基本原理
由于SPA能與IgG的Fc片段非特異性結(jié)合,同時不影響Fab片段的活性,所以當帶有SPA的金黃色葡萄球菌與抗體混合,再加入適量的相應抗原,結(jié)果會使出現(xiàn)的凝集反應更易于觀察。它對顆粒性抗原和可溶性抗原抗體反應都有協(xié)同凝集作用。此方法簡便、快速、便于推廣應用。
材料與試劑
1.金黃色葡萄球菌
(1) SPA陽性株:NO.1800株(國內(nèi)分離株)比Cowan株(國際標準株)更為優(yōu)越,在加熱過程中,不易出現(xiàn)自家凝集,更適用于協(xié)同凝集實驗。
(2) SPA陰性株:Wood 46株。
2.試用菌種 炭疽桿菌、枯草桿菌及蠟樣芽胞桿菌。
3.炭疽免疫血清。
4.正常免疫血清。
5.培養(yǎng)基。
6.0.01Mol/L pH 7.4 PBS液,0.1%NaN3的0.01Mol/L pH7.4 PBS液,
0.5%福爾馬林的0.01Mol/L pH 7.4 PBS液。
7.生理鹽水。
8.磁力攪拌器等。
操作方法
1.將N0.1800株接種瓊脂斜面培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)20h~24h。
2.以少量生理鹽水洗下菌體,4 000r/min離心20min。
3.將沉淀的菌體用0.01mol/L pH7.4 PBS液洗3次,然后用含0.5%福爾馬林的0.01mol/L pH 7.4PBS液制成10%(V/V)懸液,置室溫下3h。
4.將懸液56℃水浴30min,離心,用PBS液洗2次。最后用含0.1%NaN3的PBS液制成10%懸液,即為SPA菌穩(wěn)定液,置4℃冰箱備用。
5.將SPA懸液1ml(如從冰箱拿出,可再用PBS液洗一次),加滅活的炭疽陽性血清0.1ml,37℃30min。
6.4 000r/min離心20min,去上清,沉淀用PBS液洗2次,最后用含0.1%NaN3的PBS液制成10%懸液,共10ml,此即為SPA菌的凝集用試劑。
7.取干凈載玻片,用接種環(huán)取1滴已標記的SPA凝集用試劑,然后再從瓊脂斜面上取少量待試細菌,充分混合,2min內(nèi)紀錄結(jié)果。
8.對照組的設置
(1) SPA陰性菌標記免疫血清對照。
(2) SPA陽性菌標記正常血清對照。
(3) SPA穩(wěn)定液與炭疽桿菌凝集對照。
(4) 抗炭疽血清與炭疽菌凝集對照。
(5) 其它芽胞桿菌凝集試驗對照。
結(jié)果判定
強度以“+~++++”表示:
++++: 2min內(nèi),菌體凝集成大顆粒,液體透明。
+++ : 2min內(nèi),菌體凝集成較大顆粒,液體透明。
++ : 2min內(nèi),菌體凝集成較小顆粒,液體輕度透明。
+ : 2min菌體部分凝集成細小顆粒,液體混濁。
- :2min內(nèi),無凝集現(xiàn)象,或2min以上才能出現(xiàn)細小顆粒者。