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小鼠骨髓細胞染色體標本制作與觀察

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-08-30  來源:實驗室資訊網(wǎng)
核心提示:  實驗?zāi)康恼莆談游锕撬枞旧w標本制備基本過程,了解操作步驟的原理實驗原理小鼠骨髓細胞中的造血干細胞是生成各種血細胞和原
  
  
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掌握動物骨髓染色體標本制備基本過程,了解操作步驟的原理
 
實驗原理
小鼠骨髓細胞中的造血干細胞是生成各種血細胞和原始細胞,具有高度的分裂能力,本實驗采用這一材料,通過前處理,低滲,固定,制片,染色等步驟制得染色體標本,可觀察到許多處于分裂中期的染色體,可以進行染色體組型分析。
實驗原理
制備方法包括以下幾個要點: 
1. 用一定劑量的秋水仙素破壞紡錘絲的形成,使細胞分裂停滯在中期, 使中期染色體停留在赤道面處
2. 用低滲法使將細胞膨脹, 以至于在滴片時細胞被脹破, 使細胞的染色體鋪展到載玻片上
3. 空氣干燥法可使使細胞的染色體在載片上展平, 經(jīng)Giemsa染色后便可觀察到染色體的顯微圖象 
 
 實驗用品
1.材料:小白鼠 
2.器具:注射器(1ml,5ml) 剪刀 鑷子 玻璃吸管 10ml刻度的離心管 離心機 載玻片 蓋玻片 顯微鏡 濾紙 擦鏡紙 紗布 恒溫水浴鍋 
3.藥品:0.01%秋水仙素 0.075MKCl 固定液(甲醇:冰醋酸=3:1) 2%檸檬酸鈉 改良石炭酸品紅
實驗步驟
預(yù)處理→取股骨→沖洗骨髓→離心→低滲→離心→固定→離心→滴片→染色→觀察 
 
1.預(yù)處理:實驗前2.5-3小時,按每克體重注射0.02ml,給小白鼠腹腔注射秋水仙素。 
2.取股骨:斷頸處死小鼠后,剔去肌肉組織,洗凈
3.沖洗骨髓:剪去兩端的股骨頭,吸取 10ml 2%檸檬酸鈉,注射 器針頭插入股骨一端,反復(fù)沖洗兩根股骨,洗液收集到10ml的離心管中
4 .離心: 1000r/min 離心10 min ,棄上清
5 .低滲:加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低滲30 min ,中間(約15 min )再吹散一次,使細胞分散,懸浮于溶液中 
6.離心:1000r/min離心10 min,棄上清
7.固定:沉淀加8ml固定液,并用吸管輕 輕吹勻,進行固定,中間(約15 min )再吹散一次
 實驗步驟
8. 離心: 1000r/min 離心10 min ,留1 ml 左右上清,輕輕吹打成細胞懸液
9. 滴片:用吸管吸取細胞懸液,高度30-40 cm,滴在預(yù)冷的載玻片上,在酒精燈火焰上微微加熱,室溫晾干 
10. 染色:改良石炭酸品紅染色10-20 min
11. 觀察:低倍———高倍
 
編輯:songjiajie2010

 
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