相关验证及日常管理
前言

湿热灭菌是灭菌方法中比较常见和通用的一种灭菌方法，其中常用的湿热灭菌设备就是脉动真空灭菌器。

脉动真空灭菌器其灭菌原理是通过真空泵借助水的流动抽出灭菌柜室内冷空气，使其处于负压状态，然后输入饱和纯蒸气，如此反复，在高温和高压力的作用下使微生物蛋白质变性凝固而灭活达到灭菌要求。灭菌后，抽真空使灭菌物品迅速干燥。具有方便、省时、省力、总灭菌时间短、灭菌彻底可靠、物品干燥等特点。

湿热灭菌柜相关法规

1、 无菌药品附录第六十三条

任何灭菌工艺在投入使用前，必须采用物理检测手段和生物指示剂，验证其对产品或物品的适用性及所有部位达到了灭菌效果。

2、 无菌药品附录第六十四条

应当定期对灭菌工艺的有效性进行再验证（每年至少一次） 。设备重大变更后，须进行再验证。应当保存再验证记录。

3、 无菌药品附录第六十五条

应当通过验证确认灭菌设备腔室内待灭菌产品和物品的装载方式。

4、 无菌药品附录第六十七条

应当按照供应商的要求保存和使用生物指示剂，并通过阳性对照试验确认其质量。使用生物指示剂时，应当采取严格管理措施，防止由此所致的微生物污染。

《中国药典（20 版）》第四部 1421：灭菌法

灭菌工艺的验证是无菌保证的必要条件。灭菌工艺经验证后，方可交付正式使用。验证内容包括：

(1)撰写验证方案及制定评估标准。

(2)确认设备的设计与选型。

(3)确认灭菌设 备资料齐全、安装正确，并能正常运行。

(4)确认灭菌设备、 关键控制和记录系统能在规定的参数范围内正常运行。

(5)采 用被灭菌物品或模拟物品按预定灭菌程序进行重复试验，确 认各关键工艺参数符合预定标准，确定经灭菌物品的无菌保证水平符合规定。 

(6)汇总并完善各种文件和记录，撰写验证报告。灭菌工艺的日常监控:

同时应持续评估灭菌工艺的有效性及被灭菌物品的安全性和稳定性，并建立相应的变更和偏差控制程序，确保灭菌工艺持续处于受控状态。灭菌工艺应定期进行再验证。当灭菌设备或程序发生变更(包括灭菌物品装载方式和数量的改变）时，应进行重新验证。

湿热灭菌（过度灭菌法）

对耐热性良好的物品，一般使用过度杀灭法（the overkill method）。使用过度杀灭法的目标是确保达到一定程度的无菌保证，而不管装载物的实际负载生物的数量多少和耐热性如何。

湿热灭菌（残存概率法）

不耐热产品/物品的灭菌使用过度杀灭法可能导致产品不可接受的降解。因此灭菌程序的确认就需研究产品的微生物数量和耐热性。一旦确定了微生物初始数量和耐热性，就可以设计出一个能达到P N S U为10-6的灭菌程序。

湿热灭菌柜验证

湿热灭菌验证的目的：就是通过一系列验证试验提供足够的数据和文件依据，从而找到有效合理的灭菌参数， 并把已经验证过的灭菌设备和灭菌工艺参数应用到药品生产的除菌过程中去，以证明用于药品生产过程中 的每一台蒸汽灭菌设备都能起到灭菌的效果，并且对不同灭菌物品的灭菌过程和灭菌效果具有可靠性和重现性。

3Q（安装确认、运行确认、性能确认）

安装确认(IQ)是对供应商所供技术资料的核查， 对设备、备品备件的检查验收以及设备的安装检查，以确证其是否符合GMP、厂商的标准及企业特定技术要求的一系列活动。

运行确认(OQ)试验系指通过按草拟的标准操作规程(SOP)进行单机或系统的运行试验，俗称试车。运行确认是证明设备或系统各项技术参数能否达到设定要求的一系列活动。

性能确认（PQ）

一、真空泄漏检测

启动检漏程序，设备开始抽真空，当内室压力达到限定值，平衡5分钟，开始保压计时，到设置的时间后（900s），如果保压正常，打印机会自动打印“保压结果正常”，如果有漏气现象，泄漏限度超过设定值，则程序会中断，出现报警，并打印“保压结果失败”。

二、BD测试

通过BD测试包确认灭菌腔体内去除冷空气能力。

  注意事项：1、 确认BD包在有效期内并且性状良好未受潮变形。2、开启程序前可先排除管道内的冷凝水，以防止湿包。

三、空载热分布和负载热穿透

（1）有线温度验证系统

（2）空载热分布要求：

灭菌时段内，平均温度应≥121.0℃；最热点和最冷点温度之差≤2.0℃。

（3）负载热穿透

要求：F0值＞12

布置温度探头和指示剂时尽可能在较为难灭菌的物品内部布点，如：硅胶软管内部，过滤器内部，工具盒内部等）。一般来说，生物指示剂应该贴近温度探头放置，以便来评估生物热致死率与基于热输入而预测得出的热致死率之间的关系。当确定了难灭菌的物品后，就必须特别注意这些难灭菌物品（过滤器、填充材料、泵等）的灭菌情况。此外，还必须特别注意紧紧包裹的地方、厚厚打 包的物品、考虑安全而系得很紧的材料、非常长的管子等等。

生物指示剂以及温度探头的位置应该被记录在验证记录中。根据验证中的装载形式，用来指导并应该记录后续生产的所有批次的装载情况。

湿热灭菌柜验证-后期输出

1、验证结果均符合要求后，会整理验证数据出具报告并审核批准，确定最终的灭菌相关参数，装载物品及数量；

2、将灭菌参数，装载物品及数量输出给车间，并配以装载模式图以供参考；

3、灭菌柜使用情况进行一定的跟踪，设备有无异常，灭菌装载是否合理和方便使用。

湿热灭菌柜日常控制

1、每批装载灭菌物品都会被记录，并有相应的温度记录及温度曲线；

2、每批灭菌物品放入灭菌指示带，用以区分已灭菌物品和未灭菌物品，以防混淆；

3、每天灭菌前都会进行保压测试，确保灭菌柜密封性；

4、设备有三级密码，防止操作员随意更改相关参数；

5、设备异常或维修会进行记录，温度控制探头的维修或更换会对探头进行温度确认；

6、新增灭菌物品会进行该物品装载验证，验证合格后方能正常灭菌；

7、灭菌柜每年进行周期性确认。

参考文献

1.《药品生产质量管理规范》2010年修订版

2.《中国药典》（2020版）

3.PDA Technical Report NO.1 2007

4.《药品GMP指南.无菌药品》2010版

5.BS EN 285:2015