培養(yǎng)基的作用是為微生物提供生長和繁殖所需的營養(yǎng)物質和環(huán)境條件。培養(yǎng)基的質量直接關系到檢驗結果的準確性和可靠性,因此對于微生物檢驗而言,培養(yǎng)基的質量控制尤為重要。
滅菌
制備
培養(yǎng)基的儲存 驗收入庫的培養(yǎng)基應嚴格按照生產廠家標明的儲存條件、保存期限、使用方法保存和使用。開封后的商品化脫水合成培養(yǎng)基要放置在密閉容器中保存,在瓶身注明首次開封日期 。實驗室自制培養(yǎng)基應避光、干燥保存,需冷藏的培養(yǎng)基可放置在2~8℃冰箱中保存,平板保存時間通常為2~4周,瓶裝及試管裝培養(yǎng)基保存時間一般為3~6個月,具體效期應進行驗證。每次使用培養(yǎng)基前,要觀察顏色變化、流動性、均勻性、是否結塊和是否污染等情況。如果發(fā)現培養(yǎng)基出現受潮、結塊、其他性狀明顯改變的情況,應停止使用。
培養(yǎng)基的主要作用有兩方面:
①提供微生物生長所需的營養(yǎng)物質;
②培養(yǎng)基具有選擇性和差異性,可以選擇特定類型的細菌或真菌進行培養(yǎng),并區(qū)分不同種類的微生物。
因此,在微生物檢驗中,必須對培養(yǎng)基進行嚴格的質量控制,只有優(yōu)質的培養(yǎng)基才能為微生物檢驗提供精準、可靠的檢測結果。
培養(yǎng)基的概述
培養(yǎng)基是用于保證微生物繁殖、鑒定、保持活力的物質,按照物理性質可以分成液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和脫水培養(yǎng)基,按照化學性質可以分成天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基和半組合培養(yǎng)基,按照功能可以分成選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。不同培養(yǎng)基要求不同,保存方式也不同。在受熱、吸潮后,培養(yǎng)基極易被微生物污染或分解變質,需在避光、防潮、陰涼處儲存。
培養(yǎng)基的采購驗收
微生物檢驗需使用大量培養(yǎng)基。為提高檢驗效率,實驗室多使用商品化即用型培養(yǎng)基、商品化脫水合成培養(yǎng)基。在培養(yǎng)基的采購中,應選擇國內、外知名商家的產品,并向生產企業(yè)索要培養(yǎng)基成分名稱、產品編號、批號、最終 pH 值、儲存條件、生產日期、有效期、質控報告和必要的相關信息,以保證培養(yǎng)基的質量。在產品交貨驗收時,購買者需對產品包裝的完整性、生產日期、有效期和產品合格證明等進行核驗,檢查培養(yǎng)基的顏色、性質等是否符合實驗室相關標準,培養(yǎng)基檢驗合格后進行入庫登記。
培養(yǎng)基的制備
配制要求
正確按要求制備培養(yǎng)基是做好微生物檢驗的基礎。實驗人員使用商品化脫水合成培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基時,要嚴格按照產品說明進行配制,并做好配制記錄。在配制過程中,實驗人員需要嚴格遵守相關操作標準,佩戴口罩進行操作,避免吸入含有有毒物質的培養(yǎng)基粉末,稱量、溶解應使用專門的角匙,不使用金屬制品,避免金屬離子混入培養(yǎng)基,影響微生物生長;準確稱量后,應先加入適量的水充分溶解,再加水至所需量進行加熱,加熱中應不斷攪拌,防止培養(yǎng)基在容器底部積聚;調節(jié)pH值,分裝到比培養(yǎng)基體積最少大 20% 的容器中,按說明要求進行滅菌。粉末狀態(tài)的培養(yǎng)基開封后應存放在陰涼干燥處,及時使用,環(huán)境濕度過大會使培養(yǎng)基出現受潮、結塊、污染等情況。對于瓊脂類培養(yǎng)基,可采用沸水浴或流動蒸汽的加熱方式進行融化,但反復凍融只允許進行1次。
配制用水
水是配制培養(yǎng)基不可或缺的一部分,一般使用純化水。還應定期檢查培養(yǎng)基配制用水的微生物污染情況,應符合純化水要求。
滅菌能確保培養(yǎng)基質量達標,實驗室常采用濕熱滅菌法,培養(yǎng)基應按照產品使用說明要求進行滅菌,每次滅菌需放置壓力蒸汽滅菌化學指示卡,驗證滅菌效果。一些培養(yǎng)基可以通過煮沸的方式進行滅菌,如結晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養(yǎng)基、亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基。實驗人員應及時將培養(yǎng)基從滅菌鍋中取出,盡快冷卻至所需溫度,防止加熱過度,對實驗數據造成影響;要檢查培養(yǎng)基的pH值、色澤、均勻度等指標,確保符合要求后貼上標簽,標明名稱、日期、效期等基本信息。
制備平板時,將滅菌后的培養(yǎng)基傾注于滅菌過的干燥平皿中,在平皿中形成至少3mm的厚度,直徑90mm 的平皿通常需要加入18~20 mL 的瓊脂培養(yǎng)基,需要保存或培養(yǎng)超過48h的培養(yǎng)基應傾注更多培養(yǎng)基 。培養(yǎng)基冷卻凝固后應立即使用或儲存,儲存時應標記好培養(yǎng)基名稱及制備日期,密封后放置在2~8 ℃冰箱中。制備斜面培養(yǎng)基時,應先將培養(yǎng)基分裝到試管中,通常每管加入10mL培養(yǎng)基,高壓滅菌,在培養(yǎng)基冷卻凝固前將試管傾斜一定角度放置,待冷卻凝固后方能使用和保存。對于液體培養(yǎng)基,根據使用要求直接分裝至三角瓶或試管中,滅菌,冷卻至室溫直接使用或保存。