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牛乳中蛋白質(zhì)的提取與鑒定

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-08-29  來(lái)源:實(shí)驗(yàn)室資訊網(wǎng)
核心提示:一、目的學(xué)習(xí)從牛乳中制備酪蛋白的原理和方法。二、原理牛乳和羊乳中含豐富的蛋白質(zhì),其中主要是酪蛋白。酪蛋白在羊乳罩中約占總
 一、目的
學(xué)習(xí)從牛乳中制備酪蛋白的原理和方法。
二、原理
牛乳和羊乳中含豐富的蛋白質(zhì),其中主要是酪蛋白。酪蛋白在羊乳罩中約占總蛋白量3/4,牛乳中約占總蛋白量的5/6。酪蛋白是一種含磷蛋白的不均一混合物。
蛋白質(zhì)在其等電點(diǎn)pH 溶液中溶解度降底。根據(jù)這個(gè)原理,將牛乳的PH調(diào)整至4.8,即酪蛋白的等電點(diǎn)時(shí),酪蛋白即沉淀出來(lái)。用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的脂肪,得到純的酪蛋白。所得酪蛋白供定性鑒定。
除去酪蛋白的濾液中,尚含有球蛋白,清蛋白等多種蛋白質(zhì)。
試劑
1、醋酸鈉緩沖液(0.2M pH4.6)。
2、米倫(Millon)試劑:將汞100g 溶于140ml(比重1.42)的濃硝酸中(在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行)。然后加兩倍量的蒸餾水稀釋。
3、95%乙醇
.
5、10%NaGl.
6、0.5%NaGO
7、0.1NaON
8、0.2%HC1.
9、飽和氫氧化鈣[Ca(OH)]
10、5%醋酸鉛
三、操作
(一)酪蛋白的制備取新鮮牛乳100ml,放入250 ml 燒杯中加熱至40℃.加入100ml 加熱至同樣溫度的醋酸緩沖液,一邊加一邊搖動(dòng),并用pH為4.7(用1%NaOH 或10%醋酸進(jìn)行調(diào)整)。冷卻至室溫,繼續(xù)放置5 分鐘,然后用細(xì)紗布或?yàn)V紙過(guò)濾。濾液為乳清保留以下做鑒定。過(guò)濾所得沉淀物,用少量蒸餾水洗幾次,過(guò)濾。將洗凈的沉淀物懸浮在約30ml 乙醇中,
用布氏漏斗抽濾。所得沉淀用乙醇和等量混合液洗滌兩次,抽干。最后用50ml 洗一次并抽干。取出抽干的粉狀物,攤開(kāi)在表面皿上, 使完全揮發(fā)。稱其干重計(jì)算其產(chǎn)量。
(二)酪蛋白的性質(zhì)鑒定
1.溶解度:取試管6 支,分別加水、10%氯化鈉、0.5%氯化鈉,0.1N 氫氧化鈉、0.2%鹽酸及飽和氫氧化鈣溶液各2ml。于每管中加入少量酪蛋白。不斷搖蕩,觀察并記錄各管中的酪蛋白溶解度。
2、米倫反應(yīng)1:取酪蛋白少許,放置于試管中。加入1ml 蒸餾水,再加入米論試劑10 滴,振搖,并徐徐加熱。觀察其顏色變化。
3、含硫(胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸)測(cè)定:取少量酪蛋白溶于1ml0.1N NaOH 溶液中,再加入1-3 滴5%醋酸鉛,加熱煮沸,溶液變?yōu)楹谏?/div>
(三)乳清中可凝固性蛋白質(zhì)的鑒定將制備酪蛋白時(shí)所得的濾液移入燒杯中,徐徐加熱。即出現(xiàn)蛋白質(zhì)沉淀。此為乳清中的球蛋白和清蛋白。注附:米倫反應(yīng)是由于蛋白質(zhì)分子中有羥基苯基(-CH-OH)存在之故.一些在3.5 位置上沒(méi)有取代基的酚類(lèi)化合物,例如酪氨酸、酚及廱香酚也呈陽(yáng)性反應(yīng)。在蛋白質(zhì)分子中,只有酪氨酸才具有羥基苯基,所以蛋白質(zhì)對(duì)米倫試劑起陽(yáng)性反應(yīng)。
編輯:songjiajie2010

 
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