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基因槍的使用方法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2010-12-31  來源:中國生物器材網(wǎng)
核心提示:基因槍的使用操作方法

1、材料準(zhǔn)備
在9cm2培養(yǎng)皿上鋪一薄層培養(yǎng)基,把材料(一般用未成熟胚、成熟胚、小愈傷組織、懸浮細(xì)胞、原生質(zhì)體等)平鋪于培養(yǎng)皿中心,直徑在3cm范圍內(nèi)。

2、金粉的處理
取60mg金粉或鎢粉置于離心管中,加入lml無水乙醇,充分振蕩3min,以9615g離心1rain,去上清,再加入lml無菌水充分混勻后,以9615g離心,重復(fù)上述步驟3次。最后,將金粉懸浮于lml無菌蒸餾水中,置4‘C或室溫下儲(chǔ)存。

3、DNA的處理
取50tA金粉懸浮液,依次加入5rd的質(zhì)粒DNA(1.0/lg~1)溶液、50//l 0.1mol/L亞精胺(所用的溶液經(jīng)無菌消毒),振蕩3rain后,在室溫下放置10min,以9615g離心10s,棄去上清液;加入250~1無水乙醇,振蕩后以9615g離心10s,棄上清液。沉淀重新懸浮于60/1l無水乙醇中,可供5槍(每槍10~1)使用。

4、基因槍的操作
基因槍的所有操作均在無菌條件下進(jìn)行,具體步驟如下:
1)先用70%乙醇對(duì)基因槍表面及樣品室進(jìn)行消毒。同時(shí),用70%乙醇將阻擋網(wǎng)和可裂圓片,微彈載體及其固定器、固定工具浸泡15min后,放在超凈臺(tái)上晾干?闪涯て、固定蓋、微彈載體發(fā)射裝置可用70%乙醇進(jìn)行表面滅菌,吹干。
2)將微粒載片嵌入固定環(huán)中,取DNA及金粉的混合物加于微粒載片中心,干燥lmin左右。
3)安裝可裂膜于其托座上,順時(shí)針擰到氣體加速器上。
4)將空間環(huán)、阻擋網(wǎng)、阻擋網(wǎng)托座、微粒載片及固定環(huán)(帶有微粒的面朝下)安裝好,旋緊蓋子,插入搶中。
5)把樣品放在轟擊室中,關(guān)好門。
6)打開氦氣瓶的總閥,順時(shí)針轉(zhuǎn)氦氣調(diào)節(jié)閥,使氦壓表指針的示數(shù)高于可裂膜壓力200Psi(=1.379MPa)。
7)打開基因槍及變壓器開關(guān)。
8)按動(dòng)真空鍵,待真空度至26—28in Hg(=88.05~94.82kPa)時(shí),迅速按下Hold鍵,接著按住發(fā)射鍵,并保持不動(dòng),直到激發(fā)為止。
9)按通氣鍵待真空表歸零后,取出樣品。
10)關(guān)機(jī)。
把氦氣瓶的總開關(guān)旋緊,打一次空槍,把氦壓表指針歸零后,再逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)氦壓表調(diào)節(jié)閥;關(guān)閉基因槍的總開關(guān)及變壓器開關(guān)。

 

編輯:songjiajie2010

 
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