一、氨基酸分析方法分類

氨基酸分析按其分離和檢測(cè)方法的不同可分為三大類型。第一類是基于陽(yáng)離子交換柱分離、柱后茚三酮衍生、光度法測(cè)定的離子交換色譜法（IEC）。此類方法由Stein和Moore兩人1958年發(fā)明，并于1972年獲諾貝爾獎(jiǎng)，是當(dāng)今國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)以及仲裁和涉外的方法。第二類是所有基于反相色譜分離、柱前衍生、熒光或紫外檢測(cè)的高效液相法（HPLC）。第三類是陰離子交換分離直接安培法檢測(cè)的離子色譜法IC，嚴(yán)格說(shuō)來(lái)，陰離子交換和陽(yáng)離子交換都叫“IEC”，在此將陰離子交換分離、安培檢測(cè)的方法歸類為IC，是因?yàn)檫@類儀器實(shí)際上就是離子色譜儀，只不過(guò)配置側(cè)重點(diǎn)為氨基酸分析。本文中對(duì)三類方法多用簡(jiǎn)稱。

說(shuō)明：

1、PITC異硫氰酸苯酯；OPA鄰苯二甲醛；FMOC 9-芴基甲氧羰酰氯；AQC 6-氨基-喹啉基-N-羥基琥貝酰亞胺-氨基甲酸酯；DABS-Cl 二甲基氨基偶氮苯磺酰氯。

2、IEC法也可使用柱后OPA衍生（熒光檢測(cè)），可以降低檢測(cè)限到1pmol，但無(wú)法檢測(cè)二級(jí)氨基酸。

二、用戶如何選擇適合自己的方法和儀器

氨基酸分析的方法和儀器多種多樣，用戶應(yīng)該根據(jù)自己的實(shí)際應(yīng)用情況和發(fā)展趨勢(shì)來(lái)選擇方法和儀器。選擇時(shí)可參考以下幾個(gè)方面：

1、是否需要對(duì)分析結(jié)果負(fù)責(zé)（如對(duì)外出具報(bào)告等）

IEC儀器使用茚三酮柱后衍生法，符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)際仲裁標(biāo)準(zhǔn)，而IC法和HPLC法雖然總體性能也比較穩(wěn)定可靠，但其測(cè)量結(jié)果與茚三酮法有較大差異，且結(jié)果難以長(zhǎng)期重復(fù)，這對(duì)于仲裁不利。目前，IC法和HPLC法分析氨基酸一般僅用于不太深入的研究，而且主要是利用其靈敏度較高的特性。也有部分企業(yè)用來(lái)做內(nèi)部質(zhì)量控制（國(guó)家沒(méi)有制定相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)），但如果要考慮對(duì)外做樣并出具結(jié)果報(bào)告，IEC儀器是唯一選擇。由于國(guó)內(nèi)的氨基酸分析呈現(xiàn)急劇上升的勢(shì)頭，而很多單位經(jīng)濟(jì)能力有限，因此也確有不少單位購(gòu)買專用氨基酸分析儀作為創(chuàng)收手段。

2、一次進(jìn)樣需要出峰的數(shù)量是多還是少

氨基酸種類繁多、性質(zhì)接近，因此氨基酸分析是色譜界公認(rèn)的難題，盡管現(xiàn)在有多種多樣的方法，但沒(méi)有任何方法能夠保證所有氨基酸峰能夠一次進(jìn)樣完全的分離。僅僅從分離程度來(lái)說(shuō)，好的HPLC方法最多可以一次分離檢測(cè)20種左右的氨基酸峰，IC法最多可一次分離檢測(cè)約30種氨基酸峰（理論上說(shuō)來(lái)，IC法可達(dá)到與IEC法相當(dāng)?shù)某龇鍞?shù)量，但金電極的基線漂移較大，保留時(shí)間太長(zhǎng)的峰就難以定量分析），IEC法最多一次可分離檢測(cè)50種左右的氨基酸峰。從這個(gè)角度來(lái)說(shuō)，如果您需要分析游離氨基酸樣品，就應(yīng)當(dāng)選擇IEC儀器。

3、氨基酸分析頻率高還是低

氨基酸樣品分析頻率如果達(dá)到每個(gè)星期至少1次，就可以算“頻率較高”，少于每周1次就可以說(shuō)是“較低”。頻率較高時(shí)，應(yīng)當(dāng)儀器專用化（即便是用HPLC和IC法，也應(yīng)專用于氨基酸分析），因?yàn)榉磸?fù)更換柱子和緩沖體系不僅麻煩、平衡時(shí)間長(zhǎng)，難以保證分析結(jié)果的可靠性和重復(fù)性，而且容易損壞儀器。

4、氨基酸樣品總量是多還是少

總體的成本應(yīng)考慮到做樣成本，而不能只看儀器本身。HPLC做氨基酸分析時(shí)，每根柱子只能進(jìn)樣100～500針，而IEC儀器的柱子都超過(guò)1000針（sykam柱子使用國(guó)產(chǎn)試劑時(shí)大于4000針，使用進(jìn)口試劑時(shí)大于6000針）。

如果都使用國(guó)產(chǎn)試劑，HPLC儀器單針成本平均160元人民幣，IEC儀器單針成本平均不到20元人民幣，IC儀器單針成本平均60元人民幣（IC法無(wú)需衍生劑，但檢測(cè)電極是消耗品）。此處計(jì)算了標(biāo)樣、緩沖溶液、衍生劑、柱子等消耗品價(jià)格，而儀器的維護(hù)保養(yǎng)費(fèi)用相同（未計(jì)算）。下表是專用氨基酸分析儀IEC、HPLC和IC（都配置自動(dòng)進(jìn)樣，HPLC加配氨基酸分析包）的總成本分析。

也就是說(shuō)，當(dāng)分析樣品量超過(guò)1000個(gè)（進(jìn)樣針數(shù)大于2500），IEC專用氨基酸分析儀就開(kāi)始成為費(fèi)用最低的儀器了。通常儀器的使用壽命超過(guò)8年（平均10年左右），只要每年的樣品量大于100個(gè)，IEC儀器就沒(méi)有價(jià)格上的劣勢(shì)。

三、哪些儀器是“氨基酸分析儀”

我們已經(jīng)比較了HPLC、IC和IEC這三大類氨基酸分析方法，總的說(shuō)來(lái)，它們適合不同情況下的應(yīng)用，雖然IEC茚三酮柱后衍生法適應(yīng)范圍更廣泛，但儀器售價(jià)也明顯要高。目前中國(guó)市場(chǎng)上號(hào)稱是專用氨基酸分析儀的有很多，對(duì)于用戶而言，也未必需要去分辯誰(shuí)是真正的專用氨基酸分析儀，而且國(guó)家儀器名錄甚至國(guó)際上都沒(méi)有明確提出專用氨基酸分析儀的定義，但在中國(guó)市場(chǎng)，無(wú)論是使用者還是儀器廠家，一般都是把陽(yáng)離子交換分離、茚三酮柱后衍生法儀器叫作“氨基酸分析儀”。這類儀器技術(shù)門檻較高，國(guó)內(nèi)目前還沒(méi)有廠家生產(chǎn)此類儀器，代表廠商有德國(guó)sykam、日本hitachi等。而IC法儀器的代表是Dionex公司的AAA-direct。

四、IEC儀器之間的比較

IEC儀器也有幾個(gè)廠家生產(chǎn)，用戶該如何選擇？

第一，當(dāng)然是滿足分析需要的技術(shù)指標(biāo)如分離度、重復(fù)性等要求，而其中的分離度又是更為重要的指標(biāo)，因?yàn)椋�色譜理論一般以分離度達(dá)到1.2作為兩峰基本分離的判定前提，只有峰分開(kāi)了，才有意義去討論定性和定量的重復(fù)性。

第二，應(yīng)考慮儀器的可靠性。如果儀器今天堵了、明天漏了，用戶不僅要付出大量人力財(cái)力，分析結(jié)果的可信度也將大打折扣。

第三，應(yīng)考慮儀器的運(yùn)行成本。例如是否可以使用國(guó)產(chǎn)試劑、柱子壽命（以多少次進(jìn)樣計(jì)算、而不以多少年計(jì)算）等。

第四，應(yīng)考慮儀器設(shè)計(jì)是否有利于氨基酸分析，例如是否有惰性氣體保護(hù)（茚三酮極易被氧化）、是否提供在線脫氣、是否提供溶液和樣品的制冷控制等。

第五，應(yīng)考慮售后服務(wù)。分析過(guò)程中遇到困難是在所難免，廠家必須能夠快速響應(yīng)、盡快解決問(wèn)題。另外，常用備件的價(jià)格也是一個(gè)重要因素，因?yàn)橛脩粼谫?gòu)買前一般難以注意到售后的問(wèn)題，而很多廠家也沒(méi)有公示自己的常用備件價(jià)格，這就為將來(lái)的使用埋下了隱患，事實(shí)上，也的確有很多儀器（尤其是進(jìn)口儀器）在出現(xiàn)一些看似微小的故障之后，就因?yàn)榫S修費(fèi)用太高而被“束之高閣”。