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蛋白水解酶配制

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-07
 

貯存液

貯存溫度

反應(yīng)濃度

反應(yīng)緩沖液

溫度

預(yù)處理

 

0.01mol/l tris(ph7.8)

 

鏈霉蛋白酶a

20mg/ml

-20℃(溶于水)

1mg/ml

0.01mol/l edta

37℃

自消化b

 

0.5% sds

 
 

0.01mol/l tris(ph7.8)

 

蛋白酶kc

20mg/ml

-20℃(溶于水)

50μg/ml

0.005mol/l edta

37~56℃

無(wú)須預(yù)處理

 

0.5% sds

 

a:鏈霉蛋白酶是從鏈球菌(streptomyces griseus)中分離到的一種絲氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。

b:自消化可消除dna酶和rna酶的污染,經(jīng)自消化的鏈酶蛋白酶的配制方法如下:把該酶的粉末溶解于10mmol./l tris·hcl(ph7.5)、10mmol/l nacl中,配成20mg/ml濃度,于37℃溫育1h。經(jīng)消化的鏈霉蛋白酶分裝成小份放在密封試管中,保存-20℃。

c:蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,從林伯氏白色念球菌(tritirachium album limber)中純化得到。該酶有兩個(gè)ca2 結(jié)合位點(diǎn),它們離酶的活性中心有一定距離,與催化機(jī)理并無(wú)直接關(guān)系。然而,如果從該酶中除去ca2 ,由于出現(xiàn)遠(yuǎn)程的結(jié)構(gòu)變化,催化活性將喪失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質(zhì)。所以,蛋白酶k消化過(guò)程中通常加入edta(以抑制依賴于mg2 的核酸酶的作用)。但是,如果要消化對(duì)蛋白酶k具有較強(qiáng)耐性的蛋白,如角蛋白一類,則可能需要使用含有1mmol/l ca2 而不含edta的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸前要加入egt(ph8.0)至終濃度為2mmol/l,以鰲合ca2 。

 

 

 
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