單拷貝克隆產(chǎn)量低，高拷貝克隆穩(wěn)定性差，一直讓研究者在克隆表達(dá)時(shí)難以選擇。蛋白的表達(dá)就有誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)，可以實(shí)現(xiàn)人為地控制蛋白的表達(dá)時(shí)間和表達(dá)量——現(xiàn)在連質(zhì)粒的拷貝數(shù)可以借助誘導(dǎo)的方法來(lái)人為控制了！Epicentre的專利技術(shù)——CopyControl克隆系統(tǒng)能夠讓您共享單拷貝和高拷貝的優(yōu)點(diǎn)。CopyControl克隆首先以單拷貝形式生長(zhǎng)——單拷貝可以確保插入穩(wěn)定及成功克隆編碼毒性基因序列——在需要的時(shí)候，再誘導(dǎo)成高拷貝克隆，以便下游應(yīng)用所需。這一系統(tǒng)可以用來(lái)構(gòu)建PCR克隆，對(duì)于BAC，fosmid文庫(kù)等大型質(zhì)粒格外有用。

CopyControl克隆系統(tǒng)有兩個(gè)重要的成分：
1．CopyControl pCC1 Vector.
這個(gè)載體含有兩個(gè)復(fù)制起始位點(diǎn)：?jiǎn)慰截惖拇竽c桿菌F-因子復(fù)制子，和誘導(dǎo)型的高拷貝oriV。 OriV的啟動(dòng)，需要trfA基因產(chǎn)物，trfA基因既不在pCC1 Vector上，也不在其他常規(guī)用來(lái)克隆的大腸桿菌菌株中，這個(gè)基因由CopyControl 的第二個(gè)重要元件—— TransforMax EPI300 E.coli菌株提供。

2．TransforMax EPI300 E.coli.
這是一個(gè)工程菌株，含有受誘導(dǎo)啟動(dòng)子嚴(yán)謹(jǐn)控制的trf A基因，在誘導(dǎo)表達(dá)的條件下可以提供啟動(dòng)oriV所需要的trf A基因產(chǎn)物。另外phage T1-resistant TransforMax EPI300-T1R E.Coli也可提供這個(gè)基因的產(chǎn)物。

CopyControl克隆和克隆誘導(dǎo)步驟：

1、將目標(biāo)DNA片斷連接到已經(jīng)線性化、去磷酸化的CopyControl pCC1 Vector上。

2、轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞（TransforMax EPI300 E.coli），涂皿，在氯霉素LB培養(yǎng)基上篩選。在這種條件下，trfA基因的表達(dá)被抑制，克隆以單拷貝數(shù)量生長(zhǎng)。

3、挑選克隆，單個(gè)培養(yǎng)。

4、加CopyControl誘導(dǎo)溶液到管中。誘導(dǎo)溶液誘導(dǎo)TransforMax EPI300 宿主細(xì)胞內(nèi)trfA基因的表達(dá)，從而啟動(dòng)oriV，克隆由單拷貝轉(zhuǎn)化為高拷貝。

5、用常規(guī)方法從誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)分離DNA。

這個(gè)系統(tǒng)用于常規(guī)PCR克隆或者文庫(kù)構(gòu)建時(shí)，經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)，每個(gè)細(xì)胞中的質(zhì)�？截悢�(shù)可以從1個(gè)提高到200個(gè)，非常厲害，對(duì)于下游的表達(dá)或者核酸純化、測(cè)序等都很有幫助。而對(duì)于BAC和Fosmid等低拷貝的大型質(zhì)粒來(lái)說(shuō)，單拷貝的克隆的穩(wěn)定性是非常重要的考慮因素，經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)后每個(gè)細(xì)胞中質(zhì)粒的拷貝數(shù)可以達(dá)到10—50個(gè)，對(duì)于后繼的實(shí)驗(yàn)更有重要的意義。