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微生物培養(yǎng)應(yīng)該注意哪些?這套新手入門指南送給你!

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-06-27
核心提示:微生物的生長,除了受本身的遺傳特性決定外,還受到許多外界因素的影響,如營養(yǎng)物濃度、溫度、水分、氧氣、pH等。微生物的種類不
微生物的生長,除了受本身的遺傳特性決定外,還受到許多外界因素的影響,如營養(yǎng)物濃度、溫度、水分、氧氣、pH等。
微生物的種類不同,培養(yǎng)的方式和條件也不盡相同。

影響微生物生長的因素

影響微生物生長的因素很多,簡要介紹如下:
(1)水分
水分是微生物實驗室培養(yǎng)中進行生長的必要條件。芽孢、孢子萌發(fā),首先需要水分。
微生物是不能脫離水而生存的。但是微生物只能在水溶液中生長,而不能生活在純水中。各種微生物在不能生長發(fā)育的水分活性范圍內(nèi),均具有狹小的適當?shù)乃只钚詤^(qū)域。
(2)溫度
在一定的溫度范圍內(nèi),每種微生物都有自已的生長溫度三基點:

最低生長溫度
最適生長溫度
最高生長溫度

在生長溫度三基點內(nèi),微生物都能生長,但生長速率不一樣。微生物只有處于最適生長溫度時,生長速度才最快,用時最短。超過最低或最高生長溫度,微生物不會生長,甚至會死亡。

一般情況下,每種微生物的生長溫度三基點是恒定的。但也常受其它環(huán)境條件的影響而發(fā)生變化。根據(jù)微生物最適生長溫度的不同,可將它們分為三個類型:

a.嗜冷微生物:其最適生長溫度多數(shù)在-10℃-20℃之間
b.中溫微生物:其最適生長溫度一般在20℃-45℃之間
c.嗜熱微生物:生長溫度在45℃以上。

(3)營養(yǎng)物濃度

細菌的生長率與營養(yǎng)物的濃度有關(guān):μ=μmax*C/(K+C) ,營養(yǎng)物濃度與生長率的關(guān)系曲線是典型的雙曲線。

K值是細菌生長的很基本的特性常數(shù)。它的數(shù)值很小,表明細菌所需要的營養(yǎng)濃度非常之低。

然而營養(yǎng)太低時,細菌生長就會遇到困難,甚至還會死亡。這是因為除了生長需要能量以外,細菌還需要能量來維持它的生存。這種能量稱為維持能。

(4)氧氣

按照微生物對氧氣的需要情況,可將它們分為以下五個類型。

a. 需氧微生物:這類微生物需要氧氣供呼吸之用,沒有氧氣,便不能生長。但是高濃度的氧氣對需氧微生物也是有毒的,很多需氧微生物不能在氧氣濃度大于大氣中氧氣濃度的條件下生長。絕大多數(shù)微生物都屬于這個類型。
b. 兼性需氧微生物:這類微生物在有氧氣存在或無氧氣存在情況下,都能生長,只不過所進行的代謝途徑不同罷了。在無氧氣存在的條件下,它進行發(fā)酵作用,例如酵母菌的無氧乙醇發(fā)酵。
c. 微量需氧微生物:這類菌是需要氧氣的,但只在0.2大氣壓下生長最好。這可能是由一它們含有在強氧化條件下失活的酶,因而只有在低壓下作用。
d. 耐氧微生物:這類微生物在生長過程中,不需要氧氣,但也不怕氧氣存在,不會被氧氣所殺死。
e. 厭氧微生物:這類微生物在生長過程中,不需要分子氧。分子氧存在對它們生長產(chǎn)生毒害,不是被抑制,就是被殺死。

實驗室微生物培養(yǎng)方法


根據(jù)培養(yǎng)時是否需要氧氣,可分為好氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)兩大類。
(1)好氧培養(yǎng):也稱“好氣培養(yǎng)”。這種微生物在培養(yǎng)時,需要有氧氣加入,否則就不能生長良好。
在實驗室中,斜面培養(yǎng)是通過棉花塞從外界獲得無菌的空氣。
三角燒瓶液體培養(yǎng)多數(shù)是通過搖床振蕩,使外界的空氣源源不斷地進入瓶中。
(2)厭氧培養(yǎng):也稱“厭氣培養(yǎng)”。這類微生物在培養(yǎng)時,不需要氧氣參加。在厭氧微生物的培養(yǎng)過程中,最重要的一點就是要除去培養(yǎng)基中的氧氣。一般可采用下列幾種方法:
a.降低培養(yǎng)基中的氧化還原電位:常將還原劑如谷胱甘肽、硫基醋酸鹽等,加入到培養(yǎng)基中,便可達到目的。有的將一些動物的死的或活的組織如牛心、羊腦加入到培養(yǎng)基中,也可適合厭氧菌的生長。
b.化合去氧:這也有很多方法,主要有:用焦性沒食子酸吸收氧氣;用磷吸收氧氣;用好氧菌與厭氧混合培養(yǎng)吸收氧氣;用植物組織如發(fā)芽的種子吸收氧氣;用產(chǎn)生氫氣與氧化合的方法除氧。
c.隔絕阻氧:深層液體培養(yǎng);用石蠟油封存;半固體穿刺培養(yǎng)。
d.替代驅(qū)氧:用二氧氣碳驅(qū)代氧氣;用氮氣驅(qū)代氧氣;用真空驅(qū)代氧氣;用氫氣驅(qū)代氧氣;用混和氣體驅(qū)代氧氣。
根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài),可分為固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)兩大類。
(1)固質(zhì)培養(yǎng):是將菌種接至疏松而富有營養(yǎng)的固體培養(yǎng)基中,在合適的條件下進行微生物培養(yǎng)的方法。
(2)液體培養(yǎng):在實驗中,通過液體培養(yǎng)可以使微生物迅速繁殖,獲得大量的培養(yǎng)物,在一定條件下,還是微生物選擇增菌的有效方法。
微生物實驗室常用菌種保藏法


菌種的保藏常采用干燥、低溫和隔絕空氣等措施,將其新陳代謝限制在最低范圍內(nèi),使其生命活動處于半永久性的休眠狀態(tài),使菌種能夠存活、不污染雜菌、不發(fā)生或較少發(fā)生變異,保存菌種原有的各種生物學性狀。


較常用的菌種保藏法有斜面或半固體傳代保藏法,以及冷凍真空干燥法和液氮超低溫保藏法。
1. 斜面或半固體傳代保藏法
此法保藏菌種常用的培養(yǎng)基有普通肉湯瓊脂斜面、血清斜面、血瓊脂斜面、雞蛋斜面和血清肉湯半固體培養(yǎng)基等等。
在斜面或半固體培養(yǎng)基表面,往往加入滅菌液體石蠟,用以隔絕空氣。此外,厭氧菌的傳代保藏則常采用瘡肉基。
2. 冷凍真空干燥法
將加入一定保護劑(如無菌脫脂牛奶)的菌種懸液冷凍,然后在凍結(jié)狀態(tài)下經(jīng)過真空干燥,使菌種處于半永久性的休眠狀態(tài),從而達到長久保藏的目的。一般可保藏數(shù)年甚至數(shù)十年之久。該法需要特殊的低溫干燥設(shè)備。
3. 液氮超低溫保藏法

將保藏的菌種分散在保護劑中(如甘油、二甲亞楓、蔗糖和吐溫80等),或?qū)⑵桨迳仙L良好的培養(yǎng)物打塊,原封不動地置于保護劑中,預(yù)凍后保藏在液氮超低溫(-196℃)中。該法是目前較理想的菌種保藏方法,可較長期保藏菌種。 
編輯:songjiajie2010

 
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