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植物可溶性糖含量的測定

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-07-24  來源:實(shí)驗(yàn)室資訊網(wǎng)
核心提示: 可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖,是植物品質(zhì)的重要構(gòu)成性狀之一,尤其是以果實(shí)為目的產(chǎn)品的果樹作物,可溶性糖與酸的含量及其配
  可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖,是植物品質(zhì)的重要構(gòu)成性狀之一,尤其是以果實(shí)為目的產(chǎn)品的果樹作物,可溶性糖與酸的含量及其配比是影響果實(shí)風(fēng)味品質(zhì)的重要因素。對于鮮食品種,一般來講,高糖中酸,風(fēng)味濃,品質(zhì)優(yōu);低糖中酸,風(fēng)味淡,品質(zhì)差。因此,可溶性糖的定量研究對果樹的品質(zhì)育種具有重要意義。
一、試材及用具
1.試材 新鮮或冷凍的植物材料
2.儀器 及試劑 高速組織搗碎機(jī)、電熱恒溫水浴鍋、1000W調(diào)溫電爐以及200mL、250mL容量瓶、250mL錐形瓶及50mL堿式滴定管等玻璃儀器 ;試劑 主要包括費(fèi)林試劑 及亞甲基藍(lán)溶液等。
二、原理
本實(shí)驗(yàn)的主要原理:在加熱條件下,用還原糖溶液滴定一定量的費(fèi)林試劑時(shí),將費(fèi)林試劑中的二價(jià)銅還原為一價(jià)銅,以亞甲基藍(lán)為指示劑,稍過量的還原糖立即使藍(lán)色的氧化型亞甲基藍(lán)還原為無色的還原型亞甲基藍(lán)。通過實(shí)驗(yàn),學(xué)習(xí)并掌握用費(fèi)林試劑滴定法測定可溶性糖的原理和方法。
三、方法步驟
(一)試劑配制
1.費(fèi)林試劑甲:稱取硫酸銅(CuSO4 •5H2 O,分析純)34.6g溶于水中,稀釋至500mL,過濾,貯于棕色瓶內(nèi)。
2.費(fèi)林試劑乙:稱取氫氧化鈉50g和酒石酸鉀鈉(KNaC4 O6 H4 •4H2 O,分析純)138g溶于水中,稀釋至500mL,用石棉墊漏斗抽濾。
3.轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取9.5g蔗糖(分析純)用水溶解后轉(zhuǎn)入1000mL容量瓶中,加入6mol/L HCl(分析純)10mL,加水至100mL。在20~25℃下放置三天或在25℃保溫24h,然后用水定容(此為酸化的1%轉(zhuǎn)化糖液,可保存3~4個(gè)月)。測定時(shí),取1%轉(zhuǎn)化糖液25.00mL放入250mL容量瓶中,加入甲基紅指示劑一滴,用1mol/L NaOH溶液中和后用水定容,即為1mg/mL轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。
4.亞甲基藍(lán)溶液:稱取0.5g亞甲基藍(lán)(分析純)溶于10mL水中。
5.乙酸鋅溶液:稱取21.9g乙酸鋅[Zn(OAC)2 •2H2 O,分析純]溶于水中,加冰乙酸3mL稀釋至100mL。
6.亞鐵氰化鉀溶液:稱取10.6g亞鐵氰化鉀[K4 Fe(CN)6 •3H2 O,分析純]溶于水,稀釋至100mL。
(二)樣品提取液制備
取待測樣品適量,洗凈,用不銹鋼刀將可食部分切成適當(dāng)小塊充分混勻后,按四分法取樣。稱取100g鮮樣加入等重量的水,放入組織搗碎機(jī)中搗成1:1勻漿,有些材料勻漿比例可適當(dāng)調(diào)整,多汁果蔬類可直接搗漿。稱取勻漿25.0g或50.0g(相當(dāng)于樣品12.5g或25.0g)放入150mL燒杯中,含有機(jī)酸較多的材料加0.5~2.0g粉狀CaCO3調(diào)至中性(廣泛試紙檢試)。用水將樣液全部轉(zhuǎn)入250mL容量瓶中,并調(diào)整體積約為200mL。置80±2℃水浴 保溫30 min,期間搖動(dòng)數(shù)次,取出加入乙酸鋅溶液及亞鐵氰化鉀溶液各2~5mL,冷卻至室溫后,用水定容,過濾備用。
取已經(jīng)制備的待測液100mL于200mL容量瓶中,加6 mol/L HCl 10mL。在80±2℃水浴 加熱10min,放入冷水槽中冷卻后,加甲基紅指示劑二滴用6 mol/L及1mol/L NaOH溶液中和,用水定容。
(三)可溶性總糖測定
1.費(fèi)林試劑的標(biāo)定:取費(fèi)林試劑甲、乙各5.00mL或在測定前先等體積混合后取10.00mL混合液于250mL錐形瓶中,放入玻璃珠4~5粒,先加入比預(yù)測(預(yù)測見2)僅少0.5mL的1mg/mL轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)液。將此混合液置1000W電爐上加熱,使其在2min左右沸騰,準(zhǔn)確煮沸2 min,此時(shí)不離開電爐,立即加入0.5%亞甲基藍(lán)指示劑2~3滴,并繼續(xù)以每4~5 S的滴速滴加標(biāo)準(zhǔn)糖液,直至二價(jià)銅離子完全被還原生成磚紅色氧化亞銅沉淀,溶液藍(lán)色褪盡為終點(diǎn)。用準(zhǔn)確滴定標(biāo)準(zhǔn)糖液的毫升數(shù)V1 ,乘以標(biāo)準(zhǔn)糖液濃度[mg/mL],即得10mL費(fèi)林試劑所相當(dāng)?shù)奶堑暮量藬?shù)。
2.預(yù)測:取費(fèi)林試劑甲、乙各5.00mL或10.00mL混合液于250mL錐形瓶中,由滴定管 加入待測糖液約15mL,在電爐上加熱至沸騰,約沸騰15 S后迅速滴加待測糖液,至呈現(xiàn)極輕微的藍(lán)色為止,此時(shí)加入0.5%亞甲基藍(lán)指示劑2~3滴,繼續(xù)滴加待測糖液,直至溶液藍(lán)色褪盡為止,記下待測糖液的用量V2 (毫升數(shù))。
3.準(zhǔn)確測定:取費(fèi)林試劑甲、乙各5.00mL或10.00mL混合液加入錐形瓶中,由滴定管 加入比預(yù)測僅少0.5mL的待測糖液,并補(bǔ)加V1 -V2 毫升水(標(biāo)準(zhǔn)費(fèi)林試劑所消耗的標(biāo)準(zhǔn)糖液毫升數(shù)V1 減去預(yù)測消耗的待測糖液毫升數(shù)V2 ,即為應(yīng)補(bǔ)加水的毫升數(shù)),使其與標(biāo)定費(fèi)林試劑時(shí)的反應(yīng)體積一致。以下按費(fèi)林試劑標(biāo)定同樣操作,繼續(xù)滴至終點(diǎn)。前后沸騰時(shí)間須在3 min分鐘左右。待測糖液消耗量應(yīng)控制在15~50mL范圍內(nèi),不能大于標(biāo)定費(fèi)林試劑所用標(biāo)準(zhǔn)糖液體積V1 ,否則應(yīng)增減稱樣量重新制備待測液。同法平行操作3次,取平均值。
(四)結(jié)果計(jì)算
可溶性總糖(%,以轉(zhuǎn)化糖計(jì))=(G/V)×(A/W)×(250/1000)×100
式中: W——樣品稱重(g)
G——10mL費(fèi)林試劑相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)化糖(mg)
V——準(zhǔn)確滴定時(shí)所用待測液的體積(mL)
A——稀釋倍數(shù)
250——定容體積(mL)
1000——由毫克換算為克
編輯:songjiajie2010

 
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