一、
實(shí)驗(yàn)室操作標(biāo)準(zhǔn)程序
(一) 目的
建立高壓滅菌鍋操作以及維護(hù)保養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)程序,規(guī)范操作人員的操作,從而確保人員的安全及設(shè)備的正常運(yùn)行。
(二) 范圍
適用于本所高壓蒸汽滅菌器滅菌效果的驗(yàn)證。
(三) 職責(zé)
3.1 質(zhì)量負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)該驗(yàn)證程序。
3.2 質(zhì)量監(jiān)督員負(fù)責(zé)監(jiān)督該程序的實(shí)施。
3.3 檢驗(yàn)人員負(fù)責(zé)該程序的實(shí)施,并做好相關(guān)記錄。
(四) 程序
4.1 檢驗(yàn)人員按該程序?qū)嵤?/span>驗(yàn)證,做好記錄,做出結(jié)果評(píng)價(jià),上報(bào)質(zhì)量負(fù)責(zé)人。
4.2 以上驗(yàn)證結(jié)果經(jīng)質(zhì)量負(fù)責(zé)人批準(zhǔn),以后高壓蒸汽滅菌器按驗(yàn)證的方法操作。
(五)試驗(yàn)步驟
高壓蒸氣滅菌器使物品滅菌后達(dá)到無(wú)菌要求,這是藥品實(shí)驗(yàn)中的基本保證。高壓滅菌器滅菌效果是否合格足實(shí)驗(yàn)成敗的最基礎(chǔ)最關(guān)鍵的首要步驟。除少數(shù)培養(yǎng)基只需加熱溶解,不需高壓滅菌外,大部分培養(yǎng)基均需121℃高壓滅菌15-30分鐘。尤其是對(duì)無(wú)菌試驗(yàn)培養(yǎng)基滅菌不徹底,直接關(guān)系到對(duì)藥品的無(wú)菌試驗(yàn)結(jié)果。因此必須認(rèn)真對(duì)高壓滅菌器進(jìn)行滅菌效果的驗(yàn)證。為此我們提供了進(jìn)行滅菌效果驗(yàn)證的一個(gè)簡(jiǎn)易可行的方法。
5.1.1 嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片。
嗜熱脂肪芽胞桿菌
(Bacillus stearothermophilus)ATCC7053是本法常用的生物指示菌,含芽胞量5-105CFU/片。
5.1.2 121℃壓力蒸氣滅菌化學(xué)指示卡。
5.1.3 溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基116℃高壓滅菌20分鐘后備用。
5.1.4 0—150℃留點(diǎn)溫度計(jì)。
將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片(以下簡(jiǎn)稱菌片)用無(wú)菌鑷子放人密封試管中。化學(xué)指示卡和留點(diǎn)溫度計(jì)放入敞口試管中。以上兩種試管各準(zhǔn)備5-10份。分別放置在高壓滅菌器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如滅菌器為二層,則需放10處。
留點(diǎn)溫度計(jì)標(biāo)化合格后方可用于驗(yàn)證試驗(yàn)。檢測(cè)前,需將溫度計(jì)的水銀柱甩至40℃以下。每次監(jiān)測(cè)后留點(diǎn)溫度計(jì)的溫差應(yīng)存1℃之間,則說(shuō)明滅菌器內(nèi)的溫度分布是均勻的。
滅菌后的菌片應(yīng)在嚴(yán)格無(wú)菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi)56-60℃培養(yǎng)24-48小時(shí),觀察顏色變化。如培養(yǎng)基變?yōu)辄S色,說(shuō)明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活,細(xì)菌仍可在培養(yǎng)基中生長(zhǎng),分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色,則說(shuō)明芽胞已滅活。同時(shí)要用未經(jīng)滅菌的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽(yáng)性對(duì)照,不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照。
化學(xué)指示卡上的指示色塊,在高壓蒸氣滅菌時(shí),由淡黃色變?yōu)楹谏。隨著顏色變化的深淺,并與對(duì)照色相比,可判斷滅菌效果是否達(dá)到要求;瘜W(xué)指示卡應(yīng)在干燥處保存。遇潮會(huì)變色,影響滅菌效果的觀測(cè)。
高壓蒸氣滅菌必須使蒸氣順利進(jìn)入滅菌器內(nèi),與滅菌物品接觸,并將原有的冷空氣排出方可達(dá)到滅菌的效果。要進(jìn)行空載熱分布和滿載熱穿透力驗(yàn)證(滿載時(shí)不超過(guò)總體積的2/3)。二種驗(yàn)證各重復(fù)三次,共做六次。
5個(gè)點(diǎn)六次試驗(yàn)表明溫度均在121℃,化學(xué)指示卡變黑;程度與對(duì)照色一致;培養(yǎng)基均未改變顏色,說(shuō)明高壓蒸氣滅菌效果合格。
5.3 驗(yàn)證結(jié)果與評(píng)定
驗(yàn)證結(jié)束后,驗(yàn)證人員依據(jù)試驗(yàn)結(jié)果對(duì)本次驗(yàn)證做出評(píng)價(jià)和結(jié)論,并擬定高壓蒸汽滅菌器的操作規(guī)程和滅菌驗(yàn)證頻次,上報(bào)質(zhì)量負(fù)責(zé)人。
5.4 質(zhì)量記錄
《高壓蒸汽滅菌效果驗(yàn)證記錄》