1.按MTT檢測(cè)法培養(yǎng)細(xì)胞和用不同稀釋度的細(xì)胞因子處理細(xì)胞。
2.吸去培養(yǎng)液,用PBS洗滌兩次(如為懸浮細(xì)胞,應(yīng)在吸去上清液前先離心)。
3.每孔加60μl NAG染液,在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)。
4.每孔加90μl終止液,混勻后置酶聯(lián)檢測(cè)儀上測(cè)定光密度(OD)值,檢測(cè)波長(zhǎng)402nm。以O(shè)D值對(duì)樣品稀釋度作圖,比較標(biāo)準(zhǔn)曲線和待測(cè)樣品曲線即可求得待測(cè)樣品中細(xì)胞因子的含量。