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大家好
告別期盼已久的新年假期
迎來緊鑼密鼓的開工日子
迎著開工的陽光
擼起袖子加油干！
節(jié)前1月21-22日
“食品微生物實驗室技能提升專題培訓(xùn)班”
線上直播完美收官
課程結(jié)束后
小伙伴們提出了工作中的一些疑問
雖然老師進(jìn)行了耐心的解答
小伙伴們感覺有些問題理解不到位
希望有文稿版的
利于鞏固學(xué)習(xí)
小編根據(jù)小伙伴們反饋的問題
經(jīng)過認(rèn)真回聽課程
對于老師們的答疑進(jìn)行一一整理
由于內(nèi)容較多
將分批分享給大家
請各位小伙伴查收今日份的知識
標(biāo)準(zhǔn)菌株存活性怎么進(jìn)行？
答：標(biāo)準(zhǔn)菌株存活性就是其的復(fù)活過程，我們購買的標(biāo)準(zhǔn)菌株一般是凍干粉或者凍干管，然后我們要對其進(jìn)行復(fù)活培養(yǎng)，這個過程是必須的，否則我們沒有辦法使用。針對其存活性的驗證，所有的標(biāo)準(zhǔn)法規(guī)中都是其存活性的判斷，一個定性的判斷。復(fù)活的過程對其進(jìn)行打管，按照標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行培養(yǎng)，如果接種到液體培養(yǎng)，有肉眼可見的渾濁或者進(jìn)一步鏡檢時有目標(biāo)微生物生長；如果接種到固體培養(yǎng)上，有肉眼可見的菌落，這些都叫存活性合格。
什么算標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物？
答：標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物是根據(jù)客戶需求生產(chǎn)的一種產(chǎn)品。標(biāo)準(zhǔn)菌株到標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株的過程，我們的法規(guī)對菌株的確認(rèn)、保藏、管理的生物安全要求是很高的，而符合標(biāo)準(zhǔn)的商業(yè)派生菌株可以直接使用。但是商業(yè)派生菌株的可追溯性一定是專業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)菌株機(jī)構(gòu)授權(quán)的。
購買的標(biāo)準(zhǔn)菌株，證書上寫的是3代，這個怎么理解從菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代？
答：如果證書上寫的是3代的話，那就是商業(yè)派生菌株，就不是標(biāo)準(zhǔn)菌株，也就不是理解的0代標(biāo)準(zhǔn)菌株。
GB 4789系列什么情況下應(yīng)作陽性對照，假如檢測50批樣品致病菌都是陰性結(jié)果，需要人工污染樣品做陽性對照來做質(zhì)控嗎？
答：GB 4789.1里規(guī)定要定期進(jìn)行，沒有明確說什么時候進(jìn)行。自己實驗室需要制定sop進(jìn)行規(guī)定，比如我們實驗室總是檢出某個致病菌的陽性結(jié)果，就規(guī)定一個月的時間來進(jìn)行陽性對照。保證實驗室人員具有可以持續(xù)進(jìn)行陽性檢出的能力的。最新的RB/T 038-2020 食品微生物檢測結(jié)果質(zhì)量監(jiān)控指南文件里規(guī)定：對于日常質(zhì)量監(jiān)控,應(yīng)執(zhí)行檢測方法的規(guī)定，否則建議每批或每組樣品每20個樣品1次的頻次進(jìn)行；質(zhì)控不一定需要人工污染樣品來做，可以用標(biāo)準(zhǔn)菌株來做陽性和陰性對照。
怎樣確認(rèn)菌株的存活性，純度和關(guān)鍵特征指標(biāo)，怎樣才算合格？
答：存活性第一的問題已經(jīng)講解了。純度要從菌落形態(tài)、顯微鏡里的形態(tài)去確認(rèn)其是否符合其標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)；關(guān)鍵特征指標(biāo)根據(jù)預(yù)期使用目的，標(biāo)準(zhǔn)方法的要求對標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行確認(rèn)；存活性生長、純度是純的、關(guān)鍵特征指標(biāo)符合預(yù)期的標(biāo)準(zhǔn)就算合格。
我們已經(jīng)磁珠凍存好菌種了，沒有做菌種確認(rèn)，現(xiàn)在可以補(bǔ)救嗎？菌種在0.85生理鹽水過夜培養(yǎng)，里面沒有營養(yǎng)成分，怎么能叫一代呢？
答：可以補(bǔ)救。一般沒有用0.85生理鹽水過夜培養(yǎng)的，0.85生理鹽水一般是用作稀釋液，不能為標(biāo)準(zhǔn)菌株提供營養(yǎng)液的不能叫一代。
除商業(yè)派生菌株外，從同行中獲得的，也是從認(rèn)可的菌種中心獲得的，是否也認(rèn)可？
答：可以認(rèn)可。但是前提是要有溯源性的文件，拿到后也要對其進(jìn)行確認(rèn)的。
老師，工作菌株和儲存菌株，在文件上有沒有具體要求。在我們自己的文件，冷藏保存，斜面TSA儲存菌株要求7天，液體TSB工作菌株要求3天，對于我們來說，儲存時間有些短，不知道GB有沒有相關(guān)文件要求說明
答：沒有。澳大利亞有個推薦標(biāo)準(zhǔn)有說到斜面可以存儲幾天、液體可以儲存幾天。如果我們實驗室要延長某個或者某一類菌種的儲存，需要進(jìn)行驗證其時間是可以的，然后修改我們的文件規(guī)定來延長其保存的時間。
-20℃菌株保存有相關(guān)的可參照標(biāo)準(zhǔn)嗎？
答：沒有。GB 4789.28里說較高的溫度儲存是可以的，但是在較高溫度下貯存時間是多長時間，實驗室要根據(jù)需要進(jìn)行數(shù)據(jù)驗證。
比如在供應(yīng)商處買的凍干粉形式的質(zhì)控菌株是商業(yè)派生菌株還是標(biāo)準(zhǔn)菌株？
答：要看供應(yīng)商提供的溯源性文件是誰制造的。
關(guān)鍵特性如何做？
答：要看預(yù)期的目的，比如要做沙門氏菌就要看其關(guān)鍵特性是否符合沙門氏菌的特性。
人工污染樣品菌懸液的濃度如何確定？
答： 人工污染樣品就是要模擬天然的樣品，人工污染樣品菌懸液的濃度就要參考實際樣品中的這種菌種的濃度來定，如果實際樣品檢出率很低或者沒有檢出過，那么它的可能存在的濃度是很低的，你的人工污染樣品菌懸液的濃度也要降低（比如100CFU左右）來做。
請問買的定量工作菌株（100cfu直接用的）可以直接用嗎，要驗收嗎？
答：可以直接用的，對于驗收沒有硬性的規(guī)定。你可以信息層面的驗收。一般的定量工作菌株生產(chǎn)商都有一個嚴(yán)格的控制的，比如對運輸?shù)姆�(wěn)定性也是做了評估的，買的定量工作菌株要是專業(yè)的機(jī)構(gòu)的。
植物乳桿菌用什么培養(yǎng)基做純化，和做什么關(guān)鍵特性呢？
答： 植物乳桿菌就用MS就可以，關(guān)鍵特性要看標(biāo)準(zhǔn)的要求。
菌種保存是否一定要-70度保存，可以-50度保存嗎？
答： 要根據(jù)設(shè)備的特性來的，-70度的冰箱你可以調(diào)到-50度保存，但是提高溫度對其長期的保存會有影響的，保存期要進(jìn)行驗證的。
已經(jīng)凍存好的標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株每年都需要確認(rèn)么？
答： 如果按照設(shè)備的條款下的話，每年要進(jìn)行一次期間核查的要求，相當(dāng)于每年要做一次確認(rèn)。不同的核查老師對這個要求掌握是不一樣的。個人認(rèn)為，從專業(yè)的角度講每年進(jìn)行一次確認(rèn)還是有必要的。
標(biāo)準(zhǔn)菌株具體怎么去做陽性、陰性對照， 直接加入樣品當(dāng)成樣品去嗎？
答：不是的，如果陽性、陰性對照直接加入樣品里，沒有檢出來的話，你就沒有辦法判斷你添加的數(shù)量不對還是你的菌株有問題。建議直接用純的陽性、陰性菌株來做對照。
2代-80度凍干磁珠管取出一顆磁珠置BHI過夜培養(yǎng)，培養(yǎng)后菌懸液再劃斜面，是不是斜面就是第四代了？BHI過夜培養(yǎng)的目的不是復(fù)活菌株么，能算一代嗎？
答：是的，斜面就是第四代了，BHI過夜培養(yǎng)肯定算一代的（因為BHI為菌株提供營養(yǎng)）。
標(biāo)準(zhǔn)菌株從同行獲得，但菌種清單會有購買單位，不是本單位，然后菌種說明書之類的復(fù)印過來也是可以的嗎？自己再做好驗證確認(rèn)是不是就可以了？
答： 不建議從同行流轉(zhuǎn)的方式獲得。這個溯源鏈有點長，期間的還有運輸、包裝的過程，同行也沒辦法為你提供什么時間為你提供菌株的證明。還是建議溯源鏈，從實驗室直接到菌株保藏中心的。
請問老師，制備一定濃度的菌懸液怎么去測這個濃度，除了菌落計數(shù)法，在有的試驗里面這個菌懸液制備了就立馬要用？比如抗菌試驗需要用到一定濃度范圍的菌懸液？
答：如果是抗菌試驗，你就要預(yù)試驗，把前面的菌懸液制備的各個標(biāo)準(zhǔn)做個標(biāo)準(zhǔn)化，保證制備完第二次可以直接用。
標(biāo)準(zhǔn)菌株期間檢查主要檢查些什么？
答： 這個跟確認(rèn)過程是一樣的，確認(rèn)其存活性、純度、關(guān)鍵特性等。
打管復(fù)活時吸取0.5ml液體培養(yǎng)基溶解后全部移到4-5ml液體培養(yǎng)基后打管的殘留影響菌株的濃度嗎？
答：不影響，因為打管復(fù)活是定性的過程。
