1、微生物樣品前期準備

對于高通量測序的微生物樣品前期一定要注意取樣的及時性以及低溫性，樣本質(zhì)量是影響實驗結(jié)果的最關(guān)鍵因素，因此用于研究的實驗樣本，在采集、貯存、運輸和制備的過程中盡可能地做到迅速，最大限度的縮短從樣本采集到實驗的時間。且在所取樣本離體后條件允許應(yīng)應(yīng)立即投入液氮中速凍至少1小時，之后保存于-80℃冰箱或者干冰中，確保在實驗操作前樣品始終處于-80℃，以避免DNA/RNA的降解。

2、真菌微生物取樣建議（大型真菌）

A.從菌體上取下生長旺盛的組織，用無菌水沖洗干凈，再使用75%乙醇沖洗，用吸水紙吸干樣品表面；

B.如果組織體積較大，應(yīng)盡量將組織剪切成長寬高均≤0.5cm的小塊；

C.將處理好的組織樣本保存于2mL或更大體積的旋蓋凍存管中或者用準備好的錫箔紙包裹組織；

D.迅速置于液氮中冷凍1小時，然后轉(zhuǎn)移至-80℃或液氮中長期保存；

E.運送方式：將樣品管用封口膜封口，再放置于50mL離心管中或封口袋中，里面添加棉花等固定（切勿在50mL管內(nèi)或其他支撐物內(nèi)加入液氮等危險品），干冰運輸。

3、絲狀真菌取樣建議（平板培養(yǎng)）

A.根據(jù)絲狀真菌的生長周期，選取最活躍時期進行菌體收集；

B.無菌操作，將平板內(nèi)真菌菌絲刮取于無菌的離心管內(nèi)；

C.取樣后立即將菌體于液氮中冷凍1h，然后轉(zhuǎn)移至-80℃或液氮中長期保存；

D.運輸方式：將樣品管用封口膜封口，再放置于50mL離心管中或封口袋中，里面添加棉花等固定（切勿在50mL管內(nèi)或其他支撐物內(nèi)加入液氮等危險品），干冰運輸。

4、細菌基因組取樣建議

A.顯微鏡下觀察細菌生長狀態(tài)，收集對數(shù)期的細菌；

B.將適量體積菌液轉(zhuǎn)移至2mL旋蓋尖底離心管中，室溫下14000×離心1min；

C.棄盡培養(yǎng)基，將細菌沉淀迅速置于液氮中冷凍1小時，然后轉(zhuǎn)移至-80℃或液氮中長期保存；

D.運輸方式：將樣品管用封口膜封口，再放置于50mL離心管中或封口袋中，里面添加棉花等固定（切勿在50mL管內(nèi)或其他支撐物內(nèi)加入液氮等危險品），干冰運輸。

5、注意事項劃重點

Tip1：送樣優(yōu)先選擇新鮮采集的樣本；其次才是凍存樣本；

Tip2：用于DNA樣品制備實驗的組織樣品處理及切割過程應(yīng)在冰上盡可能快速進行，時間過長會導(dǎo)致樣品DNA降解，影響測序結(jié)果；

Tip3：反復(fù)凍融和長期保存的組織有更多的降解風(fēng)險，所以應(yīng)一次性準備好樣品，避免組織或菌體反復(fù)凍融。