亚洲成aⅴ人在线观看_亚洲欧美日韩综合一区在线观看_国产无码电影一区二区三区_国语精品91自产拍在线观看二区

食品伙伴網(wǎng)服務(wù)號

血細胞的分離實驗技術(shù)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-07-24  來源:實驗室資訊網(wǎng)
核心提示:采血(一)材料與試劑1.抗凝劑(1)肝素:肝素是含硫酸基的粘多糖,常用其鈉鹽或鉀鹽,它能阻止凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶,進而抑制
采血 
 
(一)材料與試劑 
1.抗凝劑
(1)肝素:肝素是含硫酸基的粘多糖,常用其鈉鹽或鉀鹽,它能阻止凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶,進而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白,從而阻止血液凝固。常用的肝素溶液濃度為1 000U/ml,市售肝素多為100U~126U/mg。
(2)乙二胺四乙酸(EDTA):是一種螯合劑。用生理鹽水配制成4%的溶液備用。
(3)阿氏液(Alsever液),配方如下:
枸櫞酸鈉(Na3 C6 H5 O7 ·5H2 O) 0.80g
枸櫞酸 0.0325g
葡萄糖 2.05g
氯化鈉 0.42g
H2 O 加至 100.00ml
混勻溶解后,114.3℃高壓蒸汽滅菌10min備用。
阿氏液中既含有枸櫞酸鈉抗凝劑,又含有細胞生存的營養(yǎng),所以它既可做抗凝劑,又可做血細胞的保存液。
2.針頭 根據(jù)不同動物和采血部位,采用不同型號的針頭,用前必須滅菌或消毒。
3.采血容器 注射器或三角瓶等。
4.采血動物。
 
(二)操作方法 
1.采血法 各種動物采血方法不一。馬、牛、羊等大動物一般從頸靜脈采血,豬從頸靜脈、前腔靜脈或耳靜脈采血,家禽由翼下靜脈或心臟采血,兔由心臟或耳靜脈采血,犬由頸靜脈或四肢靜脈采血,豚鼠由心臟采血,小白鼠則可斷尾或剪斷腋下血管或剪斷眼球采血。
2.抗凝 采集血液最關(guān)鍵的問題是抗凝,采用什么方法進行抗凝,則根據(jù)實驗的要求和條件而定。最常用的方法如下:
(1)肝素抗凝:采血時,使每ml血液含15U~20U肝素即可。計算采集的血液量,按1 000U/ml的量加入肝素,直接放入采血容器中,采血時,邊采血邊輕輕搖動,使抗凝劑和血液混勻。對于采少量的血液或小動物采血,可直接用注射器抽取一定量的肝素液,再采血直接抗凝。
(2)EDTA抗凝:采血前,用滅菌生理鹽水將EDTA配制成4%溶液,然后按預(yù)采血液的量,以每ml血液加入1mg~2mg的EDTA的液體量于采血容器內(nèi)。采血,并不斷搖動采血容器,使之混勻。
(3)玻璃珠法:預(yù)先將適量的玻璃珠(根據(jù)采血量多少而定)清洗后,裝入采血容器中,滅菌后備用。采血過程中,邊采邊搖采血瓶,以使小玻璃珠在血液中滾動,以機械地除去纖維蛋白,使血液不能凝固。本法雖較麻煩,但對淋巴細胞的活性影響最小,且可減少血小板的混雜。
(4)阿氏液采血:以阿氏液和采血量以1︰1比例采集血液,邊采邊輕輕搖動采血瓶,使之混勻。用阿氏液采血,除了抗凝外,多用于紅細胞的保存。一般在4℃條件下,阿氏液中保存的紅細胞2周其活性和特性不變。
 
紅細胞的分離技術(shù) 
(一)材料與試劑 
1.肝素等抗凝劑
2.3%明膠液 取明膠3g,溶于0.9%滅菌鹽水100ml中,114.3℃滅菌10min,冷卻后4℃冰箱保存。臨用時,37℃預(yù)熱10min。
3.阿氏液
 
(二)操作方法 
1.采血抗凝,即為紅細胞。由于紅細胞與白細胞的比例相差懸殊,一般白細胞混雜在其中,忽略不計。
2.根據(jù)紅細胞的用途,可做進一步的處理。如計算紅細胞,可直接稀釋計數(shù)。如需做補體結(jié)合反應(yīng),或其它溶紅細胞反應(yīng),則需將紅細胞進行充分的清洗,以除去附著在紅細胞膜表面的血漿。一般用等滲的稀釋液連續(xù)清洗,2 000r/min離心10min,重復(fù)3~4次。
3.如需儲藏備用,則以阿氏液做抗凝劑采血,混勻后置4℃冰箱保存,可保存2周,其活性尚可。
 
編輯:songjiajie2010

 
分享:
關(guān)鍵詞: 血細胞 分離實驗技術(shù)
 

 
 
推薦圖文
推薦檢驗技術(shù)
點擊排行
檢驗技術(shù)
 
 
Processed in 0.085 second(s), 13 queries, Memory 0.9 M