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紙電泳法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-02

1.儀器裝置 包括電泳室及直流電源兩部分。 常用的水平式電泳室裝置如圖,包括兩個電泳槽A和一個可以密封的玻璃(或相應材料)蓋B;兩側的電泳槽均用有機玻璃(或相應材料)板C分成兩部分;外格裝有鉑電極(直徑0.5~0.8cm)D;里格為可放濾紙E的有機玻璃電泳槽架F,此架可從槽中取出;兩側電泳槽A內(nèi)的鉑電極D經(jīng)隔離導線穿過槽壁與外接電泳儀電源相連。 電源為具有穩(wěn)壓器的直流電源,常壓電泳一般在100~500V,高壓電泳一般在500~10 000V。

2. 操作
(1) 電泳緩沖液 枸櫞酸鹽緩沖液(pH3.0) 取枸櫞酸 (C6H8O7·H2O)39.04g與枸櫞酸鈉(C6H5Na3O7·2H2O)4.12g,加水4000ml,使溶解。
(2) 濾紙 取色譜濾紙置1mol/L甲酸溶液中浸泡過夜,次日取出,用水漂洗至洗液的pH值不低于4,置60℃烘箱烘干,備用?砂葱枰贸砷L27cm、寬18cm的濾紙,或根據(jù)電泳室的大小裁剪,并在距長度方向一端5~8cm處劃一起始線,每隔2.5~3cm處做一記號備點樣用!
(3) 點樣 有濕點法和干點法。濕點法是將裁好的濾紙全部浸入枸櫞酸鹽緩沖液(pH3.0)中,濕潤后,取出,用濾紙吸干多余的緩沖液,置電泳槽架上,使起始線靠近陰極端,將濾紙兩端浸入緩沖液中,然后用微量注射器精密點加供試品溶液,每點10μl,共3點,并留2個空白位置。 干點法是將供試品溶液點于濾紙上,吹干、再點,反復數(shù)次,直至點完規(guī)定量的供試品溶液,然后用噴霧器將濾紙噴濕,點樣處最后噴濕,本法適用于稀的供試品溶液。
(4) 電泳 于電泳槽中加入適量電泳緩沖液,浸沒鉑電極,接通電泳儀穩(wěn)壓電源擋,調(diào)整電壓梯度為18~20V/cm,電泳約1小時45分鐘,取出,立即吹干,置紫外光燈(254nm)下檢視,用鉛筆劃出紫色斑點的位置。
(5) 含量測定 剪下供試品斑點和與斑點位置面積相近的空白濾紙,剪成細條,分別置試管中,各精密加入0.01mol/L鹽酸溶液5ml,搖勻,放置1小時,用3號垂熔玻璃漏斗濾過,也可用自然沉降或離心法傾取上清液,按各藥品項下的規(guī)定測定吸收度,并按吸收系數(shù)計算含量。

 

 

 

 

 
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