(一)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>學(xué)習(xí)自制水浸片觀察霉菌的形態(tài)
(二)實(shí)驗(yàn)原理:霉菌的營(yíng)養(yǎng)體是分枝的絲狀體。其個(gè)體比細(xì)菌和放線菌大得多,分為基內(nèi)菌絲和氣生菌絲。氣生菌絲中又可分化出繁殖絲。不同霉菌的繁殖菌絲可以形成不同的孢子。
霉菌菌絲較粗大,細(xì)胞易收縮變形,且孢子容易飛散,所以制標(biāo)本時(shí)常用乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液。此染色液制成的霉菌標(biāo)本片的特點(diǎn)是:細(xì)胞不變形,具有殺菌防腐作用,且不易干燥,能保持較長(zhǎng)時(shí)間,溶液本身呈藍(lán)色,有一定染色效果。
利用培養(yǎng)在玻璃紙上的霉菌作為觀察材料,可以得到清晰、完整、保持自然狀態(tài)的霉菌形態(tài);也可以直接挑取生長(zhǎng)在平板中的霉菌菌體制水浸片觀察。
(三)實(shí)驗(yàn)器材
1.活材料:在馬鈴薯瓊脂平板上或用玻璃紙透析培養(yǎng)法培養(yǎng)3—4天的根霉(Rhizpus sp.)、青霉(Penicillum sp.)、曲霉(Aspergillus sp.);
2.染色液和試劑:乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液(附錄二、(一)、10)、50%酒精(V/V)。
3.器材:剪刀、鑷子、載玻片、蓋玻片、解剖針、顯微鏡。
(四)實(shí)驗(yàn)方法
1.制水浸制片觀察法 在載玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液或蒸餾水,用解剖針從生長(zhǎng)有霉菌的平板中挑取少量帶有孢子的霉菌菌絲,用50%的乙醇浸潤(rùn),再用蒸餾水將浸過(guò)的菌絲洗一下,然后放入載玻片上的液滴中,仔細(xì)地用解剖針將菌絲分散開來(lái)。蓋上蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡,且不要再移動(dòng)蓋玻片),先用低倍鏡,必要時(shí)轉(zhuǎn)換高倍鏡鏡檢并記錄觀察結(jié)果。
2.玻璃紙透析培養(yǎng)觀察法
(1)玻璃紙的選擇與處理 要選擇能夠允許營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)透過(guò)的玻璃紙。也可收集商品包裝用的玻璃紙,加水煮沸,然后用冷水沖洗。經(jīng)此處理后的玻璃紙若變硬,必定是不可用的,只有那些軟的可用。將那些可用的玻璃紙剪成適當(dāng)大小,用水浸濕后,夾于舊報(bào)紙中,然后一起放入平皿內(nèi)121℃滅菌30min備用。
(2)菌種的培養(yǎng) 按無(wú)菌操作法,倒平板,冷凝后用滅菌的鑷子夾取無(wú)菌玻璃紙貼附于平板上,再用接種環(huán)沾取少許霉菌孢子,在玻璃紙上方輕輕抖落于紙上。然后將平板置28—30℃下培養(yǎng)3—5天,曲霉菌和青霉菌即可在玻璃紙上長(zhǎng)出單個(gè)菌落(根霉菌的氣生性強(qiáng),形成的菌落鋪滿整個(gè)平板)。
(3)制片與觀察 剪取玻璃紙透析法培養(yǎng)3—4天后長(zhǎng)有菌絲和孢子的玻璃紙一小塊,先放在50%乙醇中浸一下,洗掉脫落下來(lái)的孢子,并趕走菌體上的氣泡,然后正面向上貼附于干凈載玻片上,滴加1—2滴乳酸石炭酸棉藍(lán)液,小心地蓋上蓋玻片(注意不要產(chǎn)生氣泡),且不要移動(dòng)蓋玻片,以免搞亂菌絲。
標(biāo)本片制好后,先用低倍鏡觀察,必要時(shí)再換高倍鏡。注意觀察菌絲有無(wú)隔膜,有無(wú)假根、足細(xì)胞等特殊形態(tài)的菌絲。注意其無(wú)性繁殖器官的形狀和構(gòu)造,孢子著生的方式和孢子的形態(tài)、大小等。
(五)實(shí)驗(yàn)作業(yè):
給出根霉、青霉、曲霉的個(gè)體形態(tài)圖,并注明各部位名稱。