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在一般分光光度計(jì)的使用說(shuō)明書上，要求儀器預(yù)熱時(shí)間約20分鐘；若是帶微處理器的分光光度計(jì)，開(kāi)機(jī)后儀器自動(dòng)進(jìn)入自檢(初始化)狀態(tài)，約需10分鐘左右。
在分光光度計(jì)預(yù)熱這個(gè)環(huán)節(jié)上，很多使用者或多或少存在問(wèn)題，如開(kāi)機(jī)只預(yù)熱電路系統(tǒng) (不調(diào)節(jié)波長(zhǎng)、打開(kāi)吸收池暗箱蓋預(yù)熱等)或認(rèn)為初始化過(guò)程就是預(yù)熱等。
對(duì)帶微處理器有自檢功能的分光光度計(jì)，開(kāi)機(jī)后儀器自檢 (初始化)結(jié)束后，在測(cè)定窗口上，設(shè)置所需波長(zhǎng)值， 用一個(gè)吸收池裝上純凈水置于光路上，調(diào) “0000A”后，預(yù)熱儀器，當(dāng)儀器顯示讀數(shù)不再變化后即可進(jìn)行測(cè)定。
對(duì)于紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，由于有雙光源 (鎢燈與氘燈)，為了延長(zhǎng)燈的使用壽命，開(kāi)機(jī)自檢完成后可以關(guān)掉測(cè)定時(shí)不用的光源燈。
分光光度計(jì)在測(cè)定過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)同一個(gè)溶液在不同時(shí)間里其測(cè)定結(jié)果不同，即重復(fù)性不好，其原因是什么?排除測(cè)定錯(cuò)誤因素外，可能原因有：
(1)儀器預(yù)熱時(shí)間不夠或預(yù)熱方法不對(duì)所造成，應(yīng)延長(zhǎng)預(yù)熱時(shí)間或采用正確的預(yù)熱方法。
(2)光電轉(zhuǎn)換器 (如光電管)因長(zhǎng)時(shí)間使用其光電轉(zhuǎn)換 效率發(fā)生了變化導(dǎo)致。這時(shí)標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測(cè)溶液的吸光度都 同樣變低，在相對(duì)定量時(shí)對(duì)結(jié)果影響很小。但是對(duì)這類儀器，一般建議連續(xù)使用時(shí)間不應(yīng)超過(guò)3h，若需長(zhǎng)時(shí)間使用，最好間歇30min 。
樣品室的主要作用就是放置樣品，液體測(cè)試一般使用比色皿，比色皿分為石英和玻璃兩種，玻璃比色皿主要用于可見(jiàn)區(qū)（320nm-2500nm），在紫外區(qū)有吸收，不適用于紫外區(qū)，石英比色皿可以用于紫外可見(jiàn)近紅外區(qū)（190nm-2500nm），另外有些透明有機(jī)玻璃也可以用作吸收池。
（1）比色皿上方通常會(huì)有字母標(biāo)識(shí)，各型號(hào)標(biāo)識(shí)稍有差別，玻璃比色皿口沿處有“G”(Glass 玻璃) ，而石英比色皿口沿處有“Q”(Quartz 石英) 或者 “S”（Silicide石英玻璃）。
（2）使用紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)來(lái)鑒別玻璃、石英比色皿：現(xiàn)行國(guó)家檢定規(guī)程規(guī)定石英比色皿在250nm下吸光度應(yīng)小于0.07abs，若吸光度大于0.07abs 則為玻璃比色皿。
使用需要配對(duì)的比色皿，在可適用的相同波長(zhǎng)下，以空氣或者純水為介質(zhì)，使用透光率T進(jìn)行測(cè)量，將每組比色皿中的一只透射率調(diào)為100%，然后測(cè)量另外一只透光率，凡透射率之差不超過(guò)0.5%T，即可配對(duì)使用。
比色皿是分析過(guò)程中對(duì)結(jié)果有很大影響的一個(gè)因素，比色皿污染之后對(duì)測(cè)試的影響更大，會(huì)使測(cè)試不穩(wěn)定甚至結(jié)果不準(zhǔn)，因此完成樣品測(cè)定之后，必須徹底清洗比色皿，下列清洗流程僅供參考：蒸餾水清洗——乙醇清洗——干燥。
如果比色皿被污染，請(qǐng)按照如下流程清洗：在洗滌劑中浸泡約10min（30-50℃）——蒸餾水清洗——再加有少量雙氧水的稀硝酸中浸泡約30min——蒸餾水清洗——干燥。
注：如果比色皿被有機(jī)物污染，請(qǐng)先用如丙酮等有機(jī)溶劑將有機(jī)物洗去并用蒸餾水清洗。
值得注意的是：分析實(shí)驗(yàn)常用的鉻酸洗液不宜用于比色皿洗滌，這是因?yàn)閹谋壬笤谠撓匆褐锌赡軙?huì)產(chǎn)生熱量，致使比色皿膠接面裂開(kāi)而損壞。同時(shí)經(jīng)洗液洗滌后的比色皿還可能殘存微量鉻(鉻在紫外區(qū)有吸收) ，因此會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的測(cè)定。
1、使用的吸收池必須潔凈，并注意配對(duì)使用。量瓶、移液吸管均應(yīng)校正、洗凈后使用。
2、取吸收池時(shí)，手指應(yīng)拿毛玻璃面的兩側(cè)，裝盛樣品以池體的4/5為度，使用揮發(fā)性溶液時(shí)應(yīng)加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應(yīng)無(wú)溶劑殘留。吸收池放入樣品室時(shí)應(yīng)注意方向相同。用后用溶劑或水沖洗干凈，晾干防塵保存。
3、供試品溶液濃度除各該品種已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之間為宜。
4、測(cè)定時(shí)除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照，采用1cm石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰±2nm以內(nèi)，測(cè)幾個(gè)點(diǎn)的吸收度或由儀器在規(guī)定的波長(zhǎng)附近自動(dòng)掃描測(cè)定，以核對(duì)供試品的吸收峰位置是否正確，并以吸收度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)，除另有規(guī)定外吸收度最大波長(zhǎng)應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的測(cè)定波長(zhǎng)±2nm以內(nèi)。
5、供試品應(yīng)取2份，如為對(duì)照品比較法，對(duì)照品一般也應(yīng)取2份。并進(jìn)行平行操作，每份結(jié)果與平均值的偏差應(yīng)在±0.5%以內(nèi)。
6、選用儀器的狹縫寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測(cè)得的吸收度值會(huì)偏低，狹縫寬度的選擇應(yīng)以減少狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)，對(duì)于大部分被測(cè)品種，可以使用2nm縫寬。
1、若實(shí)驗(yàn)中需大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng)，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”點(diǎn)。然后再測(cè)量。
2、指針式儀器在未接通電源時(shí)，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。
3、比色皿使用完畢后，請(qǐng)立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
4、操作人員不應(yīng)輕易動(dòng)燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
5、一般的分光光度計(jì)，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點(diǎn)是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測(cè)微弱光 電信號(hào)，而不能用來(lái)檢測(cè)強(qiáng)光。否則容易產(chǎn)生信號(hào)漂移，靈敏度下降。針對(duì)其上述特點(diǎn)，在維修、使用此類儀器時(shí)應(yīng)注意不讓光電倍增管長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下，因此在 預(yù)熱時(shí)，應(yīng)打開(kāi)比色皿蓋或使用擋光桿，避免長(zhǎng)時(shí)間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。
6、放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。
7、比色杯必須配套使用，否則將使測(cè)試結(jié)果失去意義。在進(jìn)行每次測(cè)試前均應(yīng)進(jìn)行比較。具體方法如下：
分別向被測(cè)的兩只杯子里注入同樣的溶液，把儀器置于某一波長(zhǎng)處。 將某一個(gè)池的透射比值調(diào)至100%，測(cè)量其它各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若超出此范圍應(yīng)考慮其對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響。
