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菌落計(jì)數(shù)的計(jì)數(shù)和培養(yǎng)步驟

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-04-09
核心提示: 樣品的稀釋固體和半固體樣品 稱取25 g置盛有225 mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi),8000 r/min~10000 r/min均
 
樣品的稀釋

固體和半固體樣品

稱取25 g置盛有225 mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi),8000 r/min~10000 r/min均質(zhì)1min~2 min,或放入盛有225 mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2 min,制成1:10的樣品勻液。

 

液體樣品

以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠)中,充分混勻,制成1:10的樣品勻液。

上步完成后,用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL,沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻,制成1:100的樣品勻液。

移液過程使用的器具,都應(yīng)避免微生物污染。使用耐高壓移液槍,核查洗耳球無菌程度,避免移液槍觸及均質(zhì)袋或試管內(nèi)壁……

樣品勻液完成后,可按相同操作,制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次,換用1次1mL無菌吸管或吸頭。

根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì),選擇2個(gè)~3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液),在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí),吸取1 mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi),每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí),分別吸取1 mL空白稀釋液加入兩個(gè)無菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。

之后,及時(shí)將15 mL~20 mL冷卻至46℃的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于46 ℃±1 ℃恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿,并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。

培養(yǎng)和計(jì)數(shù)


樣品稀釋完成后,就要進(jìn)行培養(yǎng)和菌落計(jì)數(shù)了

待瓊脂凝固后,將平板翻轉(zhuǎn),36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h。水產(chǎn)品30℃±1℃培養(yǎng)72h±3h。

 

如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時(shí),可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基 (約4mL),凝固后翻轉(zhuǎn)平板,按相同條件進(jìn)行培養(yǎng)。

 

培養(yǎng)完成后,就要進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)了,計(jì)數(shù)可用肉眼觀察,必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器,記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位(colony-forming units, CFU)表示。

 

選取菌落數(shù)在30 CFU~300 CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30 CFU的平板記錄具體菌落數(shù),大于300 CFU的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。

 

大片菌落

其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長時(shí),則不宜采用,而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù);若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2,代表一個(gè)平板菌落數(shù)。

鏈狀生長

當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時(shí),則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。

 

 

結(jié)果與報(bào)告

 

為了生成結(jié)果和報(bào)告,需要根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果和公式計(jì)算出菌落總數(shù)。需要注意的是,對(duì)于菌落數(shù)量不同的培養(yǎng)皿,計(jì)數(shù)原則有所不同。 

若所有平板上為蔓延菌落而無法計(jì)數(shù),則報(bào)告菌落蔓延。若空白對(duì)照上有菌落生長,則此次檢測結(jié)果無效。

稱重取樣以CFU/g為單位報(bào)告,體積取樣以CFU/mL為單位報(bào)告。

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編輯:songjiajie2010

 
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