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蔓荊子提取物的有效成分研究及其含量測(cè)定

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2007-05-14

    蔓荊子為常用中藥材,中國(guó)藥典收載蔓荊子商品為馬鞭草科植物單葉蔓荊Vitex trifolia L.var.simplicifolia Cham.或三葉蔓荊V.trifolia L.的干燥成熟果實(shí)。單葉蔓荊分布廣,產(chǎn)量大,在我國(guó)主要分布在山東、江西一帶。蔓荊子作為中藥,具有疏散風(fēng)熱、清利頭目的功效[1]。目前,許多植物提取廠家都在生產(chǎn)蔓荊子提取物,但他們都是以牡荊素(Vitexin)為有效成分指標(biāo)在生產(chǎn),產(chǎn)品也是以牡荊素為指標(biāo)在向客戶銷售,我們經(jīng)過對(duì)蔓荊子提取物的研究發(fā)現(xiàn),真正起主要作用的是蔓荊子黃素,根本就沒有牡荊素的成分。我們對(duì)蔓荊子提取物進(jìn)行了分離和測(cè)定,并從中分離出來(lái)了蔓荊子黃素,并對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定,結(jié)果很好,對(duì)蔓荊子提取物的生產(chǎn)控制有可靠依據(jù)。

一、蔓荊子黃素的分離

1、儀器、試劑與提取物

1、1 儀器  X4型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀,溫度計(jì)未校正。HITACHI-200型紫外光譜儀。Shimadzu-400型紅外光譜儀。FX-90Q AM-300核磁共振儀,HP       5989A色-質(zhì)聯(lián)用儀。

1、2  試劑  層析用硅膠為青島海洋化工產(chǎn)品,Sephodex LH-20凝膠樹脂,石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇均為分析純

1、3  提取物  蔓荊子提取物為自己生產(chǎn)產(chǎn)品

2、蔓荊子提取物的分離鑒定

Me OH

max
 
取蔓荊子提取物1kg,用95%乙醇溶解,濾過,濾液回收乙醇并濃縮成稠膏,拌入硅膠,干燥后上硅膠柱層析,以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫,分別收集,根據(jù)薄層點(diǎn)板定性檢查,取蔓荊子黃素部分,再上凝膠樹脂,用氯仿-甲醇(1:1)洗脫,結(jié)晶分離,得兩個(gè)化合物,一個(gè)為黃色細(xì)針狀結(jié)晶,一個(gè)為黃色結(jié)晶。

 黃色結(jié)晶,mp189~190℃,鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性,UVλ    mn;256,273(sh),372;加三氯化鋁-鹽酸263,280(sh),371;加醋酸鈉257,275,350(10min后不減弱);加醋酸鈉-硼酸255,270,352。MSm/z;374(M+,100),359,355,331,316,301,285,273,257,245,217,187,173,164,151,135,135,121,93,69,53,43。1HNMRδppm:

3.73,3.80,3.87,3.92(s,OCH3×4),6.87(1H,s,8-H),7.1(1H,d,J=9.2H z,5’-H),7.5(1H,dd,J=9.2,3.0Hz,6’-H),7.6(1H,d,J=3.0Hz,2’-H),根據(jù)以上化學(xué)性質(zhì)及光譜數(shù)據(jù),鑒定為蔓荊子黃素。

黃色細(xì)針狀結(jié)晶,mp242~243℃(含水甲醇重結(jié)晶,文獻(xiàn)值236~238℃),鹽酸-

MeOH

max
 
鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性,UVλ    nm;260,273(sh),351;加甲醇鈉270,404;加三氯化鋁276,295(sh),405;加三氯化鋁-鹽酸268,280(sh),296(sh),372,400(sh);加醋酸鈉265,402(10min后不減弱),加醋酸鈉-硼酸264,376。MS m/z;360(M+,100),345,341,319,302,299,274,259,245,231,217,203,181,166,153,137,121,109,97,81,69,55,43。1HNMRδppm:3.37,3.80,3.92(s,OCH3×3),6.68(1H,s,8-H),6.92(1H,d,J=8.5H z,5’-H),7.49(1H,dd,J=8.5,2.0Hz,6’-H),7.6(1H,d,J=2.0Hz,2’-H),9.36,9.79,12.64(s)各一羥基上活潑氫,重水交換后消失。根據(jù)以上化學(xué)性質(zhì)及光譜數(shù)據(jù),鑒定為3,6,7-三甲基槲皮萬(wàn)壽菊素[2] 。 

二、蔓荊子黃素的含量測(cè)定

2、儀器與試劑

2、1儀器 美國(guó)熱電TSP高效液相色譜儀,7725i自動(dòng)進(jìn)樣器,AG135十萬(wàn)分子一電子天平

2、2 試劑 甲醇、磷酸均為分析純,水為雙重蒸餾水,對(duì)照品蔓荊子黃素自制,經(jīng)HPLC分析,純度為99.58%,蔓荊子提取物自己生產(chǎn)。

3、含量測(cè)定

3、1 色譜條件:色譜柱C18柱,流動(dòng)相:甲醇-0.4%磷酸溶液(60:40),檢測(cè)波長(zhǎng)258NM,流速1.0ml/min,柱溫:30℃

3、2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:精密稱取干燥至恒重的蔓荊子黃素對(duì)照品1.5mg,置于10ml容量瓶中,甲醇溶解定容,作為對(duì)照品溶液。精密吸取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置10ml容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,照上述條件測(cè)定,以蔓荊子黃素的峰面積積分值為縱坐標(biāo),其濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:C=2.225×10-7A-4.72×10-4,r=0.9999,其線性范圍在0.015mg/ml—0.075mg/ml。

3、3 樣品的測(cè)定:精密稱取蔓荊子提取物25mg,置于50ml容量瓶中,加甲醇溶解,超聲振蕩,定容過濾,取續(xù)濾液,即為供試品溶液。照上述方法測(cè)定,計(jì)算含量即得。

3、4 回收率實(shí)驗(yàn):精密稱取已知含量的蔓荊子提取物25mg,加入蔓荊子黃素對(duì)照品0.75mg,按照樣品測(cè)定項(xiàng)下進(jìn)行處理,測(cè)定,計(jì)算回收率:98.18%,RSD=1.46%。

3、5 精密度試驗(yàn):在上述條件下,對(duì)同一濃度的對(duì)照品溶液連續(xù)6次進(jìn)樣,計(jì)算峰面積平均值,RSD為0.945%。

3、6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 按照樣品測(cè)定方法,對(duì)同一批號(hào)樣品進(jìn)行5次平行試驗(yàn),蔓荊子黃素含量RSD為1.72%。

 三、小結(jié)

從我們對(duì)蔓荊子提取物的分離鑒定部分說明,在蔓荊子提取物中根本就沒有牡荊素成分,而只有與之功效幾乎相同的蔓荊子黃素,同時(shí),我們對(duì)蔓荊子提取物進(jìn)行高效液相分析,也沒有牡荊素的成分峰出現(xiàn),所以現(xiàn)市場(chǎng)上走的蔓荊子提取物應(yīng)以蔓荊子黃素為指標(biāo),在生產(chǎn)過程中也應(yīng)以蔓荊子黃素為有效成分來(lái)控制蔓荊子提取物的生產(chǎn),這為以后的蔓荊子生產(chǎn)提供了依據(jù)。

 四、參考文獻(xiàn)

   [1]  吳永忠,朱良輝等,不同產(chǎn)地蔓荊子化學(xué)成分含量比較,中藥材,23(10),2000,616~619

   [2]  王坤等,蔓荊子的薄層鑒定,山東中醫(yī)雜志,18(2),1999,82~83

  

 

 
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