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液相常見問題10小問

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2016-12-14  來源:食品實(shí)驗(yàn)室服務(wù)公眾號
核心提示:本文主要對液相色譜常見問題原因進(jìn)行了總結(jié),為液相操作人員提供參考!


如何進(jìn)行色譜柱的維護(hù)?

建議檢測前樣品和流動(dòng)相進(jìn)行過濾。
建議每天做完樣品后及時(shí)進(jìn)行清洗。
常規(guī)檢測
測試完后直接把色譜柱反向連接采用90%有機(jī)相沖洗45min,最后保存在純甲醇或純乙腈中。
使用緩沖鹽條件:
a等度條件:使用緩沖鹽之前和之后都用過渡流動(dòng)相以1ml/min流速?zèng)_洗45min。
b梯度條件:使用緩沖鹽之前與初始流動(dòng)相組成相同的過渡流動(dòng)相以1ml/min流速?zèng)_洗45min。
注意:過渡流動(dòng)相是指有機(jī)相和水相比例與分析流動(dòng)相相同比例,只是不含有緩沖鹽。
c緩沖鹽沖洗干凈后,采用90%有機(jī)相反向沖洗60min,最后保存在純有機(jī)溶劑中。
注意:如果使用緩沖液不能存留色譜柱中過夜。

氨基柱在進(jìn)酸性樣品時(shí),很傷柱子,如使用一段時(shí)間后,柱效降低,峰形改變,如何恢復(fù)?

答:用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0NH3的乙腈-(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨),之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1%。

液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?

①篩板堵塞或柱失效,解決辦法是反向沖洗柱子,替換篩板或更換柱子。
②存在干擾峰,解決辦法為使用較長的柱子,改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子。
③可能柱超載,減少進(jìn)樣量。

4 HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法是什么?

①樣品量不足,解決辦法為增加樣品量。
②樣品未從柱子中流出,可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子。
③樣品與檢測器不匹配,根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器。
④檢測器衰減太多,調(diào)整衰減即可。
⑤檢測器時(shí)間常數(shù)太大,解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)。
⑥檢測器池窗污染,解決辦法為清洗池窗。
⑦檢測池中有氣泡,解決辦法為排氣。
⑧記錄儀測壓范圍不當(dāng),調(diào)整電壓范圍即可。
⑨流動(dòng)相流量不合適,調(diào)整流速即可。
⑩檢測器與記錄儀超出校正曲線,解決辦法為檢查記錄儀與檢測器,重作校正曲線。

HPLC分析時(shí),柱壓不穩(wěn)定,原因何在?如何解決?

泵內(nèi)有空氣,解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣,對溶劑進(jìn)行脫氣處理。
比例閥失效,更換比例閥即可。
泵密封墊損壞,更換密封墊即可。
溶劑中的氣泡,解決的辦法是對溶劑脫氣,必要時(shí)改變脫氣方法。
系統(tǒng)檢漏,找出漏點(diǎn),密封即可。
梯度洗脫,這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。

6 HPLC柱驗(yàn)收測試時(shí)柱壓過高,請問為什么?

柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的問題,您可按下面步驟檢查問題的起因:
①拆去保護(hù)預(yù)柱,看柱壓是否還高,否則是保護(hù)柱的問題,若柱壓仍高,再檢查。
②把色譜柱從儀器上取下,看壓力是否下降,否則是管路堵塞,需清洗,若壓力下降,再檢查。
③將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上,用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子,(此時(shí)不要連接檢測器,以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池)。這時(shí),如果柱壓仍不下降,再檢查。只用于使用過的柱子。
更換柱子入口篩板,若柱壓下降,說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì),正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高,請與廠商聯(lián)系。一般情況下,在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過濾器便可避免柱壓過高的問題。

為何出現(xiàn)峰展寬?

樣品體積過大:用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%
②在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展:進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散。
③數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢:設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)。
流動(dòng)相粘度過高:增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相。
檢測池體積過大:用小體積池,卸下熱交換器。
保留時(shí)間過長:等度洗脫時(shí)增加強(qiáng)溶劑含量,也可用梯度洗脫。
柱外體積過大:將連接管徑和連接管長度降至最小。
樣品過載:進(jìn)小濃度小體積樣品。

流動(dòng)相出現(xiàn)氣泡的原因有哪些?

流動(dòng)相溶液中往往因溶解有氧氣或空氣而形成氣泡。
液路阻力比較大,吸液時(shí)出現(xiàn)了真空氣泡。
系統(tǒng)開始工作時(shí)未能將流路中的空氣排除干凈。
在注入樣品時(shí)混入了空氣。

常用的實(shí)驗(yàn)室脫氣方式還有哪些?

加熱回流脫氣,脫氣效果最佳,但無法保持。
氦脫氣,此方法脫氣效果佳,能除去百分之九十以上的空氣,但氦氣價(jià)格太貴,所以用的不多。
真空脫氣,效果僅次于氦脫氣,但脫氣過程中容易造成樣品溶液揮發(fā)損失。
超聲脫氣,只能脫去約百分之三十的空氣,但在實(shí)驗(yàn)室中最常用。目前還是盡量爭取用在線脫氣,方便且效果好。

10 氨基柱在進(jìn)酸性樣品時(shí),很傷柱子,如使用一段時(shí)間后,柱效降低,峰形改變,如何恢復(fù)?

答:用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0NH3的乙腈-(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨),之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1%。

編輯:songjiajie2010

 
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