將試驗菌株和陽性及陰性對照菌株分別接種于0.6mLCAYE培養(yǎng)基內(nèi)，37℃振蕩培養(yǎng)過夜。加入20000IU/mL的多粘菌素B0.05mL，于37℃ 1h，離心4000r/min 15min，分離上清液，加入0.1%硫柳汞0.05mL，于4℃保存待用。

酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測LT和ST
　　LT檢測方法(雙抗體夾心法)：(1)包被：先在產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌LT和ST酶標診斷試劑盒中取出包被用LT抗體管，加入包被液0.5mL，混勻后全部吸出于3.6mL包被液中混勻，以每孔100μL量加入到40孔聚苯乙烯硬反應(yīng)板中，第一孔留空作對照，于4℃冰箱濕盒中過夜。(2)洗板：將板中溶液甩去，用洗滌液I洗3次，甩盡液體，翻轉(zhuǎn)反應(yīng)板，在吸水紙上拍打，去盡孔中殘留液體。(3)封閉：每孔加100μL封閉液，于37℃水浴中1h。(4)洗板：用洗滌液Ⅱ洗3次，操作同上。(5)加樣本：每孔分別加各沖試驗菌株產(chǎn)毒培養(yǎng)液100μL，37℃水浴中1h。(6)洗板：用洗滌液Ⅱ洗3次，操作同上。(7)加酶標抗體：先在酶標LT抗體管中加0.5mL稀釋液，混勻后全部吸出于3.6mL稀釋液中混勻，每孔加100μL，37℃水浴中1h。(8)洗板：用洗滌液Ⅱ洗3次，操作同上。(9)酶底物反應(yīng)：每孔(包括第一孔)各加基質(zhì)液100μL，室溫下避光作用5～10min，加入終止液50μL。(10)結(jié)果判定：以酶標儀在波長492nm下測定吸光度OD值，待測標本OD值大于陰性對照3倍以上為陽性，目測顏色為桔黃色或明顯高于陰性對照為陽性。
　　ST檢測方法(抗原競爭法)：(1)包被：先在包被用ST抗原管中加0.5mL包被液，混勻后全部吸出于1.6mL包被液中混勻，以每孔50μL加入于40孔聚苯乙烯軟反應(yīng)板中。加液后輕輕敲板，使液體布滿孔底。第一孔留空作對照，置4℃冰箱濕盒中過夜。(2)洗板：用洗滌液I洗3次，操作同上。(3)封閉：每孔，加100μL封閉液，37℃水浴1h。(4)洗板：用洗滌液Ⅱ洗3次，操作同上。(5)加樣本及ST單克隆抗體：每孔分別加各試驗菌株產(chǎn)毒培養(yǎng)液50μL，稀釋的ST單克隆抗體50μL(先在ST單克隆抗體管中加0.5mL稀釋液，混勻后全部吸出于1.6mL稀釋液中，混勻備用)，37℃水浴1h。(6)洗板：用洗滌液Ⅱ洗3次，操作同上。(7)加酶標記兔抗鼠Ig復(fù)合物：先在酶標記兔抗鼠Ig復(fù)合物管中加0.5mL稀釋液，混勻后全部吸出于3.6mL稀釋液中混勻，每孔加100μL，37℃水浴1h。(8)洗板：用洗滌液Ⅱ洗3次，操作同上。(9)酶底物反應(yīng)：每孔(包括第一孔)各加基質(zhì)液100μL，室溫下避光5～10min，再加入終止液50μL。(10)結(jié)果判定：以酶標儀在波長492nm下測定吸光度(OD)值：
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　　目測無色或明顯淡于陰性對照為陽性。
　　

雙向瓊脂擴散試驗檢測LT：

　　將被檢菌株按五點環(huán)形接種于Elek氏培養(yǎng)基上。以同樣操作，共做兩份，于36℃培養(yǎng)48h。在每株菌的菌苔上放多粘菌素B紙片，于36℃經(jīng)5～6h，使腸毒素滲入瓊脂中，在五點環(huán)形菌苔各5mm處的中央，挖一個直徑4mm的圓孔，并用一滴瓊脂墊底。在平板的中央孔內(nèi)滴加LT抗毒素30μL，用已知產(chǎn)LT和不產(chǎn)毒菌株作對照，于36℃經(jīng)15～20h觀察結(jié)果。在菌斑和抗毒素孔之間出現(xiàn)白色沉淀帶者為陽性，無沉淀帶者為陰性。
　　

乳鼠罐胃試驗檢測ST
　　將被檢菌株接種于Honda氏產(chǎn)毒肉湯內(nèi)，于36℃培養(yǎng)24h，以3000r/min離心30min，取上清液經(jīng)薄膜濾器過濾，加熱60℃30min，每1mL濾液內(nèi)加入2%伊文思藍溶液0.02mL。將此濾液用塑料小管注入1～4日齡的乳鼠胃內(nèi)0.1mL，同時接種3～4只，禁食3～4h后用三氯甲烷麻醉，取出全部腸管，稱量腸管(包括積液)重量及剩余體重。腸管重量與剩余體重之比大于0.09為陽性，0.07～0.09為可疑。