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單細(xì)胞CMC試驗(yàn)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08
1.用細(xì)胞培養(yǎng)液等量混合效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞,30℃水浴10分鐘。室溫中250×g離心5分鐘,去上清液。同量靶細(xì)胞不加效應(yīng)細(xì)胞同樣處理作為對(duì)照。
2.用少量細(xì)胞培養(yǎng)液輕輕懸浮細(xì)胞,吸管上下吹打5~6次。這一分散細(xì)胞的步驟關(guān)系到試驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性,應(yīng)當(dāng)設(shè)法保持技術(shù)的一致性。取少許細(xì)胞懸液,稀釋后直接在顯微鏡下計(jì)數(shù)效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞的結(jié)合率,即平均每100各淋巴細(xì)胞中結(jié)合了靶細(xì)胞的效應(yīng)細(xì)胞的數(shù)目。
3.其余的細(xì)胞懸液與等量液態(tài)(37℃)的0.5%低熔點(diǎn)瓊脂糖混合均勻,鋪在培養(yǎng)皿中,厚度≤2mm。固化后小心加入適量細(xì)胞培養(yǎng)液覆蓋瓊脂糖層,置37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1~4小時(shí)。
4.吸去培養(yǎng)液,加入適量0.1%臺(tái)盼藍(lán)覆蓋瓊脂糖層,室溫染色5分鐘。吸去染色液,加入適量0.2%甲醛覆蓋瓊脂糖層,室溫固定5分鐘。
5.在顯微鏡下死亡細(xì)胞呈藍(lán)色,計(jì)數(shù)靶細(xì)胞的死亡率。靶細(xì)胞的自發(fā)死亡率可以從經(jīng)同樣處理的靶細(xì)胞對(duì)照培養(yǎng)皿中測(cè)得。如區(qū)分效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞有困難,可以用雙醋酸熒光素染色加以區(qū)分。鏡下計(jì)數(shù)。
 

 

 
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