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MinElute DNA純化技術(shù)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-06

作分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),核酸純化、酶切、克隆算是最基本的步驟了。因?yàn)橐龆ㄏ蚩寺,通常要作雙酶切。為了省時(shí)省事兒,我們常常想方設(shè)法把兩個(gè)酶放在一起切?墒鞘虑椴⒎强偰敲捶Q心如意——兩個(gè)酶經(jīng)常在一起鬧別扭,不是反應(yīng)溫度不同啦,就是Buffer不同,有時(shí)候兩個(gè)酶切位點(diǎn)連在一起,必須先切一個(gè)再切另一個(gè),否則就切不動(dòng)——因?yàn)橛械拿赋俗R(shí)別位點(diǎn)之外還需要旁邊留有幾個(gè)堿基,如果正好被切掉了就出問題。于是有人就到處找通用Buffer——其實(shí)所謂通用Buffer也只勉強(qiáng)適用于少數(shù)幾個(gè)常用酶,而且往往會(huì)出現(xiàn)不是最佳反應(yīng)條件的問題、星號(hào)活力問題——想想看,酶在生物體內(nèi)精密調(diào)控各種反應(yīng),不是最適條件當(dāng)然容易出問題——馬虎一下有時(shí)就會(huì)有莫名其妙的結(jié)果,該切的切不動(dòng),不該切的切掉了,該連接的連不上,倒霉上一次就能浪費(fèi)你幾個(gè)月時(shí)間。于是我們一股腦的怨:酶有問題?墒侨绻麅蓚(gè)酶分別切吧,費(fèi)時(shí)間不說,切完一個(gè),還要純化好半天——就是不跑電泳也得酚氯仿抽提,本來就不多的樣品這么一折騰,夠嗆。幸好如今有了試劑盒,一切都簡(jiǎn)單了。您別說,這試劑盒雖然花錢,原理也簡(jiǎn)單,可是用起來就是方便。第一次酶切后,只要5、6分鐘可以很方便地快速純化酶切樣,不用酚抽不用乙醇沉淀,就可以進(jìn)行第二次酶切,保證最佳反應(yīng)條件,又何必煞費(fèi)苦心的作雙酶切呢,還可以減少一些人為的錯(cuò)誤了。

MinElute DNA純化技術(shù)是基于一種特殊的、叫做Silica-gel-menbrane的膜,能夠在高鹽濃度的條件下迅速吸附DNA,在低鹽或者純水條件下釋放DNA,只要短短幾分鐘,就能徹底除去包括引物、核苷酸、酶、礦物油、鹽、瓊脂糖、EB以及其它雜質(zhì),和以前QIAGEN的Silica-gel-menbrane有所不同的是,它要求的洗脫體積非常小,只要10微升,純化的DNA是高度濃縮的,方便進(jìn)行以后的反應(yīng);厥章试80%以上。

反應(yīng)步驟非常簡(jiǎn)單,只要將Binding Buffer加入酶切樣、PCR產(chǎn)物或者切下來的凝膠條中充分混勻,加入柱中離心,洗滌,用10微升ddH2O或Elution Buffer洗脫即可。純化的產(chǎn)物可用于連接、標(biāo)記、測(cè)序、雜交、酶切、顯微注射、體外轉(zhuǎn)錄等后繼實(shí)驗(yàn)。由于洗脫體積小,無需進(jìn)一步濃縮也能保證很高的回收率。比如雙酶切,可以在第一次酶切后將酶切樣直接純化,留下1、2微升電泳檢測(cè),剩下的7、8微升樣品全部進(jìn)行下一個(gè)酶切,非常方便,不會(huì)浪費(fèi)樣品。不過它的吸附范圍是70bp到4kb,而不是以往的10kb。4kb以上的只能用以前的Qiaquick系列了,而10kb以上就該用QIAEX II系列。和以往一樣,MinElute系列也分為PCR回收試劑盒、膠回收試劑盒、反應(yīng)產(chǎn)物回收試劑盒可供選擇。

記得一位回國訪問的老師曾經(jīng)說起,以前覺得美國學(xué)生笨,只會(huì)照著試劑盒123的作實(shí)驗(yàn),沒了說明書就不知如何是好,而中國學(xué)生聰明,能夠靈活運(yùn)用,可是如今發(fā)現(xiàn)中國學(xué)生有時(shí)太過靈活,省略不作對(duì)照、自作聰明地簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟,最后出了問題也找不到原因,反而不好。當(dāng)時(shí)我們就說,沒辦法,都是沒錢惹的禍,舍不得買試劑盒——能省就盡量將就一下,就是買了還要想辦法節(jié)約一個(gè)對(duì)照,有時(shí)候就這么養(yǎng)成這種小家子氣的習(xí)慣;剡^頭來想,真是:所謂“Research”就是要反反復(fù)復(fù)的“search”,不斷失敗,不斷“search”,如果一下子就成功就不叫“Research”了,沒有嚴(yán)謹(jǐn)良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣就很難找到失敗的原因,就很難做好Research。

 

 

 
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