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一次性使用衛(wèi)生用品的微生物檢測(cè)方法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2023-06-25
核心提示:一PART產(chǎn)品采集與樣品處理 于同一批號(hào)的三個(gè)運(yùn)輸包裝中至少抽取12個(gè)最小銷售包裝樣品,1/4樣品用于檢測(cè),1/4樣品用于留樣.
PART
產(chǎn)品采集與樣品處理

 

于同一批號(hào)的三個(gè)運(yùn)輸包裝中至少抽取12個(gè)最小銷售包裝樣品,1/4樣品用于檢測(cè),1/4樣品用于留樣.另1/2樣品(可就地封存)必要時(shí)用千復(fù)檢。抽樣的最小銷售包裝不應(yīng)有破裂,檢驗(yàn)前不得啟開。

100級(jí)凈化條件下用無菌方法打開用千檢測(cè)的至少3個(gè)包裝,從每個(gè)包裝中取樣,準(zhǔn)確稱取10g土1g樣品。剪碎后加人到200mL滅菌生理鹽水中,充分混勻,得到一個(gè)生理鹽水樣液。液體產(chǎn)品用原液直接做樣液。

如被檢樣品含有大量吸水樹脂材料而導(dǎo)致不能吸出足夠樣液時(shí),稀釋液量可按每次50mL遞增.直至能吸出足夠測(cè)試用樣液。在計(jì)算細(xì)菌菌落總數(shù)與真菌菌落總數(shù)時(shí)相應(yīng)調(diào)整稀釋度。

 

PART
細(xì)菌菌落總數(shù)與初始污染菌檢測(cè)方法

 

本方法適用于產(chǎn)品初始污染菌與細(xì)菌菌落總數(shù)(以下統(tǒng)稱為細(xì)菌菌落總數(shù))檢測(cè)。


1 操作步驟

待上述生理鹽水樣液自然沉降后取上清液作菌落計(jì)數(shù)。共接種5個(gè)平皿.每個(gè)平皿中加入1mL樣液.然后用冷卻至45℃左右的熔化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15~20mL倒入每個(gè)平皿內(nèi)混合均勻。待瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿35℃士2℃培養(yǎng)48h后,計(jì)算平板上的菌落數(shù)。


2 菌落總數(shù)計(jì)算

 

X1--細(xì)菌菌落總數(shù)CFU/g或CFU/mL

A--營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上的細(xì)菌菌落總數(shù);

K--稀釋度。

當(dāng)菌落數(shù)在100以內(nèi),按實(shí)有數(shù)報(bào)告,大于100時(shí)采用二位有效數(shù)字。

如果樣品菌落總數(shù)超過本標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定,按B2.3進(jìn)行復(fù)檢和結(jié)果報(bào)告。

3 復(fù)檢方法

將留存的復(fù)檢樣品依前法復(fù)測(cè)2次,2次結(jié)果平均值都達(dá)到本標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定,則判定被檢樣品合格;其中有任何1次結(jié)果平均值超過本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,則判定被檢樣品不合格。

 

PART
大腸菌群檢測(cè)方法

 

1 操作步驟

取樣液5mL接種50mL乳糖膽鹽發(fā)酵管,置35℃士2℃培養(yǎng)24比如不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣,則報(bào)告為大腸菌群陰性。

如產(chǎn)酸產(chǎn)氣,則劃線接種伊紅美藍(lán)瓊脂平板,置35℃士2℃培養(yǎng)18~24h,觀察平板上菌落形態(tài)。典型的大腸菌群為黑紫色或紅紫色,圓形,邊緣整齊,表面光滑濕潤,常具有金屬光澤,也有的呈紫黑色,不帶或略帶金屬光澤,或粉紅色,中心較深的菌落.

取疑似菌落1~2個(gè)作革蘭氏染色鏡檢,同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管,置35℃士2℃培養(yǎng)24h,觀察產(chǎn)氣情況。

2 結(jié)果報(bào)告

凡乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣.乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣,在伊紅美藍(lán)平板上有典型大腸菌落,革蘭氏染色為陰性,可報(bào)告被檢樣品檢出大腸桿菌。

 

PART
綠膿桿菌檢測(cè)方法

 

1 操作步驟

取樣液5ml,加人到50mLSCDLP培養(yǎng)液中,充分混勻,置35℃士2℃培養(yǎng)18~24h如有綠膿桿菌生長,培養(yǎng)液表面呈現(xiàn)一層薄菌膜,培養(yǎng)液常呈黃綠色或藍(lán)綠色。從培養(yǎng)液的薄菌膜處挑取培養(yǎng)物,劃線接種十六炾三甲基漠化欽瓊脂平板,置35℃士2℃培養(yǎng)18~24h,觀察菌落特征。綠膿桿菌在此培養(yǎng)基上生長良好,菌落扁平邊緣不整,菌落周圍培養(yǎng)基略帶粉紅色,其他菌不長。

取可疑菌落涂片作革蘭氏染色.鏡檢為革蘭氏陰性菌者應(yīng)進(jìn)行下列試驗(yàn):

氧化酶試驗(yàn)、綠膿菌素試驗(yàn)、硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)、42℃生長試驗(yàn)

綠膿菌素試驗(yàn):取2~3個(gè)可疑菌落,分別接種在綠膿菌素測(cè)定用培養(yǎng)基斜面,35℃士2℃培養(yǎng)24h,加人三氯甲燒3~5mL,充分振蕩使培養(yǎng)物中可能存在的綠膿菌素溶解,待三氯甲燒呈藍(lán)色時(shí),用吸管移到另一試管中并加入1mol/L的鹽酸1mL,振蕩后靜置片刻。如上層出現(xiàn)粉紅色或紫紅色即為陽性,表示有綠膿菌素存在。

 

2 結(jié)果報(bào)告

氧化酶及綠膿桿菌試驗(yàn)均為陽性者,即可報(bào)告被檢樣品中檢出綠膿桿菌。

如綠膿菌素試驗(yàn)陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和42℃生長試驗(yàn)三者皆為陽性時(shí),仍可報(bào)告被檢樣品中檢出綠膿桿菌。

 

PART
金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法


1 操作步驟

取樣液5mL.加人到50mLSCDLP培養(yǎng)液中,充分混勻,置35℃士2℃培養(yǎng)24h。

自上述增菌液中取1~2接種環(huán),劃線接種在血瓊脂培養(yǎng)基上,置35℃士2℃培養(yǎng)24~48h在血瓊脂平板上該菌落呈金黃色.大而突起,圓形,不透明,表面光滑,周圍有溶血圈。

挑取典型菌落,涂片作革蘭氏染色鏡檢,金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌,排列成葡萄狀,無芽胞與莢膜。鏡檢符合上述情況,應(yīng)進(jìn)行下列試驗(yàn):

甘露醇發(fā)酵試驗(yàn):取上述菌落接種甘露醇培養(yǎng)液,置35℃士2℃培養(yǎng)24h,發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸者為陽性。

血漿凝固酶試驗(yàn):玻片法:取清潔干燥載玻片,一端滴加一滴生理鹽水,另一端滴加一滴兔血漿.挑取菌洛分別與生理鹽水和血漿混合,5min如血漿內(nèi)出現(xiàn)團(tuán)塊或顆粒狀凝塊,而鹽水滴仍呈均勻混濁無 凝固則為陽性,如兩者均無凝固則為陰性。凡鹽水滴與血漿滴均有凝固現(xiàn)象,再進(jìn)行試管凝固酶試驗(yàn);

試管法:吸取1:4新鮮血漿0.5ml,放滅菌小試管中,加人等量待檢菌24h肉湯培養(yǎng)物0.5mL;靹颍35℃士2℃溫箱或水浴中.每半小時(shí)觀察一次.24h之內(nèi)呈現(xiàn)凝塊即為陽性。同時(shí)以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培養(yǎng)物各0.5mL作為陽性與陰性對(duì)照。

 

2 結(jié)果報(bào)告

凡在瓊脂平板上有可疑菌落生長,鏡檢為革蘭氏陽性葡萄球菌,并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸,血漿凝固酶試驗(yàn)陽性者,可報(bào)告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。

 

PART
溶血性鏈球菌檢測(cè)方法

 

1 操作步驟

取樣液5mL加入到50mL葡萄糖肉湯,35℃士2℃培養(yǎng)24h。

將培養(yǎng)物劃線接種血瓊脂平板,35℃士2℃培養(yǎng)24h觀察菌落特征。溶血性鏈球菌在血平板上為灰白色,半透明或不透明,針尖狀突起,表面光滑,邊緣整齊,周圍有無色透明溶血圈。

挑取典型菌落作涂片革蘭氏染色鏡檢,應(yīng)為革蘭氏陽性,呈鏈狀排列的球菌.鏡檢符合上述情況,應(yīng)進(jìn)行下列試驗(yàn):

鏈激酶試驗(yàn):吸取草酸鉀血漿0.2rnL(0.01g草酸鉀加5mL兔血漿混勻,經(jīng)離心沉淀.吸取上清液),加人0,8mL滅菌生理鹽水,混勻后再加入待檢菌24h肉湯培養(yǎng)物0.5mL和0.25%氯化鈣0.25ml,混勻放35℃士2℃水浴中,2min觀察一次(一般10min內(nèi)可凝固),待血漿凝固后繼續(xù)觀察并記錄溶化時(shí)間。如2h內(nèi)不溶化,繼續(xù)放置24h觀察,如凝塊全部溶化為陽性,24h仍不溶化為陰性。

桿菌膚敏感試驗(yàn):將被檢菌菌液涂布血平板上,用滅菌攝子取每片含0.04單位桿菌膚的紙片放在平板表面上,同時(shí)以已知陽性菌株作對(duì)照,在35℃士2℃下放置18~24h,有抑菌帶者為陽性。

2 結(jié)果報(bào)告

鏡檢革蘭氏陽性鏈狀排列球菌,血平板上呈現(xiàn)溶血圈鏈激酶和桿菌肽試驗(yàn)陽性.可報(bào)告被檢樣品檢出溶血性鏈球菌。


 

PART
真菌菌落總數(shù)檢測(cè)方法


1 操作步驟

待上述生理鹽水樣液自然沉降后取上清液作真菌計(jì)數(shù)。共接種5個(gè)平皿,每個(gè)平皿中加入1mL樣液,然后用冷卻至45℃左右的熔化的沙氏瓊脂培養(yǎng)基15~25mL倒人每個(gè)平皿內(nèi)混合均勻,瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置25℃士2℃培養(yǎng)7天,分別3、5、7天觀察,計(jì)算平板上的菌落數(shù),如果發(fā)現(xiàn)菌落蔓延,以前一次的菌落計(jì)數(shù)為準(zhǔn).

2 結(jié)果報(bào)告

 

X2--真菌菌落總數(shù),CFU/g或CFU/mL;

B--5塊沙氏瓊脂培養(yǎng)基平板上的真菌菌落總數(shù);

K--稀釋度。

當(dāng)菌落數(shù)在100以內(nèi),按實(shí)有數(shù)報(bào)告,大100時(shí)采用二位有效數(shù)字。

如果樣品菌落總數(shù)超過本標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定,進(jìn)行復(fù)檢和結(jié)果報(bào)告。

3 復(fù)檢方法

將留存的復(fù)檢樣品依前法復(fù)測(cè)2次,2次結(jié)果都達(dá)到本標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定,則判定被檢樣品合格;其中有任何1次結(jié)果超過本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,則判定被檢樣品不合格。

 

PART
真菌定性檢測(cè)方法


1 操作步驟

取樣液5mL加人到50mL沙氏培養(yǎng)基中、25℃士2℃培養(yǎng)7天,逐日觀察有無真菌生長。

2 結(jié)果報(bào)告

培養(yǎng)管混濁應(yīng)轉(zhuǎn)種沙氏瓊脂培養(yǎng)基,證實(shí)有真菌生長,可報(bào)告被檢樣品檢出真菌。


編輯:songjiajie2010

 
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關(guān)鍵詞: 衛(wèi)生
 

 
 
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