單鏈DNA片段呈復(fù)雜的空間折疊構(gòu)象，這種立體結(jié)構(gòu)主要是由 其內(nèi)部堿基配對(duì)等分子內(nèi)相互作用力來(lái)維持的，當(dāng)有一個(gè)堿基發(fā)生改變時(shí)，會(huì)或多或 少地影響其空間構(gòu)象，使構(gòu)象發(fā)生改變，空間構(gòu)象有差異的單鏈DNA分子在聚丙烯酰 胺凝膠中受排阻大小不同.因此，通過(guò)非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)，可以非常 敏銳地將構(gòu)象上有差異的分子分離開(kāi).作者稱該方法為單鏈構(gòu)象多態(tài)性 (Single-Strand Conformation Polymorphism，SSCP)分析.在
PCR-SSCP技術(shù)，進(jìn)一步提高了檢測(cè)突變方法的簡(jiǎn)便性和靈敏性.其基本過(guò)程是:①PCR擴(kuò)增靶DNA;②將特異的PCR擴(kuò)增 產(chǎn)物變性，而后快速?gòu)?fù)性，使之成為具有一定空間結(jié)構(gòu)的單鏈DNA分子;③將適量的單 鏈DNA進(jìn)行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳;④最后通過(guò)放射性自顯影、銀染或溴化乙錠顯 色分析結(jié)果.若發(fā)現(xiàn)單鏈DNA帶遷移率與正常對(duì)照的相比發(fā)生改變，就可以判定該鏈構(gòu) 象發(fā)生改變，進(jìn)而推斷該DNA片段中有堿基突變.
該方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏，不需要特 殊的儀器，適合臨床實(shí)驗(yàn)的需要.但它也有不足之處.例如，只能作為一種突變檢測(cè)方 法，要最后確定突變的位置和類型，還需進(jìn)一步測(cè)序;電泳條件要求較嚴(yán)格;另外，由 于SSCP是依據(jù)點(diǎn)突變引起單鏈DNA分子立體構(gòu)象的改變來(lái)實(shí)現(xiàn)電泳分離的，這樣就可 能會(huì)出現(xiàn)當(dāng)某些位置的點(diǎn)突變對(duì)單鏈DNA分子立體構(gòu)象的改變不起作用或作用很小 時(shí)，再加上其他條件的影響，使聚丙烯酰胺凝膠電泳無(wú)法分辨造成漏檢.
盡管如此，該方法和其他方法相比仍有較高的檢測(cè)率.首先，它可以發(fā)現(xiàn)靶DNA片段中未知位置的堿 基突變.Takao，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明小于300bp的DNA片段中的單堿基突變，90%可被SSCP發(fā) 現(xiàn)，他認(rèn)為現(xiàn)在知道的所有單堿基改變絕大多數(shù)可用該方法檢測(cè)出來(lái).另外，SSCP方 法可通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳將不同遷移率的突變單鏈DNA分離，并且還可以進(jìn)一步 提純.用這種方法可以最終從DNA序列水平上鑒別突變DNA片段.
PCR-SSCP技術(shù)，進(jìn)一步提高了檢測(cè)突變方法的簡(jiǎn)便性和靈敏性.其基本過(guò)程是:①PCR擴(kuò)增靶DNA;②將特異的PCR擴(kuò)增 產(chǎn)物變性，而后快速?gòu)?fù)性，使之成為具有一定空間結(jié)構(gòu)的單鏈DNA分子;③將適量的單 鏈DNA進(jìn)行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳;④最后通過(guò)放射性自顯影、銀染或溴化乙錠顯 色分析結(jié)果.若發(fā)現(xiàn)單鏈DNA帶遷移率與正常對(duì)照的相比發(fā)生改變，就可以判定該鏈構(gòu) 象發(fā)生改變，進(jìn)而推斷該DNA片段中有堿基突變.
該方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏，不需要特 殊的儀器，適合臨床實(shí)驗(yàn)的需要.但它也有不足之處.例如，只能作為一種突變檢測(cè)方 法，要最后確定突變的位置和類型，還需進(jìn)一步測(cè)序;電泳條件要求較嚴(yán)格;另外，由 于SSCP是依據(jù)點(diǎn)突變引起單鏈DNA分子立體構(gòu)象的改變來(lái)實(shí)現(xiàn)電泳分離的，這樣就可 能會(huì)出現(xiàn)當(dāng)某些位置的點(diǎn)突變對(duì)單鏈DNA分子立體構(gòu)象的改變不起作用或作用很小 時(shí)，再加上其他條件的影響，使聚丙烯酰胺凝膠電泳無(wú)法分辨造成漏檢.
盡管如此，該方法和其他方法相比仍有較高的檢測(cè)率.首先，它可以發(fā)現(xiàn)靶DNA片段中未知位置的堿 基突變.Takao，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明小于300bp的DNA片段中的單堿基突變，90%可被SSCP發(fā) 現(xiàn)，他認(rèn)為現(xiàn)在知道的所有單堿基改變絕大多數(shù)可用該方法檢測(cè)出來(lái).另外，SSCP方 法可通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳將不同遷移率的突變單鏈DNA分離，并且還可以進(jìn)一步 提純.用這種方法可以最終從DNA序列水平上鑒別突變DNA片段.
