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黃曲霉毒素B1(AFB1)ELISA檢測試劑盒說明書

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2011-03-01  來源:北京華安麥科生物技術(shù)有限公司
核心提示:黃曲霉毒素B1(AFB1)ELISA檢測試劑盒產(chǎn)品描述:


一、概要
黃曲霉毒素是一類真菌(如黃曲霉和寄生曲霉)的有毒的代謝產(chǎn)物,它們具有很強的致癌性,主要存在于谷物、堅果、棉籽以及一些和人類血液,動物飼料相關(guān)的產(chǎn)品中。其中黃曲霉毒素B1(AFB1)的毒性、致癌性、污染頻率均居于首位。而使用黃曲霉毒素B1 ELISA試劑盒則能夠快速而準確的分析樣品中黃曲霉毒素B1殘留。參考國家標準GB/T 5009.22-2003。
黃曲霉毒素B1檢測試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)的新一代真菌毒素檢測產(chǎn)品,操作時間短于60min,能最大限度地減少操作誤差和工作強度。

二、試驗原理
黃曲霉毒素B1檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在酶標板微孔條上預(yù)包被黃曲霉毒素B1抗原,樣本中黃曲霉毒素B1和此抗原競爭黃曲霉毒素B1抗體,同時黃曲霉毒素B1抗體與酶標二抗相結(jié)合,經(jīng)TMB底物顯色,樣本吸光值與其含有的黃曲霉毒素B1成負相關(guān),與標準曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中黃曲霉毒素B1的含量。

三、適用范圍
黃曲霉毒素B1檢測試劑盒可定性、定量檢測玉米、大米、麥類、豆類、花生、花生醬、飼料、食用油等樣本中的黃曲霉毒素B1。

四、測定前應(yīng)須知:
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫(20~25℃)。
2、使用之后立即將所有試劑放回2~8℃。
3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4、在所有恒溫孵育過程中,避免光線照射,用蓋板膜封住微孔板。
5、黃曲霉毒素B1可致癌,應(yīng)戴手套操作。

五、操作步驟:
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫(20~25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板,將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封,保存于2~8℃。不要冷凍。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號:將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5、加標準品/樣本:加標準品/樣本50ml到對應(yīng)的微孔中,加入AFB1酶標物50ml/孔,再加入AFB1抗試劑50ml/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌工作液300ml/孔,充分洗滌5次,每次間隔30s,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。
7、顯色:加入底物液A液50ml/孔,再加底物液B液50ml/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境反應(yīng)15~20min。
8、測定:加入終止液50ml/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,請在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)),測定每孔OD值。(若無酶標儀,則不加終止液用目測法可進行判定)。

六、檢測方法靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度:
0.1ppb
回收率:
花生、玉米等谷物:90±15%
曲奇餅干:90±15%
蜂蜜蛋糕:85±15%
飼料:85±15%
食用油:90±15%
醬油:85±15%
醋:90±15%
葡萄酒:90±15%
干黃醬:80%±10%
火鍋底料:95%±10%
精密度:
試劑盒的變異系數(shù)均小于10%

七、注意事項
1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20~25℃)會導(dǎo)致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標準曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒;也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件
  保存試劑盒于2~8℃,不要冷凍,將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質(zhì)的跡象
發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì),應(yīng)當棄之。0標準的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時,表示試劑可能變質(zhì)。
8、在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時間為15~20min即可。若顏色較淺,可延長反應(yīng)時間到30min(或更長)。反之,則減短反應(yīng)時間。
9、濃縮洗滌液如有結(jié)晶屬正,F(xiàn)象,請加熱溶解后使用。
10、該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

八、貯藏條件及保存期
貯藏條件:保存試劑盒于2~8℃。
保存期:該產(chǎn)品有效期為12個月。

 

編輯:songjiajie2010

 
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