一、霉菌和酵母菌介紹:
霉菌和酵母菌及其檢驗酵母菌是真菌中的一大類,通常是單細胞,呈圓形,卵圓形、臘腸形或桿狀。
霉菌也是真菌,能夠形成疏松的絨毛狀的菌絲體的真菌稱為霉菌。
霉菌和酵母廣泛分布于自然界并可作為食品中正常菌相的一部分。長期以來,人們利用某些霉菌和酵母加工一些食品,如用霉菌加工干酪和肉,使其味道鮮美;還可利用霉菌和酵母釀酒、制醬;食品、化學、醫(yī)藥等工業(yè)都少不了霉菌和酵母。但在某些情況下,霉菌和酵母也可造成中腐敗變質(zhì)。由于它們生長緩慢和競爭能力不強,故常常在不適于細菌生長的食品中出現(xiàn),這些食品是pH低、濕度低、含鹽和含糖高的食品、低溫貯藏的食品,含有抗菌素的食品等 。由于霉菌和酵母能抵抗熱、冷凍,以及抗菌素和輻照等貯藏及保藏技術(shù),它們能轉(zhuǎn)換某些不利于細菌的物質(zhì),而促進致病細菌的生長;有些霉菌能夠合成有毒代謝產(chǎn)物-霉菌毒素。霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味。例如,酵母在新鮮的和加工的食品中繁殖,可使食品發(fā)生難聞的異味,它還可以使液體發(fā)生混濁,產(chǎn)生氣泡,形成薄膜,改變顏色及散發(fā)不正常的氣味等 。因此霉菌和酵母也作為評價食品衛(wèi)生質(zhì)量的指示菌,并以霉菌和酵母計數(shù)來制定食品被污染的程度。目前已有若干個國家制訂了某些食品的霉菌和酵母限量標準。我國已制訂了一些食品中霉菌和酵母的限量標準。
二、檢驗方法:
霉菌和酵母的計數(shù)方法,與菌落總數(shù)的測定方法基本相似。主要步驟為:
將樣品制作成10倍梯度的稀釋液,選擇3個合適的稀釋度,吸取1mL于平皿,傾注培養(yǎng)基后,培養(yǎng)觀察,計數(shù)。
對霉菌的計數(shù),還可以采用顯微鏡直接鏡檢計數(shù)的方法。
具體檢測標準參見:
GB4789.15-94,《中華人民共和國國家標準 食品衛(wèi)生微生物檢驗 霉菌和酵母計數(shù)》
三、說明:
1.樣品的處理。為了準確測定霉菌和酵母數(shù),真實反映被檢食品的衛(wèi)生質(zhì)量,首先應(yīng)注意樣品的代表性。對大的固體食品樣品,要用滅菌刀或鑷子從不同部位采取試驗材料,再混合磨碎。如樣品不太大,最好把全部樣品放到滅菌均質(zhì)器杯內(nèi)攪拌2min。液體或半固體樣品可用迅速顛倒容器25次來混勻。
2.樣品的稀釋:為了減少櫚稀釋倍數(shù)的誤差,在連續(xù)遞增稀釋時,每一稀釋度應(yīng)更換一根吸管。在稀釋過程中,為了使霉菌的孢子充分散開,需用滅菌吸管反復吹吸50次。
3.培養(yǎng)基的選擇:在霉菌和酵母計數(shù)中,主要使用以下幾種選擇性培養(yǎng)基。
馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基(PDA):霉菌和酵母在PDA培養(yǎng)基上生長良好。用PDA作平板計數(shù)時,必項加入抗菌素以抑制細菌。
孟加拉紅(虎紅)培養(yǎng)基:該培養(yǎng)基中的孟加拉紅和抗菌素具有抑制細菌的作用。孟加拉紅還可抑制霉菌菌落的蔓延生長。在菌落背面由孟加拉紅產(chǎn)生的紅色有助于霉菌和酵母菌落的計數(shù)。
高鹽察氏培養(yǎng)基:糧食和食品中常見的曲霉和青霉在該培養(yǎng)基上分離效果良好,它具有抑制細菌和減緩生長速度快的毛霉科菌種的作用。
4.傾注培養(yǎng)。每個樣品應(yīng)選擇3個適宜的稀釋度,每個稀釋度傾注2個平皿。培養(yǎng)基熔化后冷卻至45℃,立即傾注并旋轉(zhuǎn)混勻,先向一個方向旋轉(zhuǎn),再轉(zhuǎn)向相反方向,充分混合均勻。培養(yǎng)基凝固后,把平皿翻過來放溫箱培養(yǎng)。大多數(shù)霉菌和酵母在25-30℃的情況下生長良好,因此培養(yǎng)溫度25~28℃。培養(yǎng)3d后開始觀察菌落生長情況,共培養(yǎng)5d觀察記錄結(jié)果。
5.菌落計數(shù)及報告:選取菌落數(shù)10~150之間的平板進行計數(shù)。一個稀釋度使用兩個平板,取兩個平板菌落數(shù)的平均值,乘以稀釋倍數(shù)報告。固體檢樣以g為單位報告,液體檢樣以mL 單位報告。關(guān)于稀釋倍數(shù)的選擇可參考細菌菌落總數(shù)測定。
6.霉菌直接鏡檢計數(shù)法:對霉菌計數(shù),可以采用直接鏡檢的方法進行計數(shù)。
在顯微鏡下,霉菌菌絲具有如下特征:
平行壁:霉菌菌絲呈管狀,多數(shù)情況下,整個菌絲的直徑是一致的。因此在顯微鏡下菌絲壁看起來象兩條平行的線。這是區(qū)別霉菌菌絲和其他纖維時最有用的特征之一。
橫隔:許多霉菌的菌絲具有橫隔,毛霉、根霉等少數(shù)霉菌的菌絲沒有橫隔。
菌絲內(nèi)呈粒狀:薄壁、呈管狀的菌絲含有原生質(zhì),在高倍顯微鏡下透過細胞壁可見其呈粒狀或點狀。
分枝:如菌絲不太短,則多數(shù)呈分枝狀,分枝與主干的直徑幾乎相同,有分枝是鑒定霉功得出可靠的特征之一。
菌絲的頂端:常呈鈍圓形。
無折射現(xiàn)象。
凡有以上特征之一的絲狀均可判定為霉菌菌絲。
觀察視野中有無菌絲,凡符合下列情況之一者為陽性視野。
一根菌絲長度超過視野直徑1/6;
一根菌絲長度加上分枝的長度超過視野直徑1/6;
兩根菌絲總長度超過視野直徑1/6;
三根菌絲總長度超過視野直徑1/6;
一叢菌絲可視為一個菌絲,所有菌絲(包括分枝)總長度超過視野直徑1/6。
根據(jù)對所有視野的觀察結(jié)果,計算陽性視野所占比例,并以陽性視野百分數(shù)(%)報告結(jié)果。計算公式:
每件樣品陽性視野(%)=(陽性視野數(shù) / 觀察視野數(shù))×100