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酶促生物素標(biāo)記cRNA探針的應(yīng)用

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-06
     酶促生物素標(biāo)記cRNA探針基本方法和放射性標(biāo)記cRNA探針同,所不同的是探針濃度為2.5μg/μl。顯示探針反應(yīng)步驟如下。
  (1)用PBS沖洗粘附有切片的載片2×3min。根據(jù)情況也可用漂洗法。
 。2)將載片浸入0.3%H2O2在PBS或甲醇內(nèi)30min以封閉內(nèi)源性過氧化物酶。
 。3)PBS沖洗2×3min,用吸水紙拭干切片周圍的水份,加入小鼠抗生物素血清1:100和PBS含正常羊血清(1:30),室溫1h,或4℃過夜。
 。4)PBS徹底沖洗。
  (5)載片加生物素化抗小鼠IgG(1:100)30min室溫。
  (6)PBS徹底沖洗。
 。7)應(yīng)用ABC復(fù)合物與等量的1%牛血清白蛋白-PBS液混合孵育1h,室溫。
 。8)PBS徹底沖洗。
 。9)將切片覆以新鮮配制的0.025贐溶液,0.02%H2O2,孵育3~15min。
  (10)水洗,復(fù)染,脫水,透明和以甘油/PBS或DPX封固。如需要可用銀染,多層ABC或PAP法加強(qiáng)染色效果。
 

 

 
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