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微生物實(shí)驗(yàn)室最少不了的實(shí)驗(yàn)儀器之一就是滅菌器，一般實(shí)驗(yàn)室常用的是高壓蒸汽滅菌器。GB 4789.1-2016中要求：實(shí)驗(yàn)設(shè)備應(yīng)定期進(jìn)行檢查和/或檢定（加貼標(biāo)志）、維護(hù)和保養(yǎng)，以確保工作性能和操作安全。但你的滅菌器有沒(méi)有類似的檢查呢？如果要做類似的驗(yàn)證，又需要怎么做呢？今天就給大家匯總一下高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗(yàn)證的相關(guān)內(nèi)容。
高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗(yàn)證一般有化學(xué)指示劑法、留點(diǎn)溫度計(jì)法、自制測(cè)溫管法和生物指示劑法，每種方法的原理都是相似的，主要是通過(guò)驗(yàn)證滅菌時(shí)滅菌器里的溫度能否達(dá)到要求。我們可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的具體情況選擇其中一種或多種方法進(jìn)行驗(yàn)證。
一、化學(xué)指示劑法原理：化學(xué)指示劑在一定溫度與作用時(shí)間下，會(huì)受熱變色或變形，根據(jù)這一特點(diǎn)來(lái)判斷是否達(dá)到需要的滅菌參數(shù)。一般實(shí)驗(yàn)室常用的是3M壓力滅菌指示膠帶，這種指示膠帶是利用滅菌前后膠帶顏色變化來(lái)判斷滅菌效果。它是由熱敏化學(xué)物質(zhì)與顯色劑及漆輔料制成油墨，并將油墨以條紋狀印制在特制的一面膠紙帶制成。指示膠帶可以直接粘貼于包裹外，長(zhǎng)度不低于5cm，并輕壓膠帶以增加粘性和封包效果；在121℃持續(xù)20min或130℃持續(xù)4min后，膠帶上印有的斜行的白色指示線條會(huì)完全變黑，成為黑色線條；如變色不均勻或不徹底，可認(rèn)為該包裹不符合滅菌條件。
二、留點(diǎn)溫度計(jì)法原理：留點(diǎn)溫度計(jì)法是利用水銀溫度計(jì)不回流的特性，其原理跟傳統(tǒng)體溫計(jì)相似，可以指示滅菌器在滅菌過(guò)程中達(dá)到的最高溫度。驗(yàn)證時(shí)把水銀溫度計(jì)放在盛水的大三角瓶里，滅菌時(shí)把三角瓶放在滅菌器的上部和下部，滅菌結(jié)束后看水銀溫度計(jì)的溫度和要求溫度是否一致。此法只能驗(yàn)證溫度，不能指示滅菌時(shí)間是否達(dá)到要求，因此是滅菌器驗(yàn)證的最低標(biāo)準(zhǔn)。
三、自制測(cè)溫管法原理：利用一些化學(xué)藥品受熱熔化后再冷卻，晶體的外形不同的特性，把化學(xué)藥品密封在小玻璃管內(nèi)，滅菌時(shí)放在滅菌器里，滅菌完后觀察晶體的形狀，就可以判斷溫度是否達(dá)標(biāo)。常用的試劑是苯甲酸，苯甲酸的熔點(diǎn)為121-123℃，跟我們要求的滅菌器的滅菌溫度基本吻合，因此滅菌時(shí)把固體苯甲酸密封在小玻璃管內(nèi)放進(jìn)滅菌器，滅菌結(jié)束就可以觀察苯甲酸的狀態(tài)來(lái)驗(yàn)證滅菌器是否達(dá)到了要求溫度。這種方法的局限跟留點(diǎn)溫度計(jì)法相同，也只能指示滅菌時(shí)的溫度，對(duì)滅菌時(shí)間是否達(dá)到要求無(wú)法判斷。
四、生物指示劑法原理：利用非致病性的嗜熱脂肪桿菌的芽孢作為指示菌，來(lái)測(cè)定熱力滅菌的效果。嗜熱脂肪桿菌的芽孢對(duì)熱的抗性較強(qiáng)，其耐熱能力與病原微生物肉毒梭菌芽孢相似，以此為指示菌，驗(yàn)證滅菌器能否達(dá)到滅菌要求。生物指示劑分為三種：芽孢懸液、芽胞菌片、菌片和培養(yǎng)基混合指示管。一般放在滅菌容器的5個(gè)點(diǎn)：下層的前、中、后和上層、中層的中央點(diǎn)。滅菌后取指示劑接種到溴甲酚紫-葡萄糖蛋白胨水中，55-60℃培養(yǎng)2-7天，若培養(yǎng)基澄清、顏色沒(méi)有變化即說(shuō)明芽孢被殺死，滅菌器滅菌效果良好；如果培養(yǎng)基黃色渾濁，說(shuō)明芽孢未被殺滅，滅菌器滅菌效果不合格。芽孢懸液和芽孢菌片的驗(yàn)證方法均是如此。目前實(shí)驗(yàn)室還常用商品化的生物指示管，其原理與芽孢懸液和芽胞菌片相同，指示管中有嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢和培養(yǎng)液玻璃小管，將指示管放在滅菌容器內(nèi)的各個(gè)點(diǎn)上，高壓滅菌后，將管中盛培養(yǎng)液的玻璃管擠碎，培養(yǎng)液從內(nèi)部的小管中被放出，放入56℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，同時(shí)做陽(yáng)性對(duì)照。若是滅菌器滅菌效果不合格，指示管內(nèi)的芽孢復(fù)活后生長(zhǎng)會(huì)改變?nèi)鉁念伾侨鉁優(yōu)辄S色；若是滅菌器滅菌效果良好則管內(nèi)芽孢被滅活不再生長(zhǎng)，肉湯仍舊是原來(lái)的紫色。對(duì)于滅菌器的效果驗(yàn)證，目前并沒(méi)有相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格的要求驗(yàn)證的頻次，但是實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)自行制定驗(yàn)證頻次規(guī)定，并嚴(yán)格按照要求進(jìn)行。從操作性和驗(yàn)證結(jié)論兩個(gè)方面出發(fā)，小編推薦使用指示膠帶和生物指示管，因?yàn)檫@兩種方法操作簡(jiǎn)單，可以對(duì)滅菌效果進(jìn)行全面的驗(yàn)證。
附：滅菌時(shí)的注意事項(xiàng)（一些進(jìn)口的全自動(dòng)滅菌鍋可不用考慮排氣）使用高壓蒸氣滅菌器時(shí)，首先應(yīng)注意在開放蒸氣的同時(shí)，排除滅菌器內(nèi)的冷空氣。必須將器內(nèi)冷空氣全部排除后，才可關(guān)閉排氣孔。假如滅菌器內(nèi)仍存留有部分空氣時(shí)，則壓力表上雖已達(dá)到了某一壓力值，但器內(nèi)之溫度仍未達(dá)到相應(yīng)之度數(shù)。存留的空氣越多，則二者相差也越大，器內(nèi)溫度不足，滅菌則不徹底。（很多人在做發(fā)酵法培養(yǎng)基滅菌時(shí)會(huì)出現(xiàn)小導(dǎo)管中有氣泡，不妨也可以嘗試多排出滅菌器內(nèi)的冷空氣，有奇效哦）。
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高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗(yàn)證一般有化學(xué)指示劑法、留點(diǎn)溫度計(jì)法、自制測(cè)溫管法和生物指示劑法，每種方法的原理都是相似的，主要是通過(guò)驗(yàn)證滅菌時(shí)滅菌器里的溫度能否達(dá)到要求。我們可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的具體情況選擇其中一種或多種方法進(jìn)行驗(yàn)證。
一、化學(xué)指示劑法原理：化學(xué)指示劑在一定溫度與作用時(shí)間下，會(huì)受熱變色或變形，根據(jù)這一特點(diǎn)來(lái)判斷是否達(dá)到需要的滅菌參數(shù)。一般實(shí)驗(yàn)室常用的是3M壓力滅菌指示膠帶，這種指示膠帶是利用滅菌前后膠帶顏色變化來(lái)判斷滅菌效果。它是由熱敏化學(xué)物質(zhì)與顯色劑及漆輔料制成油墨，并將油墨以條紋狀印制在特制的一面膠紙帶制成。指示膠帶可以直接粘貼于包裹外，長(zhǎng)度不低于5cm，并輕壓膠帶以增加粘性和封包效果；在121℃持續(xù)20min或130℃持續(xù)4min后，膠帶上印有的斜行的白色指示線條會(huì)完全變黑，成為黑色線條；如變色不均勻或不徹底，可認(rèn)為該包裹不符合滅菌條件。
二、留點(diǎn)溫度計(jì)法原理：留點(diǎn)溫度計(jì)法是利用水銀溫度計(jì)不回流的特性，其原理跟傳統(tǒng)體溫計(jì)相似，可以指示滅菌器在滅菌過(guò)程中達(dá)到的最高溫度。驗(yàn)證時(shí)把水銀溫度計(jì)放在盛水的大三角瓶里，滅菌時(shí)把三角瓶放在滅菌器的上部和下部，滅菌結(jié)束后看水銀溫度計(jì)的溫度和要求溫度是否一致。此法只能驗(yàn)證溫度，不能指示滅菌時(shí)間是否達(dá)到要求，因此是滅菌器驗(yàn)證的最低標(biāo)準(zhǔn)。
三、自制測(cè)溫管法原理：利用一些化學(xué)藥品受熱熔化后再冷卻，晶體的外形不同的特性，把化學(xué)藥品密封在小玻璃管內(nèi)，滅菌時(shí)放在滅菌器里，滅菌完后觀察晶體的形狀，就可以判斷溫度是否達(dá)標(biāo)。常用的試劑是苯甲酸，苯甲酸的熔點(diǎn)為121-123℃，跟我們要求的滅菌器的滅菌溫度基本吻合，因此滅菌時(shí)把固體苯甲酸密封在小玻璃管內(nèi)放進(jìn)滅菌器，滅菌結(jié)束就可以觀察苯甲酸的狀態(tài)來(lái)驗(yàn)證滅菌器是否達(dá)到了要求溫度。這種方法的局限跟留點(diǎn)溫度計(jì)法相同，也只能指示滅菌時(shí)的溫度，對(duì)滅菌時(shí)間是否達(dá)到要求無(wú)法判斷。
四、生物指示劑法原理：利用非致病性的嗜熱脂肪桿菌的芽孢作為指示菌，來(lái)測(cè)定熱力滅菌的效果。嗜熱脂肪桿菌的芽孢對(duì)熱的抗性較強(qiáng)，其耐熱能力與病原微生物肉毒梭菌芽孢相似，以此為指示菌，驗(yàn)證滅菌器能否達(dá)到滅菌要求。生物指示劑分為三種：芽孢懸液、芽胞菌片、菌片和培養(yǎng)基混合指示管。一般放在滅菌容器的5個(gè)點(diǎn)：下層的前、中、后和上層、中層的中央點(diǎn)。滅菌后取指示劑接種到溴甲酚紫-葡萄糖蛋白胨水中，55-60℃培養(yǎng)2-7天，若培養(yǎng)基澄清、顏色沒(méi)有變化即說(shuō)明芽孢被殺死，滅菌器滅菌效果良好；如果培養(yǎng)基黃色渾濁，說(shuō)明芽孢未被殺滅，滅菌器滅菌效果不合格。芽孢懸液和芽孢菌片的驗(yàn)證方法均是如此。目前實(shí)驗(yàn)室還常用商品化的生物指示管，其原理與芽孢懸液和芽胞菌片相同，指示管中有嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢和培養(yǎng)液玻璃小管，將指示管放在滅菌容器內(nèi)的各個(gè)點(diǎn)上，高壓滅菌后，將管中盛培養(yǎng)液的玻璃管擠碎，培養(yǎng)液從內(nèi)部的小管中被放出，放入56℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，同時(shí)做陽(yáng)性對(duì)照。若是滅菌器滅菌效果不合格，指示管內(nèi)的芽孢復(fù)活后生長(zhǎng)會(huì)改變?nèi)鉁念伾侨鉁優(yōu)辄S色；若是滅菌器滅菌效果良好則管內(nèi)芽孢被滅活不再生長(zhǎng)，肉湯仍舊是原來(lái)的紫色。對(duì)于滅菌器的效果驗(yàn)證，目前并沒(méi)有相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格的要求驗(yàn)證的頻次，但是實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)自行制定驗(yàn)證頻次規(guī)定，并嚴(yán)格按照要求進(jìn)行。從操作性和驗(yàn)證結(jié)論兩個(gè)方面出發(fā)，小編推薦使用指示膠帶和生物指示管，因?yàn)檫@兩種方法操作簡(jiǎn)單，可以對(duì)滅菌效果進(jìn)行全面的驗(yàn)證。
附：滅菌時(shí)的注意事項(xiàng)（一些進(jìn)口的全自動(dòng)滅菌鍋可不用考慮排氣）使用高壓蒸氣滅菌器時(shí)，首先應(yīng)注意在開放蒸氣的同時(shí)，排除滅菌器內(nèi)的冷空氣。必須將器內(nèi)冷空氣全部排除后，才可關(guān)閉排氣孔。假如滅菌器內(nèi)仍存留有部分空氣時(shí)，則壓力表上雖已達(dá)到了某一壓力值，但器內(nèi)之溫度仍未達(dá)到相應(yīng)之度數(shù)。存留的空氣越多，則二者相差也越大，器內(nèi)溫度不足，滅菌則不徹底。（很多人在做發(fā)酵法培養(yǎng)基滅菌時(shí)會(huì)出現(xiàn)小導(dǎo)管中有氣泡，不妨也可以嘗試多排出滅菌器內(nèi)的冷空氣，有奇效哦）。
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