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【實用篇】生產(chǎn)環(huán)境和產(chǎn)品接觸面的采樣及檢驗方法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-07-05
核心提示: 生產(chǎn)環(huán)境和產(chǎn)品接觸面的采樣及檢驗方法!1目的檢測生產(chǎn)車間操作人員手部、與食品有直接接觸面的機械設(shè)備的微生物指標(biāo),生產(chǎn)
 生產(chǎn)環(huán)境和產(chǎn)品接觸面的采樣及檢驗方法!

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目的

檢測生產(chǎn)車間操作人員手部、與食品有直接接觸面的機械設(shè)備的微生物指標(biāo),生產(chǎn)區(qū)域環(huán)境當(dāng)中病原微生物的監(jiān)控,達(dá)到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn),以控制食品成品的質(zhì)量。

 

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參照標(biāo)準(zhǔn)

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB 15979-2002、《HACCP原理與實施》、出入境檢驗檢疫局二000四年《出入食品微生物檢驗培訓(xùn)教材》中《出入食品生產(chǎn)廠衛(wèi)生細(xì)菌檢驗方法》、日本東京冷凍食品檢驗方法。

 

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采樣與檢測方法

3.1 工作臺(機械器具)表面與工人手表面采樣與測試方法:
3.1.1 樣品采集:
(1)取樣頻率:
①車間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時,在加工前進行擦拭檢驗,以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情況。
②全廠統(tǒng)一放長假后,車間生產(chǎn)前,進行全面擦拭檢驗。
③產(chǎn)品檢驗結(jié)果超內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)時,應(yīng)及時對車間可疑處進行擦拭,如有檢驗不合格點,整改后再進行擦拭檢驗。
④實驗新產(chǎn)品,按客戶規(guī)定擦拭頻率擦拭檢驗。
⑤對工作表面消毒產(chǎn)生懷疑時,進行擦拭檢驗。
⑥正常生產(chǎn)狀態(tài)的擦拭,每周一次。
(2)采樣方法:
①工作臺(機械器具):用浸有滅菌生理鹽水的棉簽在被檢物體表面(取與食品直接接觸或有一定影響的表面)取25c㎡的面積,在其內(nèi)涂抹10次,然后剪去手接觸部分棉棒,將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。
②工人手:被檢人五指并攏,用浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面,從指尖到指端來回涂擦10次,然后剪去手接觸部分棉棒,將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。

a.手內(nèi)側(cè)涂抹 

b.手外側(cè)涂抹

c.手指間涂抹     

d.將棉簽浸入裝有無菌水的試管中

(3)采樣注意事項:

擦拭時棉簽要隨時轉(zhuǎn)動,保證擦拭的準(zhǔn)確性。對每個擦拭點應(yīng)詳細(xì)記錄所在分場的具體位置、擦拭時間及所擦拭環(huán)節(jié)的消毒時間。
3.1.2 菌落總數(shù)·大腸菌群的檢測培養(yǎng):
樣液稀釋:將放有棉棒的試管充分振搖。此液為1:10稀釋液。如污染嚴(yán)重,可十倍遞增稀釋,吸取1mL 1:10樣液加9mL無菌生理鹽水中,混勻,此液為1:100稀釋液。
3.1.2.1 菌落總數(shù):(按GB 4789.2的規(guī)定進行)
(1)以無菌操作,選擇1~2個稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內(nèi),每個稀釋度做兩個平皿(平行樣),將已融化冷至45℃左右的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿,每皿約15~20mL,充分混合。
(2)待瓊脂凝固后,將平皿翻轉(zhuǎn),置36℃±1℃ 培養(yǎng)48 h后計數(shù)。
(3)結(jié)果報告:報告每25c㎡食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)。
3.1.2.2 大腸菌群(按GB 4789.3的規(guī)定進行)
(1)平板法:
a)以無菌操作,選擇1~2個稀釋度各取1mL樣液分別注入到無菌平皿內(nèi),每個稀釋度做兩個平皿(平行樣),將VRBA培養(yǎng)基傾入平皿,每皿約15~20mL,充分混合。待瓊脂凝固后,再覆蓋一層培養(yǎng)基,約3-5 mL。
b)待瓊脂凝固后,將平皿翻轉(zhuǎn),置36℃±1℃培養(yǎng)24h后計數(shù)。
c)證實實驗:從VRBA平板上挑取典型和可疑菌落接種BGLB進行證實實驗。
d)結(jié)果計算:經(jīng)最后證實為大腸菌群陽性的試管比例乘以平板上出現(xiàn)的典型和可疑菌落個數(shù)乘以稀釋倍數(shù)得出。
e)結(jié)果報告:報告每25c㎡食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)。
(2)MPN法:
a)以無菌操作,選擇3個稀釋度各取1mL樣液分別接種到LST肉湯培養(yǎng)基中,每個稀釋度接種三管。
b)置LST肉湯管于36℃±1℃培養(yǎng)48±2h。記錄所有LST肉湯管的產(chǎn)氣管數(shù)。
c)選擇產(chǎn)氣渾濁的發(fā)酵管接種BGLB進行復(fù)發(fā)酵實驗。
d)結(jié)果報告:按BGLB肉湯管產(chǎn)氣管數(shù),查MPN表報告每25c㎡食品接觸面中或每只手的大腸菌群值。
3.1.2.3 金黃色葡萄球菌檢測(按GB4789.10的規(guī)定進行)
(1)定性檢測
a)取1mL稀釋液注入滅菌的平皿內(nèi),傾注15-20mL的B-P培養(yǎng)基,(或是吸取0.1稀釋液,用L棒涂布于表面干燥的B-P瓊脂平板),放進36±1℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2小時。
b)從每個平板上至少挑取1個可疑金黃色葡萄球菌的菌落作血漿凝固酶實驗。
c)結(jié)果報告:B-P瓊脂平板的可疑菌落作血漿凝固酶實驗為陽性,即報告手(工器具)上有金黃色葡萄球菌存在。
(2)定量檢測
a)以無菌操作,選擇3個稀釋度各取1mL樣液分別接種到含10﹪氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基中,每個稀釋度接種三管。
b)置肉湯管于36±1℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48小時。劃線接種于表面干燥的B-P瓊脂平板,置36℃±1℃ 培養(yǎng)45~48小時。
c)從B-P瓊脂平板上,挑取典型或可疑金黃色葡萄球菌菌落接種肉湯培養(yǎng)基,36℃±1℃培養(yǎng)20~24小時。
d)取肉湯培養(yǎng)物做血漿凝固酶試驗,記錄試驗結(jié)果。
e)報告結(jié)果:根據(jù)凝固酶試驗結(jié)果,查MPN表報告每25c㎡食品接觸面中或每只手的金黃色葡萄球菌值。

 

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關(guān)于培養(yǎng)基的選擇

一次性衛(wèi)生用品生產(chǎn)企業(yè)使用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基檢測涂抹點的菌落總數(shù),使用乳糖膽鹽培養(yǎng)基檢測采樣點的大腸菌群。針對檢測目的不同食品企業(yè)可以選擇不同的培養(yǎng)基,比如檢測消毒處理后或生產(chǎn)過程中受污染的程度,可以選擇平板計數(shù)瓊脂檢測菌落總數(shù);檢測大腸菌群可以選擇乳糖膽鹽培養(yǎng)基。涂抹前需準(zhǔn)備好培養(yǎng)基。

 

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關(guān)于采樣點的選擇

選擇食品接觸面,食品接觸面是指生產(chǎn)過程中與所生產(chǎn)的食品直接接觸的設(shè)備、工具器具、人、水、空氣、包材等;或直接接觸的門把手、電源開關(guān)等。

 

3.2 工廠環(huán)境中病原體的檢測計劃與方法:
檢測計劃:為了保證食品安全,工廠應(yīng)該對生產(chǎn)環(huán)境中的病原微生物進行檢測和評估,檢測項目包括李斯特菌,沙門氏菌等病原體微生物,化驗室應(yīng)該按照一定的計劃對生產(chǎn)場所環(huán)境中的病原體進行檢測,其中包括地面、下水道、排水溝、墻壁、天花板、設(shè)備框架、運輸?shù)闹Ъ埽洳匮b置、速凍機、傳送帶、設(shè)備的螺絲、維修工具等部位。當(dāng)某個點檢測到病員微生物時,應(yīng)該對環(huán)境中的相似點加大檢測頻率;在把所有的預(yù)定點檢測完后,應(yīng)該對環(huán)境中的病原微生物的存在狀況進行全面評估,在下一次環(huán)境檢測循環(huán)過程中加強檢測容易出現(xiàn)病原體的環(huán)境點,達(dá)到持續(xù)改進的目的。
檢測頻率: 每月兩次,每次每個區(qū)域至少選取5個檢測點,分別進行檢測。
3.2.1 環(huán)境李斯特菌的檢測方法(3MTM PetrifilmTM 環(huán)境李斯特菌的測試片)
3.2.1.1 用涂抹棒,海綿或者其他采樣設(shè)備收集環(huán)境樣本。
3.2.1.2 將收集的樣本添加10毫升滅菌的緩沖蛋白胨水,將樣本與緩沖蛋白胨混合1分鐘,將樣品置于室溫(20-30℃)1小時,最久不超過1.5小時,以修復(fù)損傷的李斯特菌。
3.2.1.3 將測試片放在平坦處,掀起上層膜。
3.2.1.4 用移液器垂直滴加3毫升樣品到下層膜中央,將上層膜緩慢蓋下,以免產(chǎn)生氣泡。
3.2.1.5 輕輕將塑料壓板放在位于接種區(qū)上層膜上,不要壓,扭轉(zhuǎn)或者滑動壓板。提起壓板等至少十分鐘,以使膠體凝固。
3.2.1.6 將測試片透明面朝上,可疊放至十片,在37℃±1℃培養(yǎng)26-30小時,可以用標(biāo)準(zhǔn)菌落記數(shù)器或者其他光學(xué)放大器判讀,不要記數(shù)圓形輪廓上的菌落,因為他們不受選擇性培養(yǎng)基的影響。
3.2.1.7 對于定性檢測,根據(jù)紫紅色菌落是否存在,結(jié)果記為檢出或者未檢出。
3.2.2 環(huán)境中沙門氏菌的檢測方法
3.2.2.1 采樣地點: 選取采樣點時因盡量選取微生物容易滋生的地方。
3.2.2.2 操作步驟
3.2.2.2.1 采樣應(yīng)在生產(chǎn)開始后進行,用已浸潤過的棉拭在選定的被測表面旋轉(zhuǎn)涂抹約100c㎡的面積,然后將棉拭放回涂抹試管并蓋緊。        

3.3.2.2.2 將樣品帶回實驗室,每5個點混合成一個樣品,登記編號,按照GB 4789.4-2016標(biāo)準(zhǔn)及時檢測,若有陽性結(jié)果出現(xiàn),應(yīng)逐步對所混合的每個點分別檢測。

編輯:songjiajie2010

 
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關(guān)鍵詞: 檢驗
 

 
 
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