材料需通過(guò)實(shí)驗(yàn)與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為10ng/ml-20μg/ml。