國標規(guī)定的還原糖的檢測有四種方法,第一法和第二法適用于食品中還原糖的測定。第三法適用于小麥粉中還原糖含量的測定。第四法適用于甜菜塊根中還原糖的測定。
一. 實驗原理:
試樣經(jīng)除去蛋白質(zhì)后,以亞甲基藍作為指示劑,在加熱條件下標定過的堿性酒石酸銅溶液(已用還原糖標準溶液標定),根據(jù)樣品液消耗體積計算還原糖含量。
二. 試劑:
2.1使用試劑
2.2試劑的配置:
a.鹽酸溶液(1+1體積比例):量取鹽酸50ml,加水50ml混勻。
b.堿性酒石酸銅甲液:稱取硫酸銅15g和亞甲基藍0.05g,溶于水中,并稀釋至1000ml。
c.堿性酒石酸銅乙液:稱取酒石酸鉀鈉50g和氫氧化鈉75g,溶于水中,再加入亞鐵氰化鉀4g,完全溶解后,用水定容至1000ml。貯存于橡膠塞玻璃瓶中。
d.乙酸鋅溶液:稱取乙酸鋅21.9g,加冰乙酸3ml,加水溶解并定容至100ml。
e.亞鐵氰化鉀溶液(106g/L):稱取亞鐵氰化鉀10.6g,加水溶解并定容至100ml。
f.氫氧化鈉溶液(40g/L):稱取氫氧化鈉4g,加水溶解后,放涼,并定容至100ml。
2.3使用的標準品
2.4標準溶液配置
a.葡萄糖標準溶液(1.0mg/ml):準確稱取經(jīng)過98℃--100℃烘箱中干燥2h后的葡萄糖1g,加水溶解后,加入鹽酸溶液5ml,并用水定容至1000ml。此溶液每毫升相當于1.0mg葡萄糖。
b.果糖標準溶液(1.0mg/mL):準確稱取經(jīng)過98℃--100℃烘箱中干燥2h后的果糖1g,加水溶解后加入鹽酸溶液5ml,并用水定容至1000ml。此溶液相當于1.0mg果糖。
c.乳糖標準溶液(1.0mg/ml):準確稱取經(jīng)過94℃--90℃干燥2h的乳糖(含水)1g,加水溶解后加鹽酸溶液5ml,并用水定容至1000ml。此溶液每毫升相當于1.0mg乳糖(含水)。
d.轉化糖標準溶液(1.0mg/ml):準確稱取1.0526g蔗糖,用100ml水溶解,置具塞錐形瓶中,加鹽酸溶液5ml,在68℃--70℃水浴中加熱15min,防止至室溫,轉移至1000ml容量瓶中并加水定容至1000ml。每毫升標準溶液相當于1.0mg轉化糖。
三.儀器和設備
1.天平:感量為0.1mg
2.水浴鍋
3.可調(diào)溫電爐
4.酸式滴定管:25ml
四.分析步驟:
1.試樣制備
a.含淀粉的食品:稱取粉碎或均勻后的試樣10g—20g(精確至0.001g),置250ml容量瓶中,加水200ml,在45℃水浴中加熱1h,并時時振搖。冷卻后加水至刻度,混勻,靜置,沉淀。吸取200.0ml上清液置于另一250ml中,緩慢的加入乙酸鋅溶液5ml和亞鐵氰化鉀溶液5ml,加水至刻度線,混勻,靜置30min。用干燥濾紙過濾,棄去初濾液,去后續(xù)濾液備用。
b.酒精飲料:稱取混勻后的試樣100g(精確至0.01g),置于蒸發(fā)皿中,用氫氧化鈉溶液綜合至中性,在水浴上正發(fā)至原來體積的1/4后,移入250ml容量瓶中,緩慢加入乙酸鋅溶液5ml和亞鐵氰化鉀溶液5ml,加水至刻度,混勻,靜置30min,用干燥濾紙過濾,棄去初濾液,取后續(xù)濾液備用。
c.碳酸飲料:稱取混勻后的試樣100g(0.01g)于蒸發(fā)皿中,在水浴上微熱攪拌除去二氧化碳后,移入250ml容量瓶中,用水洗滌蒸發(fā)皿,洗液并入容量瓶,加水至刻度,混勻后備用。
d.其他食品:稱取粉碎后的固體試樣2.5g—5g(精確至0.001g)或混勻后的液體試樣5g—25g(精確至0.001g),置250ml容量瓶中,加水50ml緩慢加入乙酸鋅溶液5ml和亞鐵氰化鉀溶液5ml,加水至刻度,混勻,靜置30min,用干燥濾紙過濾,棄去初濾液,取后續(xù)濾液備用。
2.堿性酒石酸溶液的標定:
吸取堿性酒石酸銅甲液5.0ml和堿性酒石酸銅乙液5.0ml,于150ml錐形瓶中,加水10ml,加入玻璃珠2粒—4粒,從滴定管中加葡萄糖約9ml,控制在2min中內(nèi)加熱至沸騰,趁熱以每2秒1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖,直至溶液藍色剛好褪去為終點,記錄消耗葡萄糖的總體積,同時平行操作3份,取其平均值,計算每10ml(堿性酒石酸甲、乙液各5ml)堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄糖(其他還原糖)的質(zhì)量(mg)。
3.試樣溶劑預測
吸取堿性酒石酸銅甲液5.0ml和堿性酒石酸銅乙液5.0ml于150ml錐形瓶中,加水10ml,加入玻璃珠2粒—4粒,控制2min內(nèi)加熱至沸騰,保持沸騰以先快后慢的速度,從滴定管中滴加試樣溶液,保持沸騰狀態(tài),待溶液顏色變淺時,以1滴/2s的速度滴定,直至溶液顏色剛好褪去為終點,記錄樣品溶液消耗體積。
注;當樣液中的還原糖濃度過高時,應適當稀釋后再進行正式測定,每次滴定消耗樣液的體積控制與標定堿性酒石酸銅溶液的體積相近,約10ml左右,結果按式(1)計算;當濃度過低時則采取直接加入10ml樣品液,加水10ml,再用還原糖標準溶液滴定至終點,記錄消耗的體積與標定時消耗的還原糖標準體積只差相當于10ml樣液中所含還原糖的量,結果按式(2)計算。
4.試樣溶液測定
吸取堿性酒石酸銅甲液5.0ml和堿性酒石酸銅乙液5.0ml,置于150ml錐形瓶中,加水10nl,加入玻璃珠2粒—4粒,從滴定管滴加比預測體積少1ml的試樣溶液至錐形瓶中,控制在2min內(nèi)加熱至沸,保持沸騰繼續(xù)以1滴/2s的速度滴定,直至藍色剛好褪去為終點,記錄樣液消耗體積,同法平行操作三份,得出平均消耗體積(V)。
五.分析結果的表述
還原糖含量≥10g/100g時,計算結果保留三位有效數(shù)字;還原糖含量<10g/100g時,計算結果保留兩位有效數(shù)字。
六.精密度
在重復性條件下或得的兩次獨立測定結果的絕對值不得超過算數(shù)平均值的5%。
七.其他
當稱樣量為5g時,定量限為0.25g/100g。