非洲豬瘟病毒基因類(lèi)型多，數(shù)量龐大，免疫逃逸機(jī)制復(fù)雜多樣，可逃避宿主免疫細(xì)胞的清除。

  為什么非洲豬瘟沒(méi)有疫苗？農(nóng)業(yè)農(nóng)村部消息稱(chēng)，非洲豬瘟病毒基因類(lèi)型多，數(shù)量龐大，免疫逃逸機(jī)制復(fù)雜多樣，可逃避宿主免疫細(xì)胞的清除�，F(xiàn)階段已研制的一些非洲豬瘟疫苗，雖然能誘導(dǎo)產(chǎn)生一定水平的抗體，但并不具備中和非洲豬瘟病毒的能力，無(wú)法達(dá)到有效防控非洲豬瘟的目的。

  

  由于疫苗研發(fā)困難，基于國(guó)際非洲豬瘟防控經(jīng)驗(yàn)，當(dāng)前首要任務(wù)依然是完善非洲豬瘟綜合防控措施，同時(shí)強(qiáng)化新型免疫技術(shù)攻關(guān)。 那么，當(dāng)前非洲豬瘟疫苗的研究進(jìn)展如何呢？

  非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒(ASFV)感染引起家豬、疣豬、歐洲野豬和美洲野豬的一種傳染性極強(qiáng)的出血性疾病。所有年齡的豬都易感。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定報(bào)告的動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為一類(lèi)動(dòng)物疫病。

  由于ASFV的抗感染機(jī)制十分復(fù)雜、基因型多(22個(gè)基因型)且病毒容易變異，故ASF疫苗一直未研究成功，但國(guó)外科學(xué)家一直在不斷嘗試。

一、滅活疫苗

  滅活疫苗作為最經(jīng)典的疫苗研制方式，在非洲豬瘟發(fā)現(xiàn)之后即已開(kāi)始研發(fā)，但早期落后的滅活工藝無(wú)法取得滿意的制苗效果。例如經(jīng)加熱，復(fù)方碘溶液，甲苯，福爾馬林，結(jié)晶紫，β-丙內(nèi)酯，乙酰氮丙啶和縮水甘油醛處理的ASF滅活疫苗雖部分能刺激豬產(chǎn)生抗體但即使借助佐劑仍無(wú)法抵御ASFV的攻擊。感染豬的脾組織加上佐劑制作的疫苗保護(hù)范圍有限且保護(hù)率也只有70%，攻毒后存活下來(lái)的豬也都表現(xiàn)臨床癥狀。

  越來(lái)越多的科學(xué)家認(rèn)識(shí)到細(xì)胞免疫在抵抗ASFV的感染過(guò)程中起到至關(guān)重要的作用。但是由于滅活疫苗本身的原因，很難刺激機(jī)體產(chǎn)生高水平的細(xì)胞免疫，盡管使用了目前為止效果最好的佐劑，對(duì)于刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫反應(yīng)的程度也是非常有限，完全達(dá)不到有效的保護(hù)效果。

  小結(jié)：

  1、ASF滅活疫苗免疫后可產(chǎn)生高效價(jià)的抗體，但很難檢測(cè)到中和抗體的存在;

  2、迄今為止，采用多種傳統(tǒng)方法制備的ASF滅活疫苗均不能對(duì)強(qiáng)毒攻擊提供有效的免疫保護(hù);

  3、自家滅活疫苗也無(wú)效;

  4、細(xì)胞免疫在ASF疫苗免疫保護(hù)中起重要作用。

二、弱毒疫苗　

  1、傳代弱毒苗

  傳代過(guò)程中，ASFV致病力逐漸下降，同時(shí)病毒免疫原性和穩(wěn)定性也隨之下降。在葡萄牙和西班牙進(jìn)行的田間試驗(yàn)，特別是在葡萄牙，550,000只豬免疫后有128,684只出現(xiàn)嚴(yán)重的免疫副反應(yīng)，肺炎、運(yùn)動(dòng)障礙、皮膚潰瘍、流產(chǎn)甚至死亡，同時(shí)出現(xiàn)大量病毒攜帶豬。而且隨后出現(xiàn)的ASF疫情中分離的弱毒株也很有可能來(lái)自此次疫苗接種。

  Krug等人利用分離株ASFV-G在Vero細(xì)胞中進(jìn)行傳代至第110代完全喪失毒力，接種家豬后又不能獲得相應(yīng)的保護(hù)力。

  所以傳代致弱的ASFV安全性較差同時(shí)也不能提供有效的免疫保護(hù)。

  2、天然弱毒苗

  采用天然致弱ASFV毒株免疫動(dòng)物能夠產(chǎn)生較好的針對(duì)同源強(qiáng)毒株的攻毒保護(hù)，保護(hù)率在66%~100%之間。

  以O(shè)URT88/3免疫并用致弱性O(shè)URT88/1毒株進(jìn)行加強(qiáng)免疫后，可以增加I 型干擾素的產(chǎn)生和增強(qiáng)干擾素的反應(yīng)強(qiáng)度，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)ASFV I型不同分離毒株的交叉保護(hù)，但是可造成諸多副反應(yīng)。

  3、重組弱毒苗

  隨著全基因測(cè)序技術(shù)的不斷成熟以及ASFV基因功能的不斷探索，通過(guò)基因敲除毒力基因或者免疫抑制基因的方式制備ASF弱毒疫苗的可能性越來(lái)越大。

  研究表明，一些ASFV毒株在缺失某些毒力基因或免疫抑制基因后，缺失毒株接種宿主毒力減弱且可誘導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)同源母本毒株或異源毒株的特異性免疫保護(hù)。例如，多基因家族360和530里面的基因，胸苷激酶基因和B119L或9GL基因，這些基因刪除后可以降低病毒的毒力;例如，編碼A238L蛋白、CD2v 蛋白、C-型凝集素和細(xì)胞凋亡抑制因子的基因被刪除后可能會(huì)對(duì)豬產(chǎn)生適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)反應(yīng)。

  小結(jié)：

  1、弱毒活疫苗能夠誘導(dǎo)強(qiáng)烈持久的免疫應(yīng)答，但生物安全是其使用的主要限制因素;

  2、通過(guò)基因重組、靶向缺失以及一次性侵染技術(shù)來(lái)增強(qiáng)弱毒活疫苗的安全性。

三、載體疫苗　

  Lokhandwala等人將ASFV p32、p54等基因分別重組入人腺病毒Ad5載體中，能夠獲得良好的抗原特異性反應(yīng)。

  也有學(xué)者將ASFV保護(hù)性抗原重組入腺病毒或痘病毒載體，以期獲得更好的細(xì)胞免疫反應(yīng)。但上述研究仍需通過(guò)攻毒保護(hù)試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證病毒活載體疫苗在使用中是否具有可行性。

四、核酸疫苗　

  核酸疫苗也就是DNA疫苗，是指將編碼某種抗原蛋白的重組真核表達(dá)載體直接注射到動(dòng)物體內(nèi)，使外源基因在宿主細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)內(nèi)合成抗原蛋白，誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生針對(duì)該抗原蛋白的特異性的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答，以達(dá)到預(yù)防和治療疫病的目的。

  Argilaguet等將P30和P54基因與豬白細(xì)胞抗原II的特異性抗體單鏈可變區(qū)在真核表達(dá)載體中融合表達(dá);接種該疫苗后，能夠使部分動(dòng)物獲得一定的免疫保護(hù)效果。

  雖然根據(jù)一個(gè)或兩個(gè)ASFV抗原構(gòu)建的DNA疫苗并不能誘導(dǎo)產(chǎn)生高水平的免疫保護(hù)效果，但是通過(guò)表達(dá)文庫(kù)構(gòu)建的4029個(gè)表達(dá)質(zhì)粒進(jìn)行的免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，保護(hù)率達(dá)到60%，且免疫攻毒后存活的豬無(wú)排毒現(xiàn)象，這標(biāo)志了核酸疫苗邁出的一大步。

  小結(jié)：

  隨著ASFV基因組及保護(hù)性抗原的不斷深入研究以及表達(dá)載體的不斷改造優(yōu)化，DNA疫苗一定會(huì)在未來(lái)ASF疫苗市場(chǎng)上占據(jù)一席之地。

五、亞單位疫苗　

  ASF亞單位疫苗的研究策略主要是將具有中和表位的非洲豬瘟病毒保護(hù)性抗原基因在原核或真核細(xì)胞中表達(dá)，并將產(chǎn)生的蛋白質(zhì)或多肽遞呈給抗原遞呈細(xì)胞，以誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的抗非洲豬瘟病毒的中和抗體。

  P72，P30和P54是感染過(guò)程中引起體液免疫應(yīng)答最重要的3個(gè)抗原蛋白。針對(duì)P30的抗體可以阻止病毒內(nèi)吞，針對(duì)P72和P54的抗體可以阻止病毒吸附，但是將這三個(gè)蛋白制備疫苗具有一定的局限性。有研究表明，用p30和p54蛋白制備的疫苗僅能提供50%的保護(hù)，P54/30重組蛋白不能提供免疫保護(hù)，僅能延緩臨床癥狀的出現(xiàn)時(shí)間和降低病毒血癥水平。而多項(xiàng)試驗(yàn)都表明了單純的將蛋白作為疫苗使用有多方面的不足。

  小結(jié)：

  單純依靠一個(gè)或幾個(gè)病毒基因表達(dá)的蛋白很難達(dá)到免疫預(yù)防效果。

總結(jié)：

  傳染病流行的三個(gè)基本環(huán)節(jié)是：傳染源、傳播途徑和易感動(dòng)物。我們現(xiàn)在能做的就是控制傳染源和切斷傳播途徑，易感動(dòng)物暫無(wú)有效疫苗保護(hù)，且近期也不會(huì)有有效的疫苗出現(xiàn)。