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大腸桿菌檢測的新方法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2018-08-09
核心提示:1 氣相色譜(GC)和高效液相色譜法(HPLC)氣相色譜法主要是將大腸桿菌經(jīng)過一系列衍生化的前處理后,為接下來的分析研究提供盡可
 
1 氣相色譜(GC)和高效液相色譜法(HPLC)
氣相色譜法主要是將大腸桿菌經(jīng)過一系列衍生化的前處理后,為接下來的分析研究提供盡可能多的化學(xué)組分。大腸桿菌的污染程度可以用頂空氣相色譜法來分析,其原理是利用食品密封系統(tǒng)頂部的微生物代謝產(chǎn)物CO2對微生物進(jìn)行分析。這種方法對食品質(zhì)量安全檢測有重大意義。與上述傳統(tǒng)技術(shù)相比,此種方法具有檢測速度快、靈敏度高的優(yōu)點。高效液相色譜法(HPLC)主要是根據(jù)離子配對反相層析的原理來分析核酸。HPLC主要是針對DNA片段分離。長鏈DNA所攜帶的磷酸基團(tuán)比較多,因此會有更多的TEAA與之相融合,其在柱內(nèi)停留的時間增加。因為乙腈具有親水性,可以通過其而將DNA分離,在具備一定的變性溫度下,可以通過圖譜顯示明顯的吸收峰。該技術(shù)具有準(zhǔn)確度高、靈敏度高、成本低等優(yōu)點,可大大提高工作效率。


2 ATP生物發(fā)光技術(shù)
ATP生物發(fā)光技術(shù)是近些年來發(fā)展較快的微生物快速檢測方法。ATP是活細(xì)胞中最普遍的能量代謝產(chǎn)物,為細(xì)胞提供各種生理活動所需的能量,而且其在生物體內(nèi)含量維持在一定的范圍內(nèi)。ATP含量檢測的一種方法是熒光光度法,生物發(fā)光是活細(xì)胞在熒光素酶催化下發(fā)出的熒光。目前使用的熒光素酶主要來源于北美的螢火蟲,相對分子質(zhì)量為62000的蛋白質(zhì),它可以催化熒光素的氧化反應(yīng),這種反應(yīng)的終產(chǎn)物不穩(wěn)定,很快分解產(chǎn)生熒光。與傳統(tǒng)檢測方法相比,不同之處在于幾分鐘內(nèi)便可獲得檢測結(jié)果,而且熒光光度計是便攜式的,使用非常方便,適用于現(xiàn)場檢測,這種技術(shù)可以用于檢測微小的污染物水平以及食品加工設(shè)備及其表面的清潔程度的檢測。


3 PCR檢測技術(shù)
聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)即PCR(polymerase chain reaction),該技術(shù)是在1971年首先被Kleppe等提出,1985年才作為一種檢測方法獲得認(rèn)可。PCR檢測技術(shù)是一種聚合酶鏈反應(yīng),其采用變性―退火―延伸三個步驟使DNA基因能夠在體外實現(xiàn)解旋解鏈,類似于一種體外增加、復(fù)制形式。理論上可在2h內(nèi)將一個DNA分子擴(kuò)增到106~109倍,采用瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光條帶。


目前PCR技術(shù)廣泛用于生命科學(xué)的許多學(xué)科中。在食品微生物檢測領(lǐng)域,PCR可用于快速檢測食品中的微生物含量。常用的主要有免疫PCR、實時熒光定量PCR、多重PCR、反轉(zhuǎn)錄PCR和實時定量PCR等。史云等建立了用于肉及肉制品中大腸桿菌的兩重PCR檢測方法,但該方法需要較長的時間的樣品純化處理,且對操作人員的專業(yè)知識的要求也較高。


4 生物傳感器檢測技術(shù)
生物傳感器主要是以生物化學(xué)傳感技術(shù)為基礎(chǔ),用抗體、酶、細(xì)胞等作為識別元件,并與信號轉(zhuǎn)換器和電子測量儀聯(lián)合構(gòu)成的一種分析工具。目前已經(jīng)成熟的商品化的傳感器有免疫傳感器、酶傳感器、DNA雜交傳感器、微生物傳感器、分子印跡傳感器等。生物傳感器具有諸多優(yōu)點,如高靈敏度、高選擇性、較好的穩(wěn)定性、低成本、且能在復(fù)雜的體系中快速在線監(jiān)測。現(xiàn)在用于信號傳導(dǎo)的方法有表面聲波傳導(dǎo)、電氣化學(xué)方法和光學(xué)傳導(dǎo)法。用于食品微生物檢測的主要是免疫傳感器和基因傳感器,原理是利用DNA雜交和抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行檢測,再將其轉(zhuǎn)換為光信號或電信號并通過儀器放大輸出。生物傳感器的分子識別元件的載體可采用多種材料,利用較多的是光纖、熒光光度計等。殷涌光等人利用抗體免疫吸附反應(yīng),采用一次抗體――抗原一二次抗體的夾心法將膠體金復(fù)合抗體作為二次抗體大幅度增加質(zhì)量,并延長膠體金復(fù)合抗體與微生物的結(jié)合過程,放大和穩(wěn)定信號,從而顯著提高檢測精度。


5 免疫磁珠技術(shù)(IMS)
免疫磁珠技術(shù)是一種大腸桿菌的分離技術(shù)。其原理是以磁珠為抗體載體,磁珠和大腸桿菌結(jié)合,通過磁力來實現(xiàn)力學(xué)移動進(jìn)而將大腸桿菌進(jìn)行分離。與其他的細(xì)菌分離方法相比,免疫磁珠技術(shù)在很大程度上提高了樣本中病原性副溶血性弧菌的檢測效率。免疫磁珠技術(shù)可以快速地在不同菌種的樣本中處理不同的微生物,該方法可以大幅度地提升檢測效率。


6 自動化儀器
自動免疫測定分析儀誕生于20世紀(jì)70年代。隨著科技的發(fā)展,自動免疫測定分析儀在各領(lǐng)域的應(yīng)用也越來越多,該儀器使用簡單,無太多操作干擾,既省時省力,又大大提高了檢測的精確度和靈敏度。這種自動酶標(biāo)免疫測試系統(tǒng)目前在國內(nèi)外是酶免疫自動化系統(tǒng)中應(yīng)用最為廣泛的一種。但是由于與其配套的試劑昂貴,從而限制了其在基層實驗室的使用。

7 基因芯片技術(shù)
基因芯片技術(shù)(gene chip)是20世紀(jì)90年代興起的生物技術(shù),也叫DNA微陣列(DNA mi―croarray)。采用原位合成(in situ synthesis)或顯微打印方法,將數(shù)以萬計的DNA探針固化在支持物表面,產(chǎn)生二維DNA探針陣列,接著與標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交,通過檢測雜交信號來實現(xiàn)對生物樣品快速、并行、高效地檢測,由于它常用硅芯片作為固相支持物,而且制備中運用了計算機(jī)芯片的制備技術(shù),所以稱為基因芯片技術(shù);蛐酒梢詫κ称分械闹虏【鷮嵭懈咄亢推叫袡z測,一次實驗就可以得出全部檢測結(jié)果。另外整個檢測在很短時間內(nèi)即可得出檢測結(jié)果,且敏感性高,特異性強(qiáng)。但是也有一些問題:目前的基因芯片一般都采用熒光標(biāo)記,因此需要昂貴的芯片制作系統(tǒng)以及激光共聚焦掃描儀,另外操作過程對工作人員要求有很高的專業(yè)素質(zhì)等等。所以基因芯片的制備技術(shù)限制其應(yīng)用而且還需改進(jìn)。


編輯:songjiajie2010

 
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