食品伙伴網(wǎng)注:本方法源自奶牛乳房炎防治技術指南(試行)(農(nóng)醫(yī)發(fā)[20l0]29號)
推薦使用體細胞計數(shù)儀進行乳汁體細胞計數(shù)。
體細胞計數(shù)法有直接計數(shù)法和間接計數(shù)法。直接計數(shù)法中簡便易行的方法是直接用顯微鏡進行體細胞計數(shù)(SCC),間接計數(shù)法就是后面提到的CMT。法。
l主要試劑和材料
美藍染色液:美藍乙醇飽和溶液30mL.(美藍2g,95%乙醇100mL),10%氫氧化鈉溶液0.1mL,蒸餾水100mL,將上列溶液混合搖勻,過濾后備用。二甲苯、95%乙醇。生物顯微鏡、載玻片、l0μL。微量加樣器(或移液槍)等。
2操作方法
2.1涂片制備
涂布:充分搖勻新鮮乳樣,用l0μL微量加樣器吸取中部乳汁l0μL,或用接種環(huán)蘸取等量的乳汁,將乳樣滴于玻片一端中側(cè),仔細涂布成約lcm2。面積的乳膜(為便于操作,可在玻片下墊襯一張硬紙板,紙板上用毛筆劃數(shù)個面積為lcm2的方格透視)。
干燥、脫脂、固定:涂好乳膜的玻片于37℃溫箱中干燥,然后用二甲苯脫脂5min,再置95%乙醇中固定5~10min。
染色:玻片干燥后,用美藍染色液染色5min。水洗,再用95%乙醇脫色數(shù)分鐘,水洗干燥后鏡檢。
鏡檢及計數(shù):在生物顯微鏡油鏡下觀察(最好用l0×目鏡,其視野直徑要求為0.016),計數(shù)100個視野內(nèi)的細胞數(shù),然后用下式計算:SCC=100xN/Лr2
視野面積Лr2=3.1416×(0.016/2)2。=0.0002cm2,
顯微鏡系數(shù)N=I/0.0002×100=500,000
SCC=系數(shù)×每個視野的細胞平均數(shù)(即細胞總數(shù)÷100):細胞數(shù)/mL乳。
3判定標準
隨著國際和國內(nèi)乳品行業(yè)的接軌,國內(nèi)標準也在提高,一般以每毫升牛奶中含20萬個細胞為亞臨床乳房炎的臨界值(+);超過該值為陽性,低于該值則正常。