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當(dāng)液相色譜儀被污染之后，就會(huì)出現(xiàn)數(shù)據(jù)錯(cuò)誤等問題。今天，我們就和大家一起探討一下，如何判斷液相色譜儀是否被污染以及系統(tǒng) (HPLC) 中“攜帶污染”（或俗稱“殘留”）發(fā)生的原因和減少的方法。
基線變化基線變化一般不會(huì)很有規(guī)律，如果在自動(dòng)量程下監(jiān)控基線情況，不可能得到原來儀器理想狀態(tài)的有規(guī)律的基線在高頻率上下浮動(dòng)的變化，而是有時(shí)候會(huì)得到低頻率變化的峰，看上去很像有東西洗脫出來，并且峰寬比較大，像共洗脫現(xiàn)象似的�；�漂移不像原來那樣慢慢的變平，而是一直朝一個(gè)方向漂，比如向上漂，平衡一天也可能是一直在漂。柱壓變化柱壓變化影響較小，除非是檢測(cè)池太臟，堵塞嚴(yán)重，會(huì)對(duì)柱壓產(chǎn)生小于1000psi的影響（一般的用到光的檢測(cè)池也就耐這么高的壓力），但這種情況不會(huì)持續(xù)發(fā)生，給你排查的時(shí)間有限，堵的時(shí)間長(zhǎng)了，會(huì)爆池，壓力也就沒有影響了。峰面積變化峰面積應(yīng)該是變小。檢測(cè)池臟時(shí)會(huì)有兩種情形影響檢測(cè)靈敏度。一方面是基線噪聲變大，從整體上影響信噪比。另一方面，檢測(cè)池臟了對(duì)于光檢測(cè)原理的檢測(cè)器來說（UV、PDA、DAD、FLD、ELSD）首先會(huì)減弱通過檢測(cè)池的光強(qiáng)度，光強(qiáng)度降低了，靈敏度就會(huì)下降，相當(dāng)于檢測(cè)器光源的能量降低。保留時(shí)間有時(shí)由于檢測(cè)器臟了，系統(tǒng)壓力增加，然后某個(gè)接口的地方出現(xiàn)漏液，導(dǎo)致保留時(shí)間出現(xiàn)一些變化，不過這種可能性較小。攜帶污染類型、發(fā)生原因和減少方法“攜帶污染”（或俗稱“殘留”）是用來描述一種樣品污染的術(shù)語，它會(huì)導(dǎo)致分析物的色譜峰在之后的樣品分析中再次出現(xiàn)，而這些分析實(shí)際上并不包含樣品（例如空白樣或純?nèi)軇�。這種污染可持續(xù)數(shù)次連續(xù)分析，通常在每次進(jìn)樣后污染量都會(huì)減少（這是排除故障時(shí)的關(guān)鍵觀察點(diǎn)）。如果提供了適當(dāng)?shù)膬x器培訓(xùn)，現(xiàn)代高效液相色譜系統(tǒng)的設(shè)計(jì)會(huì)使攜帶污染現(xiàn)象變得極為罕見，但當(dāng)攜帶現(xiàn)象出現(xiàn)時(shí)，污染可能是由于以下原因造成的：(1) 缺乏高效液相色譜維護(hù)；(2) 樣品超載，造成色譜柱殘留；(3) 洗滌瓶使用不當(dāng)和/或樣品瓶選擇不當(dāng)；(4) 操作員在如何設(shè)置和使用色譜系統(tǒng)方面的培訓(xùn)不足。注：適當(dāng)?shù)牟僮鲉T培訓(xùn)可大大降低污染的機(jī)率，也是最容易被忽視的原因。樣品超載如果注入的樣品濃度過高，使色譜柱超載，那么在分析結(jié)束后很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)，色譜柱仍有可能繼續(xù)滲出樣品。如果沒有定期沖洗和清潔色譜柱，也會(huì)導(dǎo)致類似的問題，因?yàn)殡S著時(shí)間的推移，保留的物質(zhì)會(huì)從色譜柱中釋放出來。要避免這一問題，首先要進(jìn)行載量研究，確定色譜柱上能有效承載多少物質(zhì)。如果采用的是等度方法，需要?jiǎng)?chuàng)建一種清洗方法，使用比您的方法更強(qiáng)的溶劑（通常使用梯度），這樣就能在兩次分析之間洗去任何強(qiáng)保留物質(zhì)，因?yàn)椴牧蠒?huì)保留在色譜柱上，必須每隔一段時(shí)間使用較強(qiáng)的洗滌液將其洗掉。清洗瓶的使用和/或樣品瓶的選擇許多老式自動(dòng)進(jìn)樣器設(shè)計(jì)使用低壓進(jìn)樣器，這些進(jìn)樣器需要單獨(dú)的清洗瓶，因?yàn)樗鼈儾恍枰掷m(xù)清洗。清洗瓶中應(yīng)注入流動(dòng)相或溶液，以溶解系統(tǒng)中可能殘留的任何物質(zhì)。如果使用的是現(xiàn)代高壓“直通式 ”自動(dòng)進(jìn)樣器，則很少會(huì)出現(xiàn)攜帶污染問題，因?yàn)檫@些現(xiàn)代進(jìn)樣器使用高壓泵將樣品吸入并直接注入流動(dòng)流路，從而減少了對(duì)任何清洗階段的需求。注：對(duì)于多次穿刺的小瓶，必須更換隔膜或使用密封時(shí)間足夠長(zhǎng)的隔膜材料，以減少這種影響。擦拭隔膜針可消除部分污染。這個(gè)問題會(huì)造成兩種污染。(a)當(dāng)針頭浸入同樣有一個(gè)大隔膜開口的樣品瓶（相同或不同的樣品瓶）時(shí)，針頭會(huì)帶著一些樣品沉積到新的樣品瓶（或樣品瓶的隔膜上）。(b)污染物還可能順著針頭本身流下，在進(jìn)樣時(shí)滴到針座上，造成針座或樣本污染。減少針頭外部污染的最簡(jiǎn)單的解決方案之一，就是在洗瓶中加入一種溶液，這種溶液經(jīng)過優(yōu)化，可以快速將樣品溶解到溶液中。這聽起來很簡(jiǎn)單，但許多色譜分析人員選擇的清洗液根本無法提高洗針的清潔度。例如肽、蛋白質(zhì)、脂肪、油類和/或脂類等樣品可能很麻煩，因?yàn)樗鼈兊娜芙庑钥赡芘c所選的流動(dòng)相不符；流動(dòng)相通常是理想的，但在某些情況下卻不起作用。這些清洗瓶必須經(jīng)常更換（只需在系統(tǒng)中設(shè)置多個(gè)清洗瓶位置即可）。此外，每次使用清洗瓶時(shí)都應(yīng)將瓶蓋關(guān)閉，以減少吸取污染（此步驟至關(guān)重要）。缺乏 HPLC 維護(hù)大多數(shù)自動(dòng)進(jìn)樣器閥門，依靠旋轉(zhuǎn)密封將樣品從針環(huán)路轉(zhuǎn)移到系統(tǒng)的流路中。這些閥門內(nèi)的部件會(huì)磨損，應(yīng)至少每6個(gè)月檢查一次，必要時(shí)更換。此外，還應(yīng)經(jīng)常檢查針座和針是否有磨損或泄漏的跡象。注：查看進(jìn)樣器是否有泄漏跡象。泄漏總是表明存在問題，應(yīng)立即解決。有泄漏時(shí)不要進(jìn)行進(jìn)樣。您的方法和獲得的數(shù)據(jù)將無效。應(yīng)更換任何磨損的部件并測(cè)試系統(tǒng)性能。造成樣品攜帶污染的最常見原因之一是：樣品注入閥旋轉(zhuǎn)密封磨損。磨損的密封件會(huì)使樣品在兩次進(jìn)樣之間滯留在其空間和凹槽中，導(dǎo)致在隨后的分析中出現(xiàn)樣品色譜峰。此外，緩沖鹽也會(huì)滯留在密封件之間，造成泄漏或攜帶污染。例行的 HPLC 維護(hù)以及每天沖洗所有緩沖液/鹽（如適用）可消除這些問題。操作員培訓(xùn)不足良好的色譜分析需要全面了解所使用的硬件和HPLC的基本原理。您必須能夠?qū)ο到y(tǒng)的完整流路和方法開發(fā)中使用的色譜概念進(jìn)行故障排除，通過指導(dǎo)，采用合理的步驟來學(xué)習(xí)。
文章來源：網(wǎng)絡(luò)
基線變化基線變化一般不會(huì)很有規(guī)律，如果在自動(dòng)量程下監(jiān)控基線情況，不可能得到原來儀器理想狀態(tài)的有規(guī)律的基線在高頻率上下浮動(dòng)的變化，而是有時(shí)候會(huì)得到低頻率變化的峰，看上去很像有東西洗脫出來，并且峰寬比較大，像共洗脫現(xiàn)象似的�；�漂移不像原來那樣慢慢的變平，而是一直朝一個(gè)方向漂，比如向上漂，平衡一天也可能是一直在漂。柱壓變化柱壓變化影響較小，除非是檢測(cè)池太臟，堵塞嚴(yán)重，會(huì)對(duì)柱壓產(chǎn)生小于1000psi的影響（一般的用到光的檢測(cè)池也就耐這么高的壓力），但這種情況不會(huì)持續(xù)發(fā)生，給你排查的時(shí)間有限，堵的時(shí)間長(zhǎng)了，會(huì)爆池，壓力也就沒有影響了。峰面積變化峰面積應(yīng)該是變小。檢測(cè)池臟時(shí)會(huì)有兩種情形影響檢測(cè)靈敏度。一方面是基線噪聲變大，從整體上影響信噪比。另一方面，檢測(cè)池臟了對(duì)于光檢測(cè)原理的檢測(cè)器來說（UV、PDA、DAD、FLD、ELSD）首先會(huì)減弱通過檢測(cè)池的光強(qiáng)度，光強(qiáng)度降低了，靈敏度就會(huì)下降，相當(dāng)于檢測(cè)器光源的能量降低。保留時(shí)間有時(shí)由于檢測(cè)器臟了，系統(tǒng)壓力增加，然后某個(gè)接口的地方出現(xiàn)漏液，導(dǎo)致保留時(shí)間出現(xiàn)一些變化，不過這種可能性較小。攜帶污染類型、發(fā)生原因和減少方法“攜帶污染”（或俗稱“殘留”）是用來描述一種樣品污染的術(shù)語，它會(huì)導(dǎo)致分析物的色譜峰在之后的樣品分析中再次出現(xiàn)，而這些分析實(shí)際上并不包含樣品（例如空白樣或純?nèi)軇�。這種污染可持續(xù)數(shù)次連續(xù)分析，通常在每次進(jìn)樣后污染量都會(huì)減少（這是排除故障時(shí)的關(guān)鍵觀察點(diǎn)）。如果提供了適當(dāng)?shù)膬x器培訓(xùn)，現(xiàn)代高效液相色譜系統(tǒng)的設(shè)計(jì)會(huì)使攜帶污染現(xiàn)象變得極為罕見，但當(dāng)攜帶現(xiàn)象出現(xiàn)時(shí)，污染可能是由于以下原因造成的：(1) 缺乏高效液相色譜維護(hù)；(2) 樣品超載，造成色譜柱殘留；(3) 洗滌瓶使用不當(dāng)和/或樣品瓶選擇不當(dāng)；(4) 操作員在如何設(shè)置和使用色譜系統(tǒng)方面的培訓(xùn)不足。注：適當(dāng)?shù)牟僮鲉T培訓(xùn)可大大降低污染的機(jī)率，也是最容易被忽視的原因。樣品超載如果注入的樣品濃度過高，使色譜柱超載，那么在分析結(jié)束后很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)，色譜柱仍有可能繼續(xù)滲出樣品。如果沒有定期沖洗和清潔色譜柱，也會(huì)導(dǎo)致類似的問題，因?yàn)殡S著時(shí)間的推移，保留的物質(zhì)會(huì)從色譜柱中釋放出來。要避免這一問題，首先要進(jìn)行載量研究，確定色譜柱上能有效承載多少物質(zhì)。如果采用的是等度方法，需要?jiǎng)?chuàng)建一種清洗方法，使用比您的方法更強(qiáng)的溶劑（通常使用梯度），這樣就能在兩次分析之間洗去任何強(qiáng)保留物質(zhì)，因?yàn)椴牧蠒?huì)保留在色譜柱上，必須每隔一段時(shí)間使用較強(qiáng)的洗滌液將其洗掉。清洗瓶的使用和/或樣品瓶的選擇許多老式自動(dòng)進(jìn)樣器設(shè)計(jì)使用低壓進(jìn)樣器，這些進(jìn)樣器需要單獨(dú)的清洗瓶，因?yàn)樗鼈儾恍枰掷m(xù)清洗。清洗瓶中應(yīng)注入流動(dòng)相或溶液，以溶解系統(tǒng)中可能殘留的任何物質(zhì)。如果使用的是現(xiàn)代高壓“直通式 ”自動(dòng)進(jìn)樣器，則很少會(huì)出現(xiàn)攜帶污染問題，因?yàn)檫@些現(xiàn)代進(jìn)樣器使用高壓泵將樣品吸入并直接注入流動(dòng)流路，從而減少了對(duì)任何清洗階段的需求。注：對(duì)于多次穿刺的小瓶，必須更換隔膜或使用密封時(shí)間足夠長(zhǎng)的隔膜材料，以減少這種影響。擦拭隔膜針可消除部分污染。這個(gè)問題會(huì)造成兩種污染。(a)當(dāng)針頭浸入同樣有一個(gè)大隔膜開口的樣品瓶（相同或不同的樣品瓶）時(shí)，針頭會(huì)帶著一些樣品沉積到新的樣品瓶（或樣品瓶的隔膜上）。(b)污染物還可能順著針頭本身流下，在進(jìn)樣時(shí)滴到針座上，造成針座或樣本污染。減少針頭外部污染的最簡(jiǎn)單的解決方案之一，就是在洗瓶中加入一種溶液，這種溶液經(jīng)過優(yōu)化，可以快速將樣品溶解到溶液中。這聽起來很簡(jiǎn)單，但許多色譜分析人員選擇的清洗液根本無法提高洗針的清潔度。例如肽、蛋白質(zhì)、脂肪、油類和/或脂類等樣品可能很麻煩，因?yàn)樗鼈兊娜芙庑钥赡芘c所選的流動(dòng)相不符；流動(dòng)相通常是理想的，但在某些情況下卻不起作用。這些清洗瓶必須經(jīng)常更換（只需在系統(tǒng)中設(shè)置多個(gè)清洗瓶位置即可）。此外，每次使用清洗瓶時(shí)都應(yīng)將瓶蓋關(guān)閉，以減少吸取污染（此步驟至關(guān)重要）。缺乏 HPLC 維護(hù)大多數(shù)自動(dòng)進(jìn)樣器閥門，依靠旋轉(zhuǎn)密封將樣品從針環(huán)路轉(zhuǎn)移到系統(tǒng)的流路中。這些閥門內(nèi)的部件會(huì)磨損，應(yīng)至少每6個(gè)月檢查一次，必要時(shí)更換。此外，還應(yīng)經(jīng)常檢查針座和針是否有磨損或泄漏的跡象。注：查看進(jìn)樣器是否有泄漏跡象。泄漏總是表明存在問題，應(yīng)立即解決。有泄漏時(shí)不要進(jìn)行進(jìn)樣。您的方法和獲得的數(shù)據(jù)將無效。應(yīng)更換任何磨損的部件并測(cè)試系統(tǒng)性能。造成樣品攜帶污染的最常見原因之一是：樣品注入閥旋轉(zhuǎn)密封磨損。磨損的密封件會(huì)使樣品在兩次進(jìn)樣之間滯留在其空間和凹槽中，導(dǎo)致在隨后的分析中出現(xiàn)樣品色譜峰。此外，緩沖鹽也會(huì)滯留在密封件之間，造成泄漏或攜帶污染。例行的 HPLC 維護(hù)以及每天沖洗所有緩沖液/鹽（如適用）可消除這些問題。操作員培訓(xùn)不足良好的色譜分析需要全面了解所使用的硬件和HPLC的基本原理。您必須能夠?qū)ο到y(tǒng)的完整流路和方法開發(fā)中使用的色譜概念進(jìn)行故障排除，通過指導(dǎo)，采用合理的步驟來學(xué)習(xí)。
文章來源：網(wǎng)絡(luò)
