1.菌株管理及相關概念

標準菌株：即0代菌種，是指從官方菌種保藏機構(gòu)獲得并至少定義到屬或種的水平的菌株。實驗室的標準菌株應有明確來源。

標準儲備菌株：從國內(nèi)或國外菌種保藏機構(gòu)獲得的標準菌株經(jīng)過復活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后，即為標準貯備菌株。

儲存菌株：儲存菌株通常從凍干或超低溫保存的標準儲存菌株進行制備。

工作菌株：標準儲備菌株或儲存菌株經(jīng)繼代培養(yǎng)后得到的菌株。工作菌株不可替代標準菌株。

標準培養(yǎng)物：標準菌株、標準儲備菌株、工作菌株的統(tǒng)稱。

商業(yè)派生菌株：即用型與標準菌株所有相關特性等效的可以溯源的商業(yè)衍生物。常見的有定量工作菌株。

2.標準菌株的獲取

藥品微生物檢驗用的試驗菌應為有明確來源的標準菌株，或使用與標準菌株所有相關特性等效的可以溯源的商業(yè)派生菌株。

標準菌株應來自認可的國內(nèi)或國外菌種保藏機構(gòu)。中國藥典2020版以及國標中涉及的菌株主要來自于兩大菌種保藏中心：中國醫(yī)學細菌保藏管理中心（CMCC）、美國標準菌種保藏中心（ATCC）。

菌株購買前需根據(jù)實驗室檢測需求制定采購計劃，經(jīng)審批后，向認可的國內(nèi)或國外的菌種保藏機構(gòu)購買標準菌株。標準菌株到達實驗室后，菌種管理人應檢查其名稱、數(shù)量以及每一支的完整性，同時將菌種的所有信息填寫記錄（包括菌種名稱、編號、數(shù)量、代數(shù)、來源、接收日期、接收人等），并將其貯存在規(guī)定溫度的冰箱里。

3.標準菌株的復蘇、復壯和保存

標準菌株的復蘇、復壯或培養(yǎng)物的制備應按供應商提供的說明或按已驗證的方法進行。復蘇、復壯應選擇營養(yǎng)成分豐富且全面的培養(yǎng)基（例如：TSA/TSB/NA/NB/SDB/SDA等），一般不使用選擇性較強的培養(yǎng)基；特殊的一些菌株在普通的培養(yǎng)基上生長不好，可能還需添加生長因子。

標準儲備菌株應進行純度和特性確認。純度確認包括：平板劃線查看菌落形態(tài)、革蘭氏染色、顯微鏡觀察菌體形態(tài)等；關鍵特性確認可選擇：特征生化反應確認、試劑盒鑒定、菌種鑒定儀鑒定等。需要注意的是，從開啟、復蘇、復壯到純度和特性的確認，都應做好實驗記錄。

標準儲備菌株保存時，可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中，并分裝于小瓶中，藥典建議采用低溫冷凍干燥、液氮貯存、超低溫冷凍（低于-30℃）等方法保存。低于-70℃或低溫冷凍干燥方法可以延長菌種保存時間。菌種應設專人管理，菌種保藏的地點應采取一定的措施使非管理者不能輕易獲取，例如加鎖保管，雙人保管等。

標準儲備菌株可用于制備每月或每周1次轉(zhuǎn)種的工作菌株。冷凍菌種一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用。

從保藏機構(gòu)獲取的凍干菌種為0代菌種，每轉(zhuǎn)接一次增加一代（1代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，任何形式的轉(zhuǎn)種均被認為傳代一次），工作菌株的傳代次數(shù)應嚴格控制，不得超過5代，以防止過度的傳代增加菌株變異的風險。

4.工作菌株的制備

工作菌株由儲存菌株或標準貯備菌株制備，除此之外，還可以使用可以溯源的商業(yè)派生菌株。標準菌株如果經(jīng)過確認試驗證明已經(jīng)老化、退化、變異、污染等或該菌株已無使用需要時，應及時滅菌銷毀。

5.實驗室菌株管理

菌種必須定期轉(zhuǎn)種傳代，并做純度、特性等實驗室所需關鍵指標的確認，實驗室應建立菌種管理（從標準菌株到工作菌株）的文件和記錄，內(nèi)容包括菌株的申購、進出、收集、貯藏、確認、轉(zhuǎn)種、使用以及銷毀等全過程。每支菌種都應注明其名稱、標準號、接種日期、傳代數(shù)，并記錄菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件、菌種保藏的位置和條件等信息。

有關微生物實驗室菌株管理及使用涉及的相關法規(guī)如下，可供參考：

中國藥典2020版《9203藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導原則》

中國藥典2020版《9204微生物鑒定指導原則》

中國藥典2020版《9205藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)控和控制指導原則》

藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）

CNAS-CL03-A001-2019《能力驗證提供者認可準則在微生物領域的應用說明》

CNAS-CL05-2009《實驗室生物安全認可準則》

GB 4789.28-2013食品安全國家標準 食品微生物學檢驗培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求

GB/T 27405-2008 《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品微生物檢測》

GB 4789.1-2016 食品安全國家標準食品微生物學檢驗 總則

SN/T 1538.1-2016 培養(yǎng)基制備指南 第1部分 實驗室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則

SN/T 1538.2-2016 培養(yǎng)基制備指南 第2部分 培養(yǎng)基性能測試實用指南

SN/T 2660-2010 食品微生物實驗室菌種保藏方法

6.商業(yè)派生菌株

商業(yè)派生菌株是標準菌株的商業(yè)衍生物，最常見的是定量工作菌株。在中國藥典2015版9203指導原則里面有提到“藥品微生物檢驗用的試驗菌應來自認可的國內(nèi)或國外菌種保藏機構(gòu)的標準菌株，或使用與標準菌株所有相關特性等效的可以溯源的商業(yè)派生菌株”，USP<1117>也有關于可以使用合格的商品化菌株的描述“Cultures for use in compendial tests should be acquired from a national culture collection or a qualified secondary supplier”。隨著技術的進步與發(fā)展，微生物實驗室穩(wěn)定、高效的需求，用于質(zhì)控的商業(yè)化定量工作菌株的廣泛應用定是必然趨勢。（現(xiàn)以最新標準為準）

商業(yè)派生菌株要求相關特性與標準菌株等效，除此之外，還有關鍵一點就是“可以溯源”。微生物"溯源"通常包含兩層意思，一是指程序、途徑合法有序，來源和去向清晰可控；另外是技術層面的佐證，比如株水平的鑒定識別等。這兩個層面互為補充支撐，以保證菌種準確無誤、合法有效。

選擇使用商業(yè)派生菌株時，建議做好實驗室檢測結(jié)果與標準菌株的差異分析和風險評估。綜合評估之后，選擇合適的商業(yè)派生菌株。