亚洲成aⅴ人在线观看_亚洲欧美日韩综合一区在线观看_国产无码电影一区二区三区_国语精品91自产拍在线观看二区

VIP標(biāo)識(shí) 上網(wǎng)做生意,首選VIP會(huì)員| 設(shè)為首頁| 加入桌面| | 手機(jī)版| RSS訂閱
食品伙伴網(wǎng)服務(wù)號(hào)
 

組織原位雜交

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01
組織原位雜交(Tissue in situ hybridization)簡稱原位雜交,指組織或細(xì)胞的原位雜交,它與菌落原位雜交不同,菌落原位雜交需裂解細(xì)菌釋出DNA,然后進(jìn)行雜交,而原位雜交是經(jīng)適當(dāng)處理后,使細(xì)胞通透性增加,讓探針進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與DNA或RNA雜交,因此原位雜交可以確定探針互補(bǔ)序列在胞內(nèi)的空間位置,這一點(diǎn)具有重要的生物學(xué)和病理學(xué)意義。例如,對(duì)致密染色體DNA的原位雜交可用于顯示按規(guī)定序列的位置,對(duì)分裂期間核DNA的雜交可研究特定序列在染色質(zhì)內(nèi)的功能排布;與細(xì)胞RNA的雜交可精確分析任何一種RNA在細(xì)胞中和組織中的分布。此外,原位雜交還是顯示細(xì)胞亞群分布和動(dòng)向及病原微生物存在方式和部位的一種重要技術(shù)。
用于原位雜交的探針可以是單鏈或雙鏈DNA,也可以是RNA探針。通常探針操作的長度以100-400nt為宜,過長則雜交率減低。最近研究結(jié)果表明,寡核苷酸探針(16-30 nt)能自由出入細(xì)菌和組織細(xì)胞壁,雜交效率明顯高于長探針,因此,寡核苷酸探針和不對(duì)稱PCR標(biāo)記的小DNA探針或體外轉(zhuǎn)錄標(biāo)記的RNA探針是組織原位雜交優(yōu)選探針。
探針的標(biāo)記物可以是放射性同位素,也可以是非放射性生物素和半抗原等,放射性同位素中,3H和35S最為常用,3H標(biāo)記的探針半衰期長,成像分辨率高,便于定位,缺點(diǎn)是能量低,35S標(biāo)記探針活性較高,影像分辨率也較好,而32P能量過高,致使產(chǎn)生的影像模糊,不利于確定雜交位點(diǎn)。
原位雜交中,標(biāo)本的固定條件是影響雜交效率的重要因素。標(biāo)本組織蛋白質(zhì)的消化程度對(duì)探針進(jìn)入細(xì)胞極為重要,去除蛋白質(zhì)的方法是,用0.2mol/L HCl處理載玻片,用蛋白酶K消化,然后用不同濃度的乙醇脫水。原位雜交還是一種新技術(shù),發(fā)展很快,在敏感性、特異性、穩(wěn)定性上還需進(jìn)一步完善和提高。
 

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點(diǎn)擊排行
 
 
Processed in 0.546 second(s), 1008 queries, Memory 3.09 M