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實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳質(zhì)量檢測(cè)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

一、意義
遺傳檢測(cè)主要指實(shí)驗(yàn)小鼠的遺傳檢測(cè)。自從實(shí)驗(yàn)小鼠作為一種研究工具,人們已創(chuàng)造了許多實(shí)驗(yàn)品系,這些品系現(xiàn)已分布在世界各地。封閉群、近交系、同類系、重組近交系和突變系的總數(shù)估計(jì)在500種以上,由于這些品系的世界性分布,其中又產(chǎn)生了許多亞系,而在同品系的亞系之間,往往又存在許多潛在性的遺傳差異,某些亞系可以攜帶或多或少已經(jīng)改變了的基因組,而又保留著原來的命名。因此,當(dāng)人們利用同一個(gè)品系進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),可能得不到相同的結(jié)果,人們又常常會(huì)把這不同的結(jié)果歸罪于環(huán)境、試驗(yàn)條件,而沒有人認(rèn)識(shí)到它是一種遺傳上的原因。
近交系小鼠遺傳檢測(cè)的意義就在于按照小鼠標(biāo)準(zhǔn)化命名委員會(huì)的標(biāo)準(zhǔn)審核近交系,把一切改變的等位基因予以剔除。
遠(yuǎn)交群遺傳檢測(cè)的目的在于保持遺傳上的穩(wěn)定性,即在一個(gè)群體內(nèi)所有基因的基因頻率的比例始終保持不變,從而貯藏現(xiàn)存的遺傳雜合性。
二、遺傳改變的原因
(一)近交系基因改變的原因
1. 一個(gè)外來的基因組雜交進(jìn)一個(gè)近交系, 由于這種雜交所產(chǎn)生的遺傳污染不僅僅是一個(gè)基因位點(diǎn),污染程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過基因突變或遺傳雜合性的出現(xiàn),它的發(fā)生也不是間斷的逐漸積累發(fā)生的變化。這種污染多見于幾個(gè)品系,特別是幾個(gè)白化品系飼養(yǎng)在一起時(shí),如果飼養(yǎng)員未經(jīng)過訓(xùn)練、素質(zhì)差,則加劇這種污染的發(fā)生。
2. 殘余的雜合性 盡管我們采用嚴(yán)格的兄妹交配, 近交系在某些位點(diǎn)上仍保留殘余的雜合性。這是基于20對(duì)染色體、基因組總長(zhǎng)度2500分摩(cM)兄妹交配或親子交配60代,基因組完全純合子的概率達(dá)99%以上,仍有部分基因未純合,還有一個(gè)值得考慮的因素就是雜合子遺傳型的個(gè)體在受精率、繁育率和生活力上均超過純合子個(gè)體,故它易于繁衍和擴(kuò)大。
3. 遺傳突變 現(xiàn)代科學(xué)證明遺傳突變主要來自DNA序列的變化,這種變化可能是某核苷酸的置換、缺失或插入,從繁育體系上看,突變只有發(fā)生在代表血統(tǒng)的那些個(gè)體上,突變才能真正起作用。
(二)遠(yuǎn)交群基因改變的原因:同近交系一樣,遺傳污染和基因突變都能造成遠(yuǎn)交群的差異,但遠(yuǎn)交群等位基因分布改變的主要原因在于選擇,要保持一個(gè)遠(yuǎn)交群所有基因頻率的相對(duì)比例沒有變化,最恰當(dāng)?shù)暮诵姆庇簯?yīng)有1000個(gè)動(dòng)物,但事實(shí)上我們不可能做到這一點(diǎn),特別是近代,人們?yōu)榱丝刂莆⑸镂廴,采用剖腹產(chǎn)和悉生生物學(xué)技術(shù)定期地重建新的群體,在重建過程中,群體驟然變小,近交系數(shù)必將上升,因而導(dǎo)致雜合性下降,這也意味著某些基因被固定。在不同的單位這種對(duì)位點(diǎn)的不同固定往往導(dǎo)致了同一品種動(dòng)物等位基因分布的改變。
三、遺傳檢測(cè)的條件
(一) 檢測(cè)內(nèi)容
1. 生化位點(diǎn)標(biāo)志基因檢測(cè)
2. 免疫學(xué)檢測(cè) 包括混合淋巴細(xì)胞試驗(yàn),H-2基因和多價(jià)抗血清反應(yīng),皮膚移植等方法。
3. 形態(tài)學(xué)檢測(cè) 包括下頜骨形態(tài)分析法和染色體分帶技術(shù)等。
4. 毛色基因測(cè)試法
以上幾方面的方法實(shí)際上不可能全部采用,但也不能以單一的方法作為依據(jù),應(yīng)從生化標(biāo)志,形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)等方面綜合判斷一個(gè)品系的遺傳概貌是否發(fā)生改變較為妥善。
(二)檢測(cè)用動(dòng)物
在進(jìn)行基因檢測(cè)時(shí),應(yīng)盡量做到檢測(cè)頻率低,抽樣少,效率高。
1. 檢測(cè)核心群用鼠2-4只,每年一次或必要時(shí)測(cè)二次,效率高。
2. 檢測(cè)擴(kuò)大群用鼠50只左右,一般每十個(gè)月測(cè)一次,效率高。
3. 檢測(cè)生產(chǎn)群用鼠遠(yuǎn)多于50只,要求半年測(cè)一次?梢姽ぷ髁看,即不經(jīng)濟(jì), 效率又低。
下面就幾個(gè)重要和易于普及的遺傳學(xué)檢測(cè)方法進(jìn)行必要的討論。
四、遺傳學(xué)檢測(cè)方法
(一) 生化位點(diǎn)標(biāo)志基因測(cè)試法:生化位點(diǎn)標(biāo)志基因檢測(cè)常使用醋酸纖維素膜電泳技術(shù)。將待檢標(biāo)本(血清、腎勻漿等)點(diǎn)樣,走電泳,顯色。然后分析得到的電泳圖譜,確定各待測(cè)位點(diǎn)的基因型,然后把這些基因型與各品系標(biāo)準(zhǔn)基因型對(duì)比,列出相同與不同的基因位點(diǎn)。從而判斷被檢測(cè)品系的純合程度。
(二)小鼠皮膚移植法
小鼠皮膚移植是純系動(dòng)物遺傳質(zhì)量控制的基本方法之一,其方法簡(jiǎn)單,操作方便,可靠性好,值得推廣。小鼠與人類在其相應(yīng)的染色體上有控制移植成活的一組基因位點(diǎn),組成了主要組織相容性復(fù)合體(MHC)或主要組織相容性系統(tǒng)(MHS),小鼠的MHC稱為H-2復(fù)合體,位于第17條染色體,決定小鼠的主要組織相容性抗原(相當(dāng)于人的HLA系統(tǒng))。
小鼠組織相容性基因位點(diǎn)已知有56個(gè),如H-1、H-2、H-3……H-56。 由于組織相容性基因是共顯性的,所以能單獨(dú)在雜合中表達(dá)。各組織相容性位點(diǎn)的抗原具有不同強(qiáng)度的抗原性。小鼠的H-2位點(diǎn)是強(qiáng)抗原,引起對(duì)同種移植物產(chǎn)生強(qiáng)的排斥反應(yīng),使移植的皮膚約在十一天內(nèi)被破壞。其余的H位點(diǎn)都是弱抗原。又稱為次要組織相容性抗原, 這些位點(diǎn)對(duì)同種異體的移植物僅能導(dǎo)致延緩的排斥,這種排斥作用有的可維持長(zhǎng)達(dá)百天左右。
移植可分為不同類型
1. 自體移植 在同一個(gè)體上的不同部位之間進(jìn)行移植。 如小鼠背部腰椎兩側(cè)的皮膚左右互換移植,由于受體能識(shí)別移植物的抗原是自身的,故不能產(chǎn)生免疫反應(yīng),因此移植物能長(zhǎng)期存活。
2. 同種移植 即同一種屬動(dòng)物個(gè)體之間的移植,根據(jù)遺傳基因的差異又可分為:
①同系移植(同基因) 純系動(dòng)物的特點(diǎn)之一就是基因型一致,這是皮膚移植成功的重要的基礎(chǔ),所以受體的移植物抗原與供體完全一致,不產(chǎn)生排斥反應(yīng)。
②同種異系移植 同樣都是小鼠,但不是一個(gè)品系,其基因型不同,這樣的活組織移植必將引起受體的特異性免疫反應(yīng),移植物只能短期生長(zhǎng),最終必遭受體的排斥。
③同種近交系F1移植 F1的任何一個(gè)親代的組織移植給F1小鼠都能生長(zhǎng)。因?yàn)?F1中帶有雙親的各一半等位基因,故不產(chǎn)生免疫反應(yīng);反之,F(xiàn)1仔鼠的組織移植到親代則發(fā)生排斥,因?yàn)殡p親的基因型不同。
(三)毛色基因測(cè)試法
1. 基本原理:小鼠的毛色等位基因A、B、C、D、分別位于第2、4、7、9、 條染色體上。A、B、C、D基因?qū)ζ湎鄳?yīng)的a、b、c、d等位基因是顯性;而C基因又是其它色素基因的上位基因,當(dāng)cc隱性基因存在時(shí),細(xì)胞內(nèi)缺乏酪氨酸酶而不能合成色素,因此不論其它控制色素生成的基因是什么,小鼠均表現(xiàn)為白化。小鼠毛色表現(xiàn)型與基因型的關(guān)系是,“A-B-C-D-”為野生色;“A-bbC-D-”為桂皮色;“aaB-C-D-”為黑色;“aabbC-D-”為棕色;“-- -- cc --”為白化。所以根據(jù)遺傳學(xué)原理,使復(fù)隱性等位基因的小鼠與待測(cè)小鼠交配,能從其F1仔鼠的毛色推測(cè)被檢小鼠的基因型。
2. 方法
(1)已知復(fù)隱性等位基因型小鼠的選擇 可選用純系DBA/2小鼠, 它的基因型是“aabbCCdd”。
(2)待測(cè)鼠 可以是白化小鼠,亦可是其他顏色的小鼠。 但一般都選用近交系作為待測(cè)鼠,以達(dá)到了解近交系毛色基因純合程度或新培育品系的基因型之目的。當(dāng)然還可用非近交系作為對(duì)照組,以觀察其毛色基因分離情況。
(3)交配方式 選用70 日齡左右的已知復(fù)隱性基因的雄性小鼠和同樣條件的待測(cè)雌性小鼠,按1:1或1:2,自行交配,觀察并記錄交配、生產(chǎn)等時(shí)間和各數(shù)據(jù),以便于結(jié)果分析。
3. 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)
(1)F1仔鼠的毛色為同一顏色者,即可判斷被測(cè)品系毛色基因純合。
(2)同窩F1仔鼠不能少于7只,每個(gè)品系每次測(cè)試,其仔鼠的觀察數(shù)目不應(yīng)少于10只。
(3)同窩F1仔鼠內(nèi)若出現(xiàn)兩種以上毛色者即說明被測(cè)小鼠已發(fā)生基因污染和變異。
(四)基因型的判斷
1. F1代為同一毛色時(shí)待測(cè)小鼠基因的判斷 因?yàn)镕1代只有一種毛色,所以, 也只能有一個(gè)基因型,這樣首先可以肯定待測(cè)鼠的基因?yàn)榧兒,然后推?dǎo)待測(cè)鼠基因型。例如用DBA/2測(cè)BALB/C毛色基因型。DBA/2×BALB/C的F1代為桂皮色,基因型為AabbCcDd;與已知DBA/2(銀灰)的aabbCCdd基因型配對(duì)比較,可知F1中A,b,c,D 四個(gè)等位基因來自BALB/C,又因?yàn)镕1只有一種桂皮色,故可以推斷該待測(cè)BALB/C的毛色基因?yàn)榧兒? 基因型為AAbbccDD。
2. F1代為不同毛色時(shí)待測(cè)小鼠的基因型判斷 F1 代毛色不同則說明待測(cè)鼠的基因型不純,故不是純系動(dòng)物。那么它的基因型怎樣確定呢?方法是把所有F1代的毛色基因型與已知基因型對(duì)比,找出與已知基因型不同的基因,然后把它們按序排列即為待測(cè)鼠的基因型。
(四)下頜骨形態(tài)分析法:動(dòng)物的骨骼形態(tài)具有高度的遺傳性,而各種骨骼的形態(tài)、大小及其出現(xiàn)的差異均可作為鑒定品系的方法。Green早在1953 年即在研究這方面的問題,F(xiàn)簡(jiǎn)介下頜骨分析法,20±1g小鼠的頭骨經(jīng)煮沸3分鐘以上,并用胰酶于37 ℃消化24小時(shí)后用清水洗凈,取下頜骨置于L形直角座標(biāo)板上測(cè)量不同骨性標(biāo)志的長(zhǎng)度和高度,將各測(cè)量點(diǎn)的值記入表中,計(jì)算后與標(biāo)準(zhǔn)置信區(qū)做比較, 落在置信區(qū)內(nèi)表示檢驗(yàn)合格,落到置信區(qū)外的表示不合格。

 

 

 
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