一、引言
基因治療是指改變細(xì)胞遺傳物質(zhì)為基礎(chǔ)的醫(yī)學(xué)治療。目前僅限于體細(xì)胞。
基因治療的技術(shù)和方式日趨多樣性。按基因?qū)氲男问�，分為體外基因?qū)耄╡xvivo）及體內(nèi)基因?qū)耄╥nvivo）兩種形式。前者是在體外將基因?qū)肴思?xì)胞，然后將該細(xì)胞注入人體。其制品形式是外源基因轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，適合在具有專門技術(shù)人才和GMP條件的醫(yī)療單位進(jìn)行。后者則是將基因通過適當(dāng)?shù)膶?dǎo)入系統(tǒng)直接導(dǎo)入人體，包括病毒的與非病毒的方法。其制品形式是基因工程技術(shù)改造的病毒或者是重組DNA、或者是DNA復(fù)（混）合物。基因治療制劑種類較多，因此，本指導(dǎo)原則不可能用一個(gè)模式來概括，只能提出一個(gè)共同的原則，具體的方案應(yīng)根據(jù)這些原則，確定研究技術(shù)路線。其基本原則：一是必須確保安全與有效，要充分估計(jì)可能遇到的風(fēng)險(xiǎn)，并提出相應(yīng)的質(zhì)控要求；二是要促進(jìn)基因治療的研究，并加強(qiáng)創(chuàng)新。對(duì)一些新的治療技術(shù)路線的相應(yīng)質(zhì)控要求，可有一定的靈活性，應(yīng)注意到基因治療本身的特點(diǎn)以及它與經(jīng)典的化學(xué)合成藥物或基因工程藥物的差別。目前，一些基因治療研究相對(duì)比較成熟，而一些則不夠完善，更加要求研究者在使用該技術(shù)指導(dǎo)原則時(shí)不可生搬硬套。為此，研究者應(yīng)加強(qiáng)咨詢和論證，提出一個(gè)科學(xué)可行的研究方案，最終獲得確保安全有效的基因治療制品。
在向國家藥品監(jiān)督管理局申報(bào)臨床試驗(yàn)時(shí)，除須按本指導(dǎo)原則中"研究內(nèi)容和制品質(zhì)量控制"準(zhǔn)備材料外，同時(shí)需提供下述材料：
（1）國內(nèi)外研究現(xiàn)狀和進(jìn)展（綜述）。包括：
1．所用基因的研究現(xiàn)狀和進(jìn)展；
2．所用載體的研究現(xiàn)狀和進(jìn)展；
3．所用基因?qū)胂到y(tǒng)和方法的研究現(xiàn)狀和進(jìn)展；
4．該研究或制品相關(guān)的體外有效性實(shí)驗(yàn)資料；
5．該研究或制品相關(guān)的動(dòng)物試驗(yàn)安全性和有效性資料；
6．該研究或制品相關(guān)的臨床試驗(yàn)安全性和有效性資料；
7．該研究或制品的生產(chǎn)工藝現(xiàn)狀；
8．該研究或制品的質(zhì)量控制現(xiàn)狀；
9．本研究或制品的先進(jìn)性和創(chuàng)新點(diǎn)；
10．本研究或制品產(chǎn)業(yè)化的可行性。綜述內(nèi)容須科學(xué)客觀。
（二）本研究或制品的知識(shí)產(chǎn)權(quán)情況。包括：1）本研究或制品的知識(shí)產(chǎn)權(quán)情況闡述；2）本研究或制品的知識(shí)產(chǎn)權(quán)檢索報(bào)告和檢索結(jié)果。知識(shí)產(chǎn)權(quán)情況的闡述和檢索應(yīng)包括所用基因、載體、重組體、終產(chǎn)品的其它成分、生產(chǎn)用細(xì)胞和生產(chǎn)工藝等。
二、研究內(nèi)容和制品質(zhì)量控制
（一）DNA重組體或基因?qū)胂到y(tǒng)的構(gòu)建
1．治療用的目的基因
詳細(xì)說明基因治療所用的目的基因及其來源（尤其是有否涉及國內(nèi)外專利問題，應(yīng)有專利查詢資料），獲得目的基因的材料方法和基因鑒定結(jié)果。
2．載體
包括載體DNA的限制性內(nèi)切酶圖譜或基因庫資料。若有特殊的元件，如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子及PolyA位點(diǎn)等，應(yīng)提供詳細(xì)資料。若有改變結(jié)構(gòu)（如丟失片段，點(diǎn)突變或插入片段），須提供DNA測(cè)序結(jié)果。若屬新的或改變結(jié)構(gòu)的病毒載體，須提供組建的材料、方法、組建步驟及鑒定結(jié)果的全部資料。
非病毒型基因?qū)胂到y(tǒng)，均需一個(gè)能在人體細(xì)胞表達(dá)目的基因的質(zhì)粒。除裸露DNA外，還須附加其它的組分進(jìn)行加工，如脂質(zhì)體、多肽、金屬顆粒等。本指導(dǎo)原則不包括寡聚核苷酸（如AntisenseRNA,Ribozyme,RNAi等）類基因治療制品。
3．DNA重組體
詳細(xì)說明克隆步驟，材料方法；DNA序列分析圖譜和結(jié)果，注明啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、插入順序、目的基因及polyA順序等；重組體的限制性酶切圖譜和鑒定結(jié)果；重組體中基因表達(dá)水平和時(shí)程。
4．基因?qū)胂到y(tǒng)構(gòu)建包括病毒載體與非病毒載體基因?qū)胂到y(tǒng)。
（1）病毒載體基因?qū)胂到y(tǒng)包括腺病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和腺相關(guān)病毒載體基因?qū)胂到y(tǒng)等。需詳細(xì)描述形成單克隆原始病毒顆粒的方法、材料、技術(shù)路線和全部的鑒定方法、標(biāo)準(zhǔn)和結(jié)果。這些鑒定一般包括：結(jié)構(gòu)鑒定（限制性酶切圖譜和PCR分析）、整個(gè)病毒的序列分析（≤40kb），基因體外表達(dá)和生物活性，SDS-PAGE、表達(dá)盒DNA序列分析、Westernblot分析、轉(zhuǎn)染效率、透射電鏡負(fù)染法觀察、復(fù)制型病毒的檢測(cè)和其它污染因子的檢測(cè)。
（2）非病毒基因?qū)胂到y(tǒng)除裸DNA外，一般包括兩個(gè)部分：一是哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體；二是其它載體物質(zhì)，如脂質(zhì)體、多肽或金屬粒子等。為此，需說明目的基因?qū)胂到y(tǒng)的性質(zhì)與內(nèi)容。由于部分病人對(duì)青霉素的過敏反應(yīng)，最好不用耐氨芐青霉素基因作耐藥基因，而建議用卡那霉素或新霉素基因作耐藥基因。若用物理方法導(dǎo)入，須提供其詳細(xì)方法、步驟，基因?qū)胄始捌浔磉_(dá)的生物活性以及導(dǎo)入細(xì)胞后基因的穩(wěn)定性，無重排或突變的證據(jù)。每一操作步驟必須鑒定其結(jié)果，通常的鑒定內(nèi)容和方法有：限制性酶切圖譜，基因的PCR擴(kuò)增，表達(dá)盒DNA序列分析，SDS-PAGE，Westernblot分析等。
（二）細(xì)胞庫及工程菌庫的建立和檢定
包括包裝和繁殖重組病毒的細(xì)胞庫和擴(kuò)增重組質(zhì)粒的工程菌庫。必須建立三級(jí)庫，即原始細(xì)胞庫（PrimarySeedBank）、種子細(xì)胞庫（MasterCellBank）和工作細(xì)胞庫（WorkingCellbank）；或原始工程菌庫、種子工程菌庫和工作工程菌庫。
1．細(xì)胞庫
（1）原始細(xì)胞庫
需說明來源、代數(shù)、細(xì)胞特性及有關(guān)檔案資料。對(duì)主細(xì)胞庫和工作細(xì)胞庫需詳細(xì)說明建庫過程，包括材料、方法、步驟、細(xì)胞庫存的數(shù)量和登記檔案等。
（2）主細(xì)胞庫
主細(xì)胞庫由原始細(xì)胞庫直接傳代建立或通過亞克隆方法篩選后建立。應(yīng)明確使用代次。
（3）工作細(xì)胞庫
工作細(xì)胞庫由主細(xì)胞庫傳代建立。應(yīng)明確工作細(xì)胞庫的使用代次。
（4）細(xì)胞庫檢定
①主細(xì)胞庫或工作細(xì)胞庫檢定應(yīng)依據(jù)《生物制品生產(chǎn)用細(xì)胞的制備及檢定規(guī)程》的要求進(jìn)行。
②病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和病毒的產(chǎn)量等的檢定
③導(dǎo)入基因的存在狀態(tài)，穩(wěn)定性及其表達(dá)水平的檢測(cè)
④復(fù)制型病毒的檢測(cè)
若需用其它輔助病毒，須說明其來源、分離的方法步驟和傳代次數(shù)等。
2．工程菌庫
工程菌主種子庫和工作種子庫的建立和檢測(cè)應(yīng)按現(xiàn)行《中國藥典》相關(guān)要求建立。
（1）工程菌主種子庫的檢定
①菌種同一性鑒定：菌種/株的來源、基因型及表型�；蛐屯�
過RAPD方法鑒定，通過測(cè)定重組質(zhì)粒的特殊標(biāo)記和抗藥性標(biāo)記確定表型。
②菌種培養(yǎng)純度檢定：外源因子（如雜菌、真菌、噬菌體等）的檢測(cè)。
③菌種穩(wěn)定性檢定：轉(zhuǎn)化菌的比例，擴(kuò)增條件、質(zhì)�？截悢�(shù)，基因表達(dá)量、允許的傳代次數(shù)。
④基因表達(dá)盒序列分析：插入的目的片段以及調(diào)控序列進(jìn)行測(cè)序分析。
（2）工程菌工作種子庫的檢定
除外基因表達(dá)盒序列分析，其它檢定內(nèi)容按上述工程菌主種子細(xì)胞庫的檢定。
（三）基因治療制品制備和生產(chǎn)工藝
1．一般要求
（1）制備和生產(chǎn)條件及環(huán)境說明。強(qiáng)調(diào)基因治療制品的制備和生產(chǎn)須按GMP要求進(jìn)行，特別是對(duì)exvivo方式的細(xì)胞制品和重組病毒制品。臨床前研究和臨床研究用的重組病毒制品應(yīng)該在經(jīng)驗(yàn)證的（validatable）生產(chǎn)工藝途徑下制備。
（2）詳細(xì)的制備和生產(chǎn)工藝方法、材料和技術(shù)路線。
（3）制備和生產(chǎn)過程控制。在生產(chǎn)過程中，一些步驟必須進(jìn)行監(jiān)測(cè)，并要求有監(jiān)測(cè)記錄。
（4）一批制品生產(chǎn)的原始制造及檢定記錄。
（5）中國藥品生物制品檢定所或由國家藥品監(jiān)督管理局指定的單位對(duì)一批制品的檢定報(bào)告。
2．以重組病毒作為基因治療制品者，要求必須建立種子病毒庫和工作病毒庫。工作病毒庫直接從種子病毒庫病毒接種細(xì)胞傳代制備。需詳細(xì)描述病毒庫的來源、建立、克隆性，傳代和保存條件和方法。其質(zhì)量控制方法和標(biāo)準(zhǔn)見本指導(dǎo)原則有關(guān)部分。須從工作細(xì)胞庫細(xì)胞復(fù)蘇，傳代成生產(chǎn)細(xì)胞開始工藝過程，不得用非細(xì)胞庫來源的細(xì)胞直接進(jìn)行生產(chǎn)。做重組病毒制品時(shí)，須使用工作病毒庫的病毒去感染生產(chǎn)細(xì)胞，不得用非病毒庫來源的病毒直接進(jìn)行生產(chǎn)。可以使用貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)。病毒庫可以不經(jīng)過純化而直接從細(xì)胞裂解液來制備。制劑配方也十分重要，不合適的制劑配方會(huì)影響制品活性和保存期限。
3．非病毒型重組質(zhì)粒DNA復(fù)（混）合物作為最終制品者，要求需詳述。
（1）重組質(zhì)粒DNA的生產(chǎn)制備和質(zhì)控
（2）脂質(zhì)體的來源和性質(zhì)，或者制備方法
（3）多肽的來源和性質(zhì)，或者合成方法
（4）其它成分的來源和性質(zhì)，或者制備方法
（5）重組質(zhì)粒DNA復(fù)（混）合物終制品的生產(chǎn)制備和質(zhì)控
通過基因槍等物理和化學(xué)方法將基因?qū)肴梭w者，需說明目的基因的制備、表達(dá)、裸DNA大量擴(kuò)增、分離、純化，儀器設(shè)備的性能和詳細(xì)的導(dǎo)入方法。
4．以基因工程化的細(xì)胞為最終制品者，包括exvivo及其它形式的基因治療。該類制品應(yīng)參照《人體細(xì)胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》進(jìn)行。詳細(xì)說明細(xì)胞擴(kuò)增的全部制備工藝，包括生產(chǎn)流程、所用培養(yǎng)液及其配制方法、細(xì)胞收集、細(xì)胞的exvivo轉(zhuǎn)染方法及篩選。洗滌最終制品中所用的保存液配方。
（四）制品的質(zhì)量控制
根據(jù)基因治療類制品的生產(chǎn)工藝特點(diǎn)，其質(zhì)量控制的原則主要是：檢定項(xiàng)目盡可能在成品中進(jìn)行；如成品中的添加成份影響檢定結(jié)果，則需在原液中進(jìn)行。
1．重組病毒作為基因治療制品的質(zhì)量控制
根據(jù)目前國內(nèi)外的進(jìn)展和完善程度，這里以重組腺病毒（rAd）制品制品來描述重組病毒基因治療制品的質(zhì)量控制，其它的重組病毒制品可參考這些質(zhì)控要點(diǎn)。
（1）重組腺病毒（rAd）作為基因治療制品的質(zhì)量控制
①原液檢定：
a．無菌試驗(yàn)
按2000年版《中國生物制品規(guī)程》附錄《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
b．病毒顆粒數(shù)測(cè)定
c．具有感染能力病毒顆粒的測(cè)定（病毒活性）
②半成品檢定
a．無菌試驗(yàn)
b．病毒顆粒數(shù)測(cè)定
c．內(nèi)毒素測(cè)定
③成品檢定
a．物理檢查
b．外觀
c．裝量
d．化學(xué)檢定：pH值
e．鑒別試驗(yàn)
限制性酶切圖譜鑒別
插入基因檢測(cè)
f．純度：可采用A260nm/A280nm值法或HPLC法
g．病毒滴度測(cè)定
病毒顆粒數(shù)測(cè)定,采用A260紫外吸收法測(cè)定。?
具有感染能力病毒顆粒的測(cè)定,采用TCID50法。〖ZK）〗
病毒比滴度（比活性IU）,病毒感染滴度/病毒顆粒數(shù)（IU／VP）應(yīng)高于3．3％。
h．效力試驗(yàn)
插入基因表達(dá)活性測(cè)定
插入基因的生物學(xué)活性測(cè)定
i．復(fù)制型病毒（RCA）檢測(cè)
A549細(xì)胞檢測(cè)法，每3．0×1010VP中應(yīng)不高于1RCA（即≤1RCA/3．0×1010VP）
j．腺相關(guān)病毒的檢測(cè)
采用PCR法，應(yīng)無腺相關(guān)病毒（AAV）的污染。
k．殘留量測(cè)定
應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)工藝及成品的添加成份，對(duì)有潛在危險(xiǎn)性的成份進(jìn)行殘留量檢測(cè)。
l．無菌試驗(yàn)
m．異常毒性試驗(yàn)
n．內(nèi)毒素檢測(cè)
重組病毒制品的穩(wěn)定性試驗(yàn)：需對(duì)保存條件、保存液配方及至少對(duì)三批樣品進(jìn)行穩(wěn)定性考察。應(yīng)進(jìn)行不同溫度及反復(fù)凍融對(duì)活性影響的研究。
（2）以exvivo形式用逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)化的細(xì)胞（同體或異體）制品的質(zhì)量控制
該類制品應(yīng)參照《人體細(xì)胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》進(jìn)行。應(yīng)特別注意復(fù)制型病毒的檢測(cè)。檢測(cè)的范圍，包括前述種子細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫，生產(chǎn)后細(xì)胞及最后病毒制品。細(xì)胞上清液的取樣應(yīng)相當(dāng)于培養(yǎng)上清液的5％。生產(chǎn)病毒后細(xì)胞取樣量須達(dá)每批中1％或108細(xì)胞（取少的）。檢測(cè)方法應(yīng)包括至少5代的細(xì)胞共培養(yǎng)擴(kuò)增（如用Musdunni細(xì)胞），隨后須用PG4S /L-法、標(biāo)記挽救法或RT／PCR中的兩種方法來檢測(cè)。必須用陽性對(duì)照（COS4070A上清液）及陰性對(duì)照作嚴(yán)格定量標(biāo)化，證明其敏感性及可靠性。PCR應(yīng)利用放射性同位素雜交或同樣敏感的系統(tǒng)。
若為釋放病毒的細(xì)胞，須測(cè)定：
①細(xì)胞形態(tài)、表面標(biāo)志、染色體組型及其同一性。
②活細(xì)胞比例和細(xì)胞濃度。
③目的基因存在狀態(tài)、表達(dá)及其穩(wěn)定性。尤其要說明對(duì)基因及其載體導(dǎo)入后是否出現(xiàn)基因"插入性突變"及其觀察方法及結(jié)果。
④細(xì)胞凍融后的質(zhì)控
凍融后細(xì)胞存活數(shù)、基因表達(dá)或轉(zhuǎn)導(dǎo)基因的活性。
凍融后細(xì)胞上清液中的下列檢測(cè)結(jié)果：
a．無菌試驗(yàn)
b．熱原質(zhì)實(shí)驗(yàn)
c．凍融后細(xì)胞的異常毒性試驗(yàn)。
d．病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)基因活性。
e．支原體檢查。
若為逆轉(zhuǎn)錄病毒上清液，須測(cè)定：
①病毒滴度
②病毒結(jié)構(gòu)檢定
③病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)基因的活性
④復(fù)制型病毒（RCR）的檢測(cè)。由于逆轉(zhuǎn)錄病毒或RCR具有
整合入人細(xì)胞染色體的特性，有遺傳性毒性，因此對(duì)制品中RCR的檢測(cè)要嚴(yán)格進(jìn)行和嚴(yán)格要求。
⑤上清液中的細(xì)菌、熱原質(zhì)及其它外源因子等。
⑥上清液中牛血清蛋白殘留量。
鑒于某些細(xì)胞產(chǎn)品，有效期較短，而有些項(xiàng)目的檢查須較長的時(shí)間（如支原體），這些試驗(yàn)項(xiàng)目可對(duì)每批最終產(chǎn)品作留樣檢查，而該檢測(cè)結(jié)果將為產(chǎn)品的質(zhì)控提供完整的資料。若留樣檢查發(fā)現(xiàn)陽性結(jié)果，應(yīng)及時(shí)對(duì)生產(chǎn)過程作檢查，對(duì)已發(fā)放的產(chǎn)品立即采取措施停止使用。
2．非病毒型重組DNA基因治療制品
（1）純度：超螺旋型的含量，細(xì)菌基因組DNA、RNA和蛋白殘留量。
（2）DNA結(jié)構(gòu)檢測(cè)
（3）脂質(zhì)體、多肽或金屬粒子等的來源和性質(zhì)。由于脂質(zhì)體的形成及多肽類合成過程的隨機(jī)性，不可能達(dá)到一般化學(xué)合成物的均一性及純度，為此應(yīng)提供不同批號(hào)間保證安全有效的可以達(dá)到的最大均一性的程度。
（4）無菌試驗(yàn)
（5）熱原質(zhì)試驗(yàn)
（6）過敏試驗(yàn)
（7）異常毒性試驗(yàn)
（8）介導(dǎo)目的基因的活性檢測(cè)
（9）有害物質(zhì)殘余量的測(cè)定
（五）基因治療的有效性試驗(yàn)
有效性試驗(yàn)包括：
1．體外試驗(yàn)
須證明該外源基因?qū)爰?xì)胞后，能表達(dá)并能達(dá)到治療效果的依據(jù)。若屬exvivo，須提供該細(xì)胞中目的基因的表達(dá)量及細(xì)胞導(dǎo)人體內(nèi)后預(yù)期的效果。
2．體內(nèi)試驗(yàn)
提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明在體內(nèi)靶組織中基因?qū)氲男�、表達(dá)狀態(tài)及可達(dá)到治療的目的。證明在非靶組織器官中基因表達(dá)的分布。動(dòng)物種類根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷男枰�。�?dǎo)入的途徑應(yīng)盡可能接近于臨床試驗(yàn)的途徑或條件。由于小動(dòng)物對(duì)某些途徑（如動(dòng)脈插管）有一定困難，若改變導(dǎo)入途徑須說明原因及依據(jù)。
若有些方案在動(dòng)物中難以觀察其療效（如種族差異），應(yīng)充分提供有效性的間接或旁證資料或依據(jù)。
（六）基因治療的安全試驗(yàn)
對(duì)質(zhì)控合格的基因治療制劑，須提供以下安全性試驗(yàn)的資料：
1．總體安全性評(píng)估
除了在質(zhì)控中已規(guī)定的各項(xiàng)要求外，對(duì)于exvivo用基因工程化的自體或異體細(xì)胞導(dǎo)人體，應(yīng)提供以下資料：
（1）生長因子的依賴性細(xì)胞，對(duì)其生長行為必須予以監(jiān)檢。若某細(xì)胞株在傳代過程中失去對(duì)該生長因子的依賴性，不能再予以使用。
（2）對(duì)同種異體細(xì)胞的移植，必須從免疫學(xué)方面提供其安全性依據(jù)。
（3）對(duì)異種細(xì)胞，必須提供該異種細(xì)胞在體內(nèi)存活的時(shí)間及其安全性的依據(jù)。
（4）致癌試驗(yàn)。無論是自體或異體細(xì)胞，經(jīng)基因操作后，均須作致瘤試驗(yàn)。對(duì)于瘤苗類制品，必須提供該瘤細(xì)胞經(jīng)過何種處理能有效地阻止繼續(xù)增殖的證據(jù)。致癌試驗(yàn)包括軟瓊脂細(xì)胞生長及裸鼠內(nèi)致癌試驗(yàn)。
（5）細(xì)胞種類均一性的監(jiān)控。對(duì)瘤苗類制品，應(yīng)提供如何去除非腫瘤細(xì)胞的方法、步驟及其可靠性的依據(jù)。若從腫瘤組織中分離非腫瘤細(xì)胞（如淋巴細(xì)胞），則必須提供消除腫瘤細(xì)胞的方法、步驟及其可靠性（包括致癌試驗(yàn)在內(nèi)）的依據(jù)。
（6）復(fù)制型病毒的檢測(cè)，若應(yīng)用病毒型導(dǎo)入系統(tǒng)必須嚴(yán)格檢查復(fù)制型病毒。
（7）添加物：除細(xì)胞培養(yǎng)及保存所用的試劑外，某些exvivo或invivo導(dǎo)入基因或細(xì)胞時(shí)，需要加用其它添加物，對(duì)此類物質(zhì)必須有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明其安全性。
2．分子遺傳學(xué)的評(píng)估
對(duì)invivo的治療方案，必須提供動(dòng)物體內(nèi)重組病毒或重組DNA制品導(dǎo)入靶組織與非靶組織的分布情況、基因的表達(dá)情況。對(duì)于exvivo的方案。須提供導(dǎo)入基因的細(xì)胞進(jìn)入體內(nèi)后的活性和目的基因的表達(dá)情況和分布。
3．毒性反應(yīng)的評(píng)估
這是安全性試驗(yàn)的重要組成部分。invivo的方案必須提供毒性反應(yīng)的詳細(xì)資料。除目的基因可能導(dǎo)致的毒性外，導(dǎo)入系統(tǒng)的安全性評(píng)價(jià)至為重要，其安全性評(píng)估應(yīng)包括急性毒性（最大耐受量）及長期毒性試驗(yàn)。毒性試驗(yàn)所用的劑量，除包括相當(dāng)于臨床使用劑量（按體重或表面積計(jì)算）外，尚需有一個(gè)較大的劑量范圍。劑量范圍應(yīng)包括大于臨床使用劑量以確定最大耐受量。給藥途徑應(yīng)盡可能模擬臨床給藥或?qū)氲男问健Ｈ舾淖兺緩巾氄f明其原因及依據(jù)。毒性反應(yīng)的觀察，除常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目外。應(yīng)包括與基因治療相關(guān)的檢測(cè)指標(biāo)。
對(duì)于exvivo方案，對(duì)瘤苗類或淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞類等自體細(xì)胞的導(dǎo)入，一般可免做動(dòng)物急性和長期毒性試驗(yàn)。但若加入特殊的添加物（如明膠、縫線、特殊的導(dǎo)管等），以及對(duì)于某些重要人體臟器內(nèi)導(dǎo)入（如心、腦、肝等），必須作動(dòng)物體內(nèi)毒性作用的試驗(yàn)，并提供詳細(xì)資料。若exvivo方案添加細(xì)胞因子，亦必須提供其安全性的資料。對(duì)采用皮膚、皮下、肌肉給藥途徑的方案，無論是exvivo或invivo均需提供局部刺激性的資料。
4．免疫學(xué)的評(píng)估
無論病毒型與非病毒型載體系統(tǒng)，均需注意進(jìn)入體內(nèi)后的免疫反應(yīng)有關(guān)的問題，包括過敏反應(yīng)、排斥反應(yīng)以及機(jī)體的自身免疫反應(yīng)（如對(duì)裸DNA）等，并對(duì)可能發(fā)生的免疫反應(yīng)提出相應(yīng)的監(jiān)控及處理措施。
對(duì)用于改變機(jī)體免疫狀態(tài)的目的基因及其導(dǎo)入系統(tǒng)（如瘤苗、導(dǎo)入細(xì)胞因子基因或輸入基因工程化的免疫細(xì)胞），更需提供它所引起的機(jī)體免疫改變以及可能的副作用的資料（參照《人體細(xì)胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》）。
5．致癌試驗(yàn)：見本指導(dǎo)原則相關(guān)部分。
（七）基因治療臨床試驗(yàn)方案
基因治療不同于一般生物技術(shù)制品的臨床應(yīng)用，首先是它的復(fù)雜性，例如對(duì)于exvivo方式，需有經(jīng)驗(yàn)的臨床單位和專家將制品輸入或埋入人體的特定組織，甚至通過手術(shù)進(jìn)行操作；二是它的風(fēng)險(xiǎn)性，尚存在許多未知的因素，須對(duì)臨床研究的全過程進(jìn)行嚴(yán)密監(jiān)控，并在申請(qǐng)臨床研究時(shí)須提供下列資料：
1．提供申報(bào)單位符合GMP生產(chǎn)條件的證明。
2．提供臨床研究單位和直接參與研究人員的名單和簡歷。
3．明確給藥的方式、劑量、時(shí)間及療程。如需通過特殊的手術(shù)導(dǎo)入治療制劑，須提供詳細(xì)的操作過程。
4．一般臨床指標(biāo)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。
5．病人及家屬的同意書
6．靶組織和非靶組織的分子生物學(xué)檢測(cè)。
靶組織和非靶組織的分子免疫學(xué)檢測(cè)。若導(dǎo)入重組病毒或可能改變機(jī)體免疫狀態(tài)的制劑，須針對(duì)性地提供觀察人體免疫學(xué)方面的相關(guān)檢測(cè)指標(biāo)及對(duì)可能發(fā)生的免疫學(xué)反應(yīng)的必要處理措施。
7．可能產(chǎn)生的副作用或不良反應(yīng)的記錄，建立實(shí)施治療方案中的事故報(bào)告制度。
8．隨訪的計(jì)劃及實(shí)施辦法。
（八）倫理學(xué)考慮
必須充分重視倫理學(xué)的原則，并具體按國家藥品監(jiān)督管理局GCP規(guī)定的要求嚴(yán)格實(shí)施。包括在實(shí)施本方案前，須向病人說明該治療方案屬試驗(yàn)階段，它可能的有效性及可能發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)保證病人有權(quán)選擇該方案治療或中止該方案治療，以及保證一旦中止治療能得到其它治療的權(quán)利。嚴(yán)格保護(hù)病人的隱私。在病人及家屬充分理解并簽字后才能開始治療。