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免疫金試紙膜和試劑盒檢測(cè)法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27
因?yàn)槟z體金具有肉眼可觀察的紅色,所以為不需要任何儀器的試紙膜或試劑盒法的免疫檢測(cè)提供了可能,利用免疫金試紙膜法檢測(cè)的模式可以很靈活,根據(jù)具體情況可以采用不同的方式:既可以標(biāo)記抗體,又可以標(biāo)記抗原;既可以采用標(biāo)記抗原與待測(cè)抗原的競(jìng)爭(zhēng)方式進(jìn)行檢測(cè),又可以利用標(biāo)記抗體或標(biāo)記二抗的夾心法方式進(jìn)行檢測(cè)。
美國(guó)PAN PROBE、INC、生物技術(shù)公司生產(chǎn)的產(chǎn)品名稱為“快速一步法膠體金尿測(cè)試條”的膠體金試紙,有以下幾種產(chǎn)品種類:(1)嗎啡/海洛因/鴉片;(2)可卡因;(3)苯丙胺;(4)甲基苯丙胺;(5)大麻;(6)安定。這種檢測(cè)試條的檢測(cè)時(shí)間是5min,在室溫下保存有效期兩年.使用方法是將3滴尿液加入加樣孔,雙紅線為陰性,單紅線為陽(yáng)性[3]
本試驗(yàn)基于抗原/抗體結(jié)合反應(yīng)的原理,并被用于對(duì)人類尿樣中嗎啡和鴉片制品的分析檢測(cè).分析過程中,在尿樣中的藥物及其代謝物與固著在滲透膜上的藥物綴合物共同競(jìng)爭(zhēng)在有色微小顆粒上的有限的抗體結(jié)合部位.試驗(yàn)?zāi)驑颖坏稳氲綕B透膜一端的樣本液槽中.如果尿樣含有所要檢測(cè)的藥物,那么藥物及其代謝產(chǎn)物會(huì)競(jìng)爭(zhēng)在微小顆粒上的有限的抗體結(jié)合部位、當(dāng)藥物很充足時(shí),它們會(huì)全部占據(jù)抗體結(jié)合部位、這會(huì)阻止有色微小顆粒和膜上試驗(yàn)探極區(qū)相結(jié)合.這樣陽(yáng)性尿樣在試驗(yàn)區(qū)就不會(huì)出現(xiàn)沉淀色帶.試紙上另一條對(duì)照色帶是另一處抗體反應(yīng)區(qū),它表明試驗(yàn)是可靠的.在作試驗(yàn)結(jié)果判斷前,對(duì)照色帶總是應(yīng)該出現(xiàn)的.一般情況下,陰性結(jié)果是出現(xiàn)兩條色帶:一條為對(duì)照色帶,在試驗(yàn)區(qū)還出現(xiàn)一條色帶沉淀線,而陽(yáng)性結(jié)果只出現(xiàn)一條色帶。
市面上大量使用的早早孕HCG膠體金試紙,采用了雙抗體夾心法的檢測(cè)模式.陽(yáng)性尿樣是雙紅線,陰性尿樣是單紅線、人體絨毛膜促性腺激素(HCG)的含量是衡量懷孕與否的重要指標(biāo),懷孕婦女尿液中的HCG濃度比末懷孕婦女顯著增高.HCG抗體1預(yù)先被固定在試紙膜的特定部位上(就是檢測(cè)線出現(xiàn)的部位),金標(biāo)HCG抗體2被平鋪在尿樣展開時(shí)經(jīng)過的區(qū)域、當(dāng)陽(yáng)性尿樣被加入時(shí),尿樣中的HCG首先與膜上平鋪的金標(biāo)HCG抗體2結(jié)合,隨著尿樣的展開最終被固定在HCG抗體1的地方并顯色。當(dāng)陰性尿樣被加入后,由于沒有HCG與金標(biāo)抗體2結(jié)合,最終金標(biāo)抗體2不會(huì)在抗體1處被富集,所以檢測(cè)線不出現(xiàn)紅色[6]
艾滋病I/II型定性試劑盒也采用了膠體金標(biāo)記的方法,檢測(cè)的是人體血清中的艾滋病病毒(human immunodeficiency virus,HIV)特異性抗體。
便隱血膠體金試紙可以檢測(cè)糞便中微量人血紅蛋白,為早期胃腸道腫瘤發(fā)現(xiàn)和診斷提供了依據(jù)。目前便隱血膠體金試紙已被一些醫(yī)院臨床采用,并在健康人群體檢中運(yùn)用.便隱血膠體金試紙檢驗(yàn)法采用雙抗體的三明治夾心免疫檢驗(yàn)法,特異性抗體是針對(duì)糞便樣品中的血紅蛋白(Hb).如果便樣中含有Hb,它就會(huì)和試劑中的金標(biāo)抗體組成抗原抗體復(fù)合物,再和反應(yīng)區(qū)中的另一種Hb抗體形成紫紅色的色帶,如果便樣中無(wú)Hb,反應(yīng)區(qū)中就不會(huì)有色帶出現(xiàn).
梅毒膠體金法試劑盒采用免疫膠體金技術(shù),通過硝酸纖維素膜上包被特異性梅毒基因重組抗原,檢測(cè)標(biāo)本中特異性的梅毒抗體,梅毒膠體金法具有較好的特異性和靈敏度,在用于供血者篩選時(shí)優(yōu)于TRUST法,且操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷清晰快速,但其必須使用血清或血漿,不適合街頭一次性流動(dòng)采血[7]。
此外還有其他的一些膠體金試劑盒,象“滴金法快速檢測(cè)幽門螺桿菌感染試劑盒”等,好多種用于細(xì)菌、病毒檢驗(yàn)的膠體金試劑盒。
現(xiàn)有膠體金試劑盒很多,價(jià)格和質(zhì)量各異,適用性不同,應(yīng)遵循合理的原則加以選擇,以期最小的花費(fèi)達(dá)到最佳的效果。
膠體金技術(shù)因其獨(dú)特的優(yōu)越性,現(xiàn)在應(yīng)用已越來越廣,但世上無(wú)十全十美之物,膠體金也有其缺點(diǎn)。
(1)、配體固定于膠體金主要依賴物理吸附作用,而并非各種生物學(xué)活性分子都可被吸附。因此膠體金適用性雖廣,但并非適用于各種物質(zhì)的測(cè)定。
(2)、配體與膠體金結(jié)合的機(jī)理至今尚不甚明了,因此制備試劑的操作、產(chǎn)品質(zhì)量等相當(dāng)程度上有賴于經(jīng)驗(yàn)。
(3)、膠體金在制備和使用時(shí)對(duì)水質(zhì)及器具的清潔度要求甚高,各種污染可使試劑自凝或產(chǎn)生非特異的IGSS反應(yīng)。
(4)、膠體金先包以牛血清白蛋白等惰性蛋白質(zhì),經(jīng)活化后再與配體化學(xué)交聯(lián)結(jié)合,從而可結(jié)合不能被吸附的配體,并使之保持良好的定向和穩(wěn)定性,但操作麻煩,產(chǎn)品得率低。

 

 

 

 
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