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色譜分析-外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-08-16
核心提示:色譜分析的重要作用之一是對樣品定量。而色譜法定量的依據(jù)是:組分的重量或在載氣中的濃度與檢測器的響應(yīng)信號成正比。常見定量分析方法分為面積歸一化法、內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法等。大家常常容易傻傻分不清楚的莫過于內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法了。
 色譜分析的重要作用之一是對樣品定量。而色譜法定量的依據(jù)是:組分的重量或在載氣中的濃度與檢測器的響應(yīng)信號成正比。常見定量分析方法分為面積歸一化法、內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法等。大家常常容易傻傻分不清楚的莫過于內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法了。

以內(nèi)標(biāo)法為例,選一與欲測組分相近但能完全分離的組分做內(nèi)標(biāo)物(當(dāng)然是樣品中沒有的組分),然后配制欲測組分和內(nèi)標(biāo)物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,進樣得相對校正因子。再將內(nèi)標(biāo)物加入欲測組分的樣品中,進樣后測得欲測組分和內(nèi)標(biāo)物的定量參數(shù),用內(nèi)標(biāo)法公式計算即可。

其實,從定義上來區(qū)分的話,外標(biāo)法就是用標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積或峰高與其對應(yīng)的濃度做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,測出樣品的峰面積或峰高,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其對應(yīng)的濃度,這是最常用的一種定量方法;內(nèi)標(biāo)法是對應(yīng)外標(biāo)法說的,內(nèi)標(biāo)法是將一定量的純物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物,加入到準(zhǔn)確稱量的試樣中,根據(jù)被測試樣和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比,來計算被測組分的含量。

外標(biāo)法需要用樣品和標(biāo)準(zhǔn)品對比,但是有時我們很難保證樣品和標(biāo)準(zhǔn)品進的體積是一樣的,畢竟要有誤差,這時候就用內(nèi)標(biāo)法,就是在外標(biāo)法的基礎(chǔ)上,在樣品和標(biāo)準(zhǔn)品里在加入一種物質(zhì),通過加入物質(zhì)的峰面積或峰高的變化,就可以看出我們標(biāo)準(zhǔn)品和樣品進樣體積的差別,但同時會引進加入物質(zhì)的秤量誤差。所以一般用外標(biāo)法來定量,如果進樣體積很難掌握,就用內(nèi)標(biāo)法,可以消除進樣體積的誤差。


外標(biāo)法(標(biāo)準(zhǔn)曲線法、直接比較法)

 

首先用欲測組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。具體作法是:用標(biāo)準(zhǔn)樣品配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列,在與欲測組分相同的色譜條件下,等體積準(zhǔn)確量進樣,測量各峰的峰面積或峰高,用峰面積或峰高對樣品濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,此標(biāo)準(zhǔn)工作曲線應(yīng)是通過原點的直線。若標(biāo)準(zhǔn)工作曲線不通過原點,說明測定方法存在系統(tǒng)誤差。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的斜率即為絕對校正因子。

當(dāng)欲測組分含量變化不大,并已知這一組分的大概含量時,也可以不必繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,而用單點校正法,即直接比較法定量。單點校正法實際上是利用原點作為標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上的另一個點。因此,當(dāng)方法存在系統(tǒng)誤差時(即標(biāo)準(zhǔn)工作曲線不通過原點),單點校正法的誤差較大。因此規(guī)定,y=ax+b, b的絕對值應(yīng)不大于100%響應(yīng)值是y的2%。

標(biāo)準(zhǔn)曲線法的優(yōu)點:繪制好標(biāo)準(zhǔn)工作曲線后測定工作就很簡單了,計算時可直接從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上讀出含量,這對大量樣品分析十分合適。特別是標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制后可以使用一段時間,在此段時間內(nèi)可經(jīng)常用一個標(biāo)準(zhǔn)樣品對標(biāo)準(zhǔn)工作曲線進行單點校正,以確定該標(biāo)準(zhǔn)工作曲線是否還可使用。

標(biāo)準(zhǔn)曲線法的缺點:每次樣品分析的色譜條件(檢測器的響應(yīng)性能,柱溫度,流動相流速及組成,進樣量,柱效等)很難完全相同,因此容易出現(xiàn)較大誤差。另外,標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制時,一般使用欲測組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品(或已知準(zhǔn)確含量的樣品),因此對樣品前處理過程中欲測組分的變化無法進行補償。


內(nèi)標(biāo)法

 

選擇適宜的物質(zhì)作為欲測組分的參比物,定量加到樣品中去,依據(jù)欲測組分和參比物在檢測器上的響應(yīng)值(峰面積或峰高)之比和參比物加入的量進行定量分析的方法稱為內(nèi)標(biāo)法。

內(nèi)標(biāo)法的關(guān)鍵是選擇合適的內(nèi)標(biāo)物。內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是原樣品中不存在的純物質(zhì),該物質(zhì)的性質(zhì)應(yīng)盡可能與欲測組分相近,不與被測樣品起化學(xué)反應(yīng),同時要能完全溶于被測樣品中。內(nèi)標(biāo)物的峰應(yīng)盡可能接近欲測組分的峰,或位于幾個欲測組分的峰中間,但必須與樣品中的所有峰不重疊,即完全分開。

內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)點:進樣量的變化,色譜條件的微小變化對內(nèi)標(biāo)法定量結(jié)果的影響不大,特別是在樣品前處理(如濃縮、萃取,衍生化等)前加入內(nèi)標(biāo)物,然后再進行前處理時,可部分補償欲測組分在樣品前處理時的損失。若要獲得很高精度的結(jié)果時,可以加入數(shù)種內(nèi)標(biāo)物,以提高定量分析的精度。

內(nèi)標(biāo)法的缺點:選擇合適的內(nèi)標(biāo)物比較困難,內(nèi)標(biāo)物的稱量要準(zhǔn)確,操作較麻煩。使用內(nèi)標(biāo)法定量時要測量欲測組分和內(nèi)標(biāo)物的兩個峰的峰面積(或峰高),根據(jù)誤差疊加原理,內(nèi)標(biāo)法定量的誤差中,由于峰面積測量引起的誤差是標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量的2-2是由于進樣量的變化和色譜條件變化引起的誤差,內(nèi)標(biāo)法比標(biāo)準(zhǔn)曲線法要小很多,所以總的來說,內(nèi)標(biāo)法定量比標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量的準(zhǔn)確度和精密度都要好。
編輯:songjiajie2010

 
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