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微生物實驗室培養(yǎng)基的使用說明指引(二)制備

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-04-25  來源:上海撫生實業(yè)有限公司
核心提示:培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的,含天然或合成成分,用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實驗

培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的,含天然或合成成分,用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環(huán)節(jié),培養(yǎng)基自身質量的優(yōu)劣、保存是否得當、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結果的準確性。

三、培養(yǎng)基的制備

1.培養(yǎng)基用水

培養(yǎng)基制備用水應使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質的水,最好不使用離子交換器生產的去離子水。

2.稱量

稱量時要用專用的角匙,避免交叉污染而影響檢驗結果;干粉培養(yǎng)基易吸潮,如有條件,盡量在濕度較低的房間稱取培養(yǎng)基。

3.復水

復水時不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養(yǎng)基中,影響微生物的生長;容器的大小需大于復水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上,避免在加熱溶解過程中,培養(yǎng)基溢出;含有瓊脂粉的培養(yǎng)基,在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘;加熱培養(yǎng)基時一定要進行攪拌,特別是瓊脂類培養(yǎng)基。為避免燒焦和沸騰溢出,對于少量的培養(yǎng)基最好使用沸水浴進行加熱。燒糊的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質被破壞,并可產生有毒物質,如發(fā)現(xiàn)焦化,或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出,該培養(yǎng)基即不能使用,應重新制備。對于瓊脂類培養(yǎng)基進行再融化時應使用沸水浴或流動蒸汽進行加熱,最多只能加熱兩次,第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應棄去。

4.滅菌

一般培養(yǎng)基采用濕熱滅菌,即高壓蒸汽滅菌,通常是121℃ 15min,含糖或特殊培養(yǎng)基,按照國家標準或生產商提供的說明滅菌。已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌,避免微生物生長繁殖而消耗養(yǎng)分,改變培養(yǎng)基的酸堿度。高溫可破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分,還會使瓊脂的凝膠強度下降,因此必須嚴格控制滅菌溫度和時間,并且不可重復滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進行檢定,并定期采用生物指示菌法或化學變色紙片對滅菌效果進行驗證。

5.pH測定

微生物必須在適宜的pH范圍內才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性。培養(yǎng)基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH值,即培養(yǎng)基使用前的pH,并應在25℃溫度下采用精密酸度計進行測量,固體瓊脂培養(yǎng)基應以特殊的膠體表面測量電極進行測量。使用過程中,如果需要調整培養(yǎng)基的pH,應用1mol/LNa0H或 lmol/LHCL調整,注意不可反復調pH,否則會影響培養(yǎng)基的滲透壓。

6.配制好的培養(yǎng)基保存

滅菌以后培養(yǎng)基應該迅速冷卻至所需溫度,避免長時間保存在滅菌鍋內,造成過度滅菌,影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果。所配制的培養(yǎng)基的量,應該是在最長保存期限內正好使用完。含染料的培養(yǎng)基應閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配制的當天未使用完,應于冷藏保存,如果保存時間超過2天,應將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養(yǎng)基如果保存時間超過2個星期,應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)。

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編輯:songjiajie2010

 
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