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PCR反應(yīng)問題解答(三)擴增產(chǎn)物在凝膠中涂布或成片狀條帶彌散

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-07-26  來源:上海撫生實業(yè)有限公司
核心提示:3. 擴增產(chǎn)物在凝膠中涂布或成片狀條帶彌散(1)酶量過高。減少酶量;酶的質(zhì)量差,調(diào)換另一來源的酶。(2)dNTP濃度過高。減少dNT

3. 擴增產(chǎn)物在凝膠中涂布或成片狀條帶彌散

(1)酶量過高。減少酶量;酶的質(zhì)量差,調(diào)換另一來源的酶。

(2)dNTP濃度過高。減少dNTP的濃度。

(3)MgCl2濃度過高。可適當(dāng)降低其用量。

(4)模板量過多。質(zhì)粒DNA的用量應(yīng)<50ng,而基因組DNA則應(yīng)<200ng。

(5)引物濃度不夠優(yōu)化。對引物進行梯度稀釋重復(fù)PCR反應(yīng)。

(6)循環(huán)次數(shù)過多;增加模板量減少循環(huán)次數(shù)至30,縮短退火時間及延伸時間,或改用二種溫度的PCR循環(huán)。

(7)退火溫度過低。

(8)電泳體系有問題:

    ①凝膠中緩沖液和電泳緩沖液濃度相差太大;

    ②凝膠沒有凝固好;

    ③瓊脂糖質(zhì)量差。

(9)若為PCR試劑盒則可能:

    ①由于運輸儲存不當(dāng)引起試劑盒失效;

    ②試劑盒本身質(zhì)量有問題,如引物選擇、循環(huán)參數(shù)等選擇不當(dāng)。

(10)降解的陳舊模板擴增也易產(chǎn)生涂布。

編輯:songjiajie2010

 
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