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大腸桿菌的檢驗方法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2010-05-13
核心提示:    SN 0169-1992 出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法    GB/T 4789.6-2003 食品衛(wèi)生微生物學檢驗 致瀉

    SN 0169-1992 出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法

    GB/T 4789.6-2003 食品衛(wèi)生微生物學檢驗 致瀉大腸埃希氏菌檢驗

    GB/T 4789.6-1994 食品衛(wèi)生微生物學檢驗 致瀉大腸埃希氏菌檢驗(已經(jīng)作廢)

以SN標準方法為例,進行說明。

樣品制備:
  以無菌操作取25 g樣品,放入裝有225 mL稀釋劑的滅菌均質(zhì)杯內(nèi),于8000 r/min均質(zhì)1~2min,制成1:10樣品勻液(也可用滅菌乳缽研磨的方法代替)。
  稀釋樣品勻液根據(jù)對樣品污染情況的估計,用稀釋劑將樣品勻液制成一系列十倍遞增的樣品稀釋液,如10**-2、10**-3、10**-4……。從制備樣品勻液至稀釋完畢,全過程不得超過15min。

  附:這是一種9管MPN法測定方法,什么是MPN法?

LST和EC初步篩選:
  對每個樣品,選擇適宜的三個連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液。每個稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白(月示)(LST)肉湯,每管接種1mL。將接種管置于36±1℃培養(yǎng)48±2h。

  觀察試管的產(chǎn)氣情況:檢查倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生,用直徑為3mm的接種環(huán)將所有48±2h內(nèi)產(chǎn)氣的LST肉湯管培養(yǎng)物移種于EC肉湯管中。將所有接種的EC肉湯管在30min內(nèi)放入帶蓋44.5±0.5℃水浴箱內(nèi),培養(yǎng)48±2h。

  附:LST肉湯、EC肉湯有些什么?

EMB平板:

  取其產(chǎn)氣管的培養(yǎng)物劃線接種于伊紅美藍(EMB)平板,36±1℃培養(yǎng)24±2h。

  檢查平板上有無具黑色中心有光澤或無光澤的典型菌落。

  如有典型菌落,則從每個平板上至少挑取2個典型菌落;如無典型菌落,則從每個平板上至少挑取2個可疑菌落。用接種針接觸菌落中心部位,移種到營養(yǎng)瓊脂斜面上,36±1℃培養(yǎng)18~24h。

  附:怎樣進行平板劃線分離?

    平板劃線示例

    EMB平板原理及照片

生化試驗:
  將斜面培養(yǎng)物移種到下列培養(yǎng)基中進行生化試驗! 
  1 色氨酸肉湯在36±1℃培養(yǎng)24±2h后,加Kovacs氏試劑0.2~0.3mL,上層出現(xiàn)紅色為靛基質(zhì)陽性反應。

  附:靛基質(zhì)試驗原理及照片


  2 MR-VP培養(yǎng)基:在36±1℃培養(yǎng)48±2h。以無菌操作移取培養(yǎng)物1 mL至13mm×100mm試管中,加5%α-萘酚乙醇溶液0.6mL,40%氫氧化鉀溶液0.2mL和少許肌酸結(jié)晶,振搖試管后靜置2h,如出現(xiàn)伊紅色,為VP試驗陽性。
  將MR-VP培養(yǎng)物的剩余部分再培養(yǎng)48h滴加5 滴甲基紅溶液。如培養(yǎng)物變紅色,為甲基紅試驗陽性,若變黃色則為陰性反應。

  附:MR-VP試驗原理及照片


  3 Koser氏枸椽酸鹽肉湯:
于36±1℃培養(yǎng)96h記錄有無生長。

  附:枸椽酸鹽利用試驗原理及斜面顯色照片


  4 LST肉湯于36±1℃培養(yǎng)48±2h,觀察試管中是否產(chǎn)氣。
  5 革蘭氏染色:取18h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物作革蘭氏染色。大腸桿菌為革蘭氏陰性。

大腸桿菌與非大腸桿菌生化鑒別如下:


━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━━━━
  靛 基 質(zhì)┃   MR   ┃   VP   ┃  枸椽酸鹽 ┃ 鑒定(型別)
━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━
    + ┃   +   ┃  。   ┃ 。    ┃典型大腸桿菌
   。々  。  ┃  。   ┃ 。    ┃非典型大腸桿菌
━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━
   。々А  +   ┃   -   ┃  +    ┃典型中間型
   。々А  +   ┃  。   ┃ 。   ┃非典型中間型
━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━
   。々А  -   ┃   +   ┃  +    ┃典型產(chǎn)氣腸桿菌
   。々А  -   ┃  。   ┃  +    ┃非典型產(chǎn)氣腸桿菌
━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━━━━
  如出現(xiàn)上表以外的生化反應類型,表明培養(yǎng)物可能不純,應重新劃線分離,必要時做
重復試驗。

結(jié)果報告:

  大腸桿菌為革蘭氏陰性無芽孢桿菌,發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣,IMViC試驗為++--或-+--,再根據(jù)LST肉湯陽性管數(shù)查MPN表,報告每克(毫升)樣品中大腸桿菌MPN值。

編輯:foodyy

 
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關(guān)鍵詞: 大腸桿菌
 

 
 
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